• 한국가축번식학회지
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• 제25권4호
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• pp.409-419
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• 2001

본 실험은 PF과 FPP가 소와 사람 동결 정자에 첨가되었을 때 응해 후 정자의 체외 생존성, 운동성 그리고 intact acrosome 향상에 기여할 수 있는지의 여부를 조사하고자 실시하였다. 사람의 정액은 TYB 동결 배양액을 사용하여 초 급속 동결하였다 PF과 FPP 첨가 효과는 각각의 시약이 동결-응해된 소나 사람 정자의 현미경적 조사에 의한 운동성에 미치는 영향과 Coomassie brilliant blue 염색방법에 의한 intact acrosome의 비율에 미치는 영향으로 조사하였다. Bovine 동결 응해 정자에 PF을 첨가하여 운동성을 조사하였던 바, 5 mM 처리군 (50.0%)이 대조군 (34.0%) 보다 유의하게 높은 운동성을 보여주었다 (F＜0.05). 동결 응해된 소 정자에 FPP를 농도에 따라 처리하여 intact acrosome을 조사하였던 결과, 50 nM 치리춘 (49%)이 대조군과 25 nH 처리군 (30.0, 38.0%) 보다 유의하게 많은 intact한 acrosome을 유지하였다 (P＜0.01). 사람 정자에서 동결에 앞서 PF을 농도에 따라 첨가하여 동결 응해 후 운동성을 조사한 결과, 5.0 mM 처리군 (51.0%)이 대조군과 2.5 mM (39.0, 40.0%) 처리군의 운동성보다 높았다 (P＜0.01). 사람 정액의 모든 동결 처리과정 (동결전, 동결, 응해후)에서 50 nM (75.5%) FPP 첨가가 intact acrosome percentage 유지하는데 유의한 효과가 있었다 (대조군: 45.0; 25 nM: 53.0; 100 nM: 68.0%) (P＜0.01). PF와 FPP 첨가하여 사람 정자의 동결융해 후 운동성과 intact acrosome에 미치는 영향을 동시에 비교해본 결과, 운동성에서는 PF 처리군이 약간 높지만 intact acrosome rate는 FPP 처리군의 결과 (65.0%)가 PF 처리군 (43.0%)보다 유의하게 높았다 (P＜0.05). 따라서 본 실험은 동결-융해된 소 정자에 PF이나 FPP 첨가는 정자의 운동성이나 intact acrosome 비율을 좀더 개선시킬 수 있고, 특히 사람 정자는 동결 전 과정에 FPP를 첨가하는 것이 정자의 체외 생존성, 운동성 그리고 intact acrosome을 유의하게 향상시킬 수 있다는 것을 시사한다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제11권2호
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• pp.69-76
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• 1984

In order to obtain high proportion of Y sperm the semen was laid over 6%,10% and 20% bovine serum albumin. Separated sperm were stained with quinacrine mustard in order to see F - body which could be seen in human Y sperm. But we could'nt find F-body in the bull sperm. So sperm were compared with size of sperm head. As a result of observation separated sperm was small in size of length and width of sperm head as compared with control sperm. So it was found that the proportion of Y sperm showed a marked increase in separated layer. Then the higher albumin density was, the higher the proportion of Y sperm which had smaller head and faster motility was. But the higher albumin density was, the lower the recovery rate of sperm was. So it was hard to separate Y sperm in oligospermia.

• Journal of Animal Science and Technology
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• 제65권6호
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• pp.1205-1213
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• 2023

The goals of the present study were to develop a simple method for obtain highly purified pig sperm hyaluronidase (pHyase) and to assess its activity, function, and safety. In mammals, sperm-specific glycophosphatidylinositol (GPI)-anchored Hyase assists sperm penetration through the cumulus mass surrounding the egg and aids in the dispersal of the cumulus-oocyte complex. Recently, Purified bovine sperm hyaluronidase (bHyase) has been shown to enhance therapeutic drug transport by breaking down the hyaluronan barrier to the lymphatic and capillary vessels, thereby facilitating tissue absorption. Commercially available Hyase is typically isolated from bovine or ovine; which have several disadvantages, including the risk of bovine spongiform encephalopathy, low homology with human Hyase, and the requirement for relatively complex isolation procedures. This study successfully isolated highly purified pHyase in only two steps, using ammonium sulfate precipitation and fast protein liquid chromatography. The isolated Hyase had activity equal to that of commercial bHyase, facilitated in vitro fertilization, and effectively dissolved high molecule hyaluronic acid. This simple, effective isolation method could improve the availability of pHyase for research and clinical applications.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제25권3호
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• pp.331-340
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• 1998

