Replication protein A (RPA) is an essential single-stranded DNA binding protein in DNA processing. It is known that N terminal domain of RPA70 (RPA70N) recruits various protein partners including damage-response proteins such as p53, ATRIP, Rad9, and MRE11. Although the common binding residues of RPA70N were revealed, dynamic properties of the protein are not studied yet. In this study, we measured $^{15}N$ relaxation parameters ($T_1,\;T_2$ and heteronuclear NOE) of human RPA70N and analyzed them using model-free analysis. Our data showed that the two loops near the binding site experience fast time scale motion while the binding site does not. It suggests that the protein binding surface of RPA70N is mostly rigid for minimizing entropy cost of binding and the loops can experience conformational changes.
Recently, studies of 3D printing methods have been working in various applications. For example, the powder base method laminates the prints by using a binding or laser sintering method. However, the draw back of this method is that the post process is time consuming and does not allow for parts to be rapidly manufactured. The binding method requires the post process while the time required for the post process is longer than the manufacturing time. This paper proposes a UV curing binding method with an integrated piezo printing head system. The optimization of an arbitrary waveform generation for the control of a UV curable resin droplet was researched, in addition to developed optimized UV curing processes in multi nozzle ink jet heads.
In order to gain insight into the molecular changes at the protein level in plants exposed to low temperature for a long period of time (vernalization), proteome analyses of vernalization-treated Arabidopsis thaliana have been carried out by two-dimensional gel electrophoresis followed by matrix-assisted laser desorption/ ionization time-of-flight mass spectrometry. Fourteen proteins including ATP binding/GTP binding/translation elongation factor and glycine-rich RNA-binding protein 7 (GRP7) showed differential expression in vernalization-treated Arabidopsis thaliana. GRP7 showed the most dramatic increase in expression suggesting its involvement in response to vernalization treatment.
Kim, Bong-Gyu;Kim, Dae-Hwan;Hur, Hor-Gil;Lim, Jun;Lim, Yoong-Ho;Ahn, Joong-Hoon
Journal of Applied Biological Chemistry
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제48권3호
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pp.113-119
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2005
O-methylation mediated by O-methyltransferases (OMTs) is a common modification in natural product biosynthesis and contributes to diversity of secondary metabolites. OMTs use phenylpropanoids, flavonoids, other phenolics and alkaloids as substrates, and share common domains for S-adenosyl-L-methionine (AdoMet) and substrate binding. We searched Arabiposis genome and found 17 OMTs genes (AtOMTs). AdoMet- and substrate-binding sites were predicted. AdoMet binding domain of AtOMTs is highly conserved, while substrate-binding domain is diverse, indicating use of different substrates. In addition, expressions of six AtOMT genes in response to UV and in different tissues were investigated using real-time quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction. All the AtOMTs investigated were expressed under normal growth condition and most, except AtOMT10, were induced after UV illumination. AtOMT1 and AtOMT8 were expressed in all the tissues, whereas AtOMT10 showed flower-specific expression. Analysis of these AtOMT gene expressions could provide some clues on AtOMT involvement in the cellular processes.
Over the past few decades, a considerable number of studies on the durability of concrete have been carried out extensively. A lot of improvements have been achieved especially in modeling of ionic flows. However, the majority of these researches have not dealt with the chloride binding isotherm based on the mechanism, although chloride binding capacity can significantly impact on the total service life of concrete under marine environment. The purpose of this study is to develop the model of chloride binding isotherm based on the individual mechanism. It is well known that chlorides ions in concrete can be present; free chlorides dissolved in the pore solution, chemical bound chlorides reacted with the hydration compounds of cement, and physical bound attracted to the surface of C-S-H grains. First, sub-model for water soluble chloride content is suggested as a function of pore solution and degree of saturation. Second, chemical model is suggested separately to estimate the response of binding capacity due to C-S-H and Friedel's salt. Finally, physical bound chloride content is estimated to consider a surface area of C-S-H nano-grains and the distance limited by the Van der Waals force. The new model of chloride binding isotherm suggested in this study is based on their intrinsic binding mechanisms and hydration reaction of concrete. Accordingly, it is possible to characterize chloride binding isotherm at the arbitrary stage of hydration time and arbitrary location from the surface of concrete. Comparative study with experimental data of published literature is accomplished to validity this model.