본 연구에서는 돼지 난자내에 돼지정자, 여러 가지 처리된 정자두부 (1% Triton, 0.1% Trypsin, 100mM NaOH)및 이종정자 (소, 쥐, 사람)를 미세 주입한 후 난 활성과 웅성 전핵형성, 전핵의 이동 및 배발달을 관찰하였다. 전자현미경으로 관찰한 결과 Triton X-100을 처리하였을 때 첨체가 제거되었으나 핵 주변 물질은 제거되지 않았고 Trypsin 또는 NaOH를 처리 할 경우 핵주변 물질 (perinuclear material)이 제거됨을 볼 수 있었다. 돼지 난자는 정자, 정자두부 및 Triton X-100을 처리한 정자두부의 주입을 통해 난 활성이 유도되었으며 쥐, 소, 사람의 정자를 주입하였을 때 난 활성이 유도되고 정상적인 전핵형성이 이루어졌다. 그러나 정자꼬리나 Trypsin 또는 NaOH에 의해 정자 핵주변 물질(perinuclear material)이 제거된 정자두부를 주입하였을때는 난 활성은 야기되지 않았다. 유사분열 및 2-세포기까지 정상적인 수정은 동종의 정자 및 정자두부를 주입한 난자에서 관찰할 수 있었으나 이 종정자를 주입한 난자에서는 관찰되지 않았다. 또한 상실배 및 배 반포까지 정상적인 수정은 동종의 정자 및 정자두부를 주입한 난자에서 관찰할 수 있었다. 이러한 결과는 돼지에서 정자 및 정자두부의 미세주입에 의해 수정이 이루어지는 것을 시사하며 수정시 정자유래의 난할성인자는 정자 핵주변 물질(porinuclear material)에 존재하며 종특이적이지 않다는 것을 보여주는 것이다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제17권1호
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• pp.13-21
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• 2002

Intracytoplasmic Sperm Injection (ICSI) has been widely used fur both human infertility and basic research. However, the high incidence of chromosomal abnormality is severe problem in cattle. Various oocyte activation stimuli, therefore, were compared by assessment of developmental capacity and chromosome analysis. Motile sperm selected by Percoll-density gradient were treated with 5 mM dithiothreitol (DTT) and injected into an oocyte matured fur 24 h. Eggs were then allocated into 5 treatment groups. Group 1 (control), sperm injection was performed without any further activation stimuli to the oocytes. Group 2 (handled control), sham injection was performed without sperm. In Group 3, oocytes exposed to 5 (M ionomycin for 5 min at 39(C. Group 4. ionomycine + 1.9 mM demethylaminopurine (DMAP, 3 h) and Group 5, ionomycine + 3 h culture in Ml99 + DMAP. Cleavage and the later development rate in Groups 1, 2 and 3 were significantly (P<0.05) lower than those in Groups 4 and 5. The incidence of chromosomal abnormality in the embryos treated directly with DMAP after ionomycine was relatively higher than in the embryo of Group 3 h, delayed DMAP treatment. From this results DMAP caused to be arrested the release of the 2nd polar body, resulting in changes of chromosomal pattern. Therefore, the time interval between ionomycin and DMAP is a crucial role in bovine ICSI.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제29권4호
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• pp.235-239
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• 2005

This study was conducted to test whether the transgenic cattle pass the transgene to their progeny through germ cells, and whether the transgene is expressed in the mammary gland of ransgenic cows. Two male ransgenic calves were born from IVF-derived embryos injected with bovine $\beta-casein/human$ lactoferrin fusion gene and then grew up to be reproducible. Semen was collected from a transgenic bull after 18 mon of age and then frozen. Bovine oocytes matured in vitro were fertilized with spermatozoa of the transgenic bull and cultured in $50\;{\mu}L$ drops of CRlaa medium supplemented with 3 mg/mL BSA. After 48 h of culture, cleaved embryos were determined for the presence of transgenes by DNA polymerase chain reaction (PCR). Proportion of transgene positives among bovine embryos fertilized with sperm of the transgenic bull was $20.9\%$ (28/134). One of transgenic bulls did not produce transgenic sperm. Out of 34 calves produced from recipient heifers inseminated with semen of the other bull, 3 $(8.8\%)$ were transgenic animals (2 females and 1 male). Thus, one transgenic bull showed a low transmission frequency below Mendelian levels in both the IVF-derived embryos and his progeny. It was demonstrated by Southern blot that copy numbers of the transgene in the transgenic progeny enhanced about 1.8 times as compared to those of the founder bull The results demonstrate that the transgenic bull carrying human lactoferrin gene could pass his transgene to the progeny through germ cells, although he is a germ-line mosaic.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제14권6호
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• pp.754-758
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• 2001