기존에 제안된 모바일 IPv6를 위한 바인딩 갱신 프로토콜은 이동노드가 홈 링크가 아닌 외부 링크로 이동할 때마다 동일한 프로토콜 과정을 반복한다. 뿐만 아니라 바인딩 갱신의 정해진 수명으로 인해 이동하지 않은 경우에도 동일한 과정을 수시로 반복해야 한다. 본 논문은 이 문제점을 해결하기 위해 티켓 기반의 바인딩 갱신 프로토콜을 제안한다. 제안하는 프로토콜은 대응노드가 발급한 티켓을 사용하여 빈번하게 발생할 수 있는 바인딩 갱신 과정을 최소화 한다. 모바일 IPv6의 보안 요구사항과 기존에 알려진 공격에 대한 프로토콜의 안전성을 분석하였으며, 기존에 제안된 바인딩 갱신 프로토콜과 성능을 비교하여 효율성을 분석하였다.
The signal pathways involved in the regulation of AP-1 DNA binding activity in long-term nicotine stimulated bovine adrenal medullary chromaffin (BAMC) cells have not been well characterized. To understand the involvement of second messengers in the regulation of AP-1 DNA binding activity, the present study was designed to define the time-course for inhibition of nicotine-induced responses by cholinergic antagonists, $Ca^{2+}$ and calmodulin (CaM) antagonists, and calcium/calmodulin-dependent protein kinase (CaMK) II inhibitor using electrophoretic mobility shift assay. Nicotine $(10{\mu}M)$ stimulation increased AP-1 DNA binding activity at 24 hr after treatment. Posttreatment with hexamethonium (1 mM) plus atropine $(1{\mu}M)$ (HA), nimodipine $(1{\mu}M),$ or calmidazolium $(1{\mu}M)$ at 0.5, 3, and 6 hr after the nicotine treatment significantly inhibited the AP-1 DNA binding activity increased by long-term nicotine stimulation. However, posttreatment with HA, nimodipine, or calmidazolium at 9 or 12 hr after the nicotine treatment did not affect the nicotine-induced increase of AP-1 DNA binding activity. The pretreatment of BAMC cells with various concentrations of KN-62 inhibited the increase of AP-1 DNA binding activity induced by nicotine in a concentration-dependent manner. KN-62 $(10{\mu}M)$ posttreatment beginning at 0.5, 3, or 6 hr after the nicotine treatment significantly inhibited the increase of AP-1 DNA binding activity. However, KN-62 posttreatment beginning at 9 or 12 hr after the nicotine treatment did not affect the increase of AP-1 DNA binding activity. This study suggested that stimulation (for at least 6 hr) of nicotinic receptors on BAMC cells was necessary for increase of AP-1 DNA binding activity, and activation of $Ca^{2+},$ CaM, and CaMK II up to 6 hr at least seemed to be required for the increase of nicotine-induced AP-1 DNA binding activity.
Dibenamine inhibited [$^{3}$H]quinuclidinyl benzilate ([$^{3}$H]QNB) binding in both concentration and incubation time-dependent manners. The $IC_{50}$/ value of dibenamine for the inhibition of the specific binding of 100 pM [$^{3}$'H]QNB following incubation of cerebral microsomes with dibenamine at 37.deg. C for 15 min was 20.mu.M. Dibenamine irreversibly decreased the binding site concentration for [$^{3}$H]QNB binding without affecting the affinity of [$^{3}$H]QNB for the muscarinic receptor. Analysis of the pirenzepine inhibition curve of [$^{3}$H]QNB binding to cerebral microsomes indicated the presence of two receptor subtypes with high(M$_{1}$ receptor, Ki=5nM) and low (M$_{2}$ receptor, Ki=160nM) affinity for pirenzepine. However, dibenamine(20.mu.M) treatment under the condition employed in these experiments caused steepening of the pirenzepine competition curve. The Ki value for pirenzepine in dibenamine treated-microsomes was approximately 120nM. suggesting a selective decrease in the number of M$_{1}$ receptor. Although dibenamine also inhibited [$^{3}$H]QNB binding to ventricular microsomes with $IC_{50}$/ value of 120.mu.M, the sensitivity for dibenamine in the ventricle was much lower than that in the cerebrum. These results indicate that dibenamine at low concentrations welectively inactivates the muscarinic M$_{1}$ receptor.