Bovine oocytes with compact and complete cumulus cells were cultured for up to 24h in TCM199 buffered with 25mmol/l hepes and supplemented with 10% FBS (fetal bovine serum), 1mg/ml $17{\beta}$-estradiol, 20IU/ml hCG(human chorionic gonadotropin). All of the oocytes were divided into at 6 groups depending upon incubation times (control, 0 hour, 6 hours, 12 hours, 16 hours, 18 hours). To all experimental media, $200{\mu}g/ml$ puromycin was added at different incubation times mentioned above. Following these culture times, in vitro insemination was conducted with frozen-thawed bovine spermatozoa in medium BO (Brackett and Oliphant medium for in vitro insemination) with $10{\mu}g/ml$ BSA(bovine serum albumin) and 10 mg/ml heparin added. After 22h culture, the oocytes were fixed with acetic alcohol solution and stained with orcein acetic solution to evaluate sperm nuclear progression. Addition of puromycin after 0, 6 and 12 h of culture resulted in near of oocyte maturation at the M1 stage. Contrariwise, puromycin addition after 12 h of culture led to restoration of nuclear progression to M2 stage. On the one hand, puromycin affected the synthesis of Cyclin B protein that may be involved in the oocyte maturation and sperm capacitation for in vitro fertilization. The present study suggests the participation of protein synthesis, cyclin B, in the oocyte development from M1 to M2 stages in vitro.

• 한국수정란이식학회지
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• 제17권3호
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• pp.187-193
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• 2002

본 연구에서는 한방의학에서 가장 중요한 약재중의 하나인 녹용을 정자의 처리에 있어 녹용약침액 상태로 배양액에 첨가 후 정자에 미치는 영향을 운동성 측면에서 비교해 보았다. 정상정액군에서는 Ham's F-10 배양액에 0.3% BSA가 첨가된 배양액과 Ham's F-10 배양액에 0.3% BSA와 녹용약 침액이 같이 첨가된 배양액에서 24시간 배양한 정자의 운동성이 높았으며, 48시간동안 배양 후의 운동성은 BSh와 녹용약침액이 같이 들어간 경우에서 다른 배양액과 비교하여 높은 정자의 운동성이 관찰되었다. 무력정자증을 보이는 정액군에서도 같은 양상을 보여주었다. 본 연구의 결과로 미루어 녹용성분(녹용약침액)을 포함한 배양액의 처리가 정자의 회수율을 증진시키고, 체외배앙시 회수되는 정자의 운동성 유지에 상당한 효과가 있음을 알 수 있었고, 인공수정이나 시험관 아기 시술에 미치는 영향에 대한 추가의 연구가 필요하다고 사료된다.

• 한국가축번식학회지
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• 제22권2호
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• pp.195-202
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• 1998

본 연구에서는 돼지 난자 내에 돼지, 사람, 소 및 생쥐의 정자를 미세 주입한 후 전핵형성과ㅏ 전핵의 이동을 관찰하였다. 핵과 미세소관은 정자 주입 후 간접면역 형광염색을 실시한 후 공초점주사현미경으로 관찰하였다. 돼지 난자 내에 돼지정자를 직접 주입하였을 경우 일반적인 수정과정과 동일하게 정자중편부에서 성상체가 형성되었고, 이 성상체에 의해서 웅성 및 자성 전핵의 이동(44%), 유사분열(3%) 및 2-세포기(13%)까지 정상적인 수정이 이루어지는 것을 관찰할 수가 있었다. 반면에 이종(사람, 소 및 생쥐)의 정자를 돼지난자에 직접 주입하였을 경우 단위발생시 난 활성이 유도된 난자와 같이 난자자체에서 형성된 미세소관에 의해 전핵이 이동(47, 30 및 17%)하는 것을 볼 수가 있었다. 하지만, 접합체 형성 및 2-세포기로의 분리되는 과정은 관찰할 수 없었다. 이러한 결과로 돼지 난자 내에 이종의 정자가 주입되었을 때 정자의 핵은 비록이적으로 전핵으로 발달되고 난자 중심부로 이동된다는 것을 보여주는 것인데, 이때 전핵을 움직이는 것은 정자에서 유래된 중심체에 의한 것이 아니라 난자세포질 자체의 미세소관에 의한 것으로 관찰되었다.

• 한국가축번식학회지
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• 제3권1호
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• pp.41-47
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• 1979

This experiment was carried out to clarify the methods of the F-body test in human and the B-body test in buil and hog. The effect of pH and albumin concentration on the migration of X- and Y- sperm was also investigated. The results obtained were summarized as follows: 1. In the human semen, the frequency of sperm in which an F-body is visible was different by the fluorochrome. Namely, in case of quinacrine mustard, the F-body frequency was 48.8∼43.4 percent (average 49.6%), and in case of quinacrine dihydrochloride, that was 40.7∼50.8 percent (average 42.0%). 2. The frequency of a, pp.rance of B-body was 43.4${\pm}$1.3 percent in bull semen, and 45.5${\pm}$0.7 percent in hog semen. 3. A, pp.arance of B-body in bovine semen was increased due to duration of time after washing till 12 hours. 4. Separation of X- and Y- spermatozoa using diluents with different hydrogen ion concentration was impossible. 5. A, pp.arance of B-body separated in medium with 6, 10 and 20% ovalbumin was 51.1${\pm}$2.4, 50.6${\pm}$2.5 and 58.2${\pm}$3.0 percent, respectively, and those values were significiantly higher (p<0.01) than corresponding control values.