Tran, Ha Thi Thanh;Dang, Anh Kieu;Ly, Duc Viet;Vu, Hao Thi;Hoang, Tuan Van;Nguyen, Chinh Thi;Chu, Nhu Thi;Nguyen, Vinh The;Nguyen, Huyen Thi;Truong, Anh Duc;Pham, Ngoc Thi;Dang, Hoang Vu
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제33권10호
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pp.1683-1690
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2020
Objective: The rapid and reliable detection of the African swine fever virus (ASFV) plays an important role in emergency control and preventive measures of ASF. Some methods have been recommended by FAO/OIE to detect ASFV in clinical samples, including realtime polymerase chain reaction (PCR). However, mismatches in primer and probe binding regions may cause a false-negative result. Here, a slight modification in probe sequence has been conducted to improve the qualification of real-time PCR based on World Organization for Animal Health (OIE) protocol for accurate detection of ASFV in field samples in Vietnam. Methods: Seven positive confirmed samples (four samples have no mismatch, and three samples contained one mutation in probe binding sites) were used to establish novel real-time PCR with slightly modified probe (Y = C or T) in comparison with original probe recommended by OIE. Results: Both real-time PCRs using the OIE-recommended probe and novel modified probe can detect ASFV in clinical samples without mismatch in probe binding site. A high correlation of cycle quantification (Cq) values was observed in which Cq values obtained from both probes arranged from 22 to 25, suggesting that modified probe sequence does not impede the qualification of real-time PCR to detect ASFV in clinical samples. However, the samples with one mutation in probe binding sites were ASFV negative with OIE recommended probe but positive with our modified probe (Cq value ranked between 33.12-35.78). Conclusion: We demonstrated for the first time that a mismatch in probe binding regions caused a false negative result by OIE recommended real-time PCR, and a slightly modified probe is required to enhance the sensitivity and obtain an ASF accurate diagnosis in field samples in Vietnam.
H-NS는 대장균에서 DNA 결합 단백질로 수많은 유전자의 발현에 영향을 주는 것으로 잘 알려져 있다. DicA 단백질은 dicF, dicB의 발현을 억제하여 대장균의 분열을 조절한다. dicA의 발현에 Cnu, H-NS의 관여 여부는 CnuK9E 돌연변이가 $37^{\circ}C$에서 dicA의 발현을 억제하여 대장균이 길게 자라는 현상을 일으키며 처음 알려졌다. 하지만 Cnu와 H-NS 두 단백질이 어떻게 dicA의 발현을 조절하는지에 대한 분자적인 기작 연구는 잘 되어있지 않다. 본 연구에서 H-NS가 dicA와 dicC 유전자의 프로모터 부근에 염기서열 특이적으로 결합하며, $37^{\circ}C$ 보다 $25^{\circ}C$에서 DNA 더 잘 결합하는 것을 확인하였다. 그리고 EMSA를 통해 Cnu는 H-NS의 DNA 결합의 oligomeric state를 변화시키는 방식으로 작용하는 것을 보여주었다. In vivo transcription assay와 real time PCR을 통해 H-NS가 제거된 대장균에서 dicA 프로모터 활성이 높아지고, 분열 초기 dicA의 발현이 조절 받지 못하고 증가하는 것으로 보아, H-NS는 dicA의 발현에 억제자로서 기능한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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