• 한국미생물·생명공학회지
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• 제18권6호
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• pp.647-652
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• 1990

Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD1의 내 독소생산과 내독소단백질 유전자의 클로닝에 관한 연구를 하였다. 상기 균주는 아포생성기간 중에 이중피라미드형의 내독소를 생산하였고, 크리는 약 $2.9\times 1.0 \mu m$이었다. 상기 균주는 약 10개의 플라수미드 DNA를 가지고 있었으며, 플라스미드의 분자량의 범위는 2.1에서 80kilobases였다. 플라스미드 73kb, BamHI 절단 29Kb DNA 단편과 PstI 절단 7.9Kb DNA는 Probe DNA와 혼성화되었다. PstI 7.9Kb DNA를 추출하여 운반체인 pBR322 운반체의 PstI 절단부위에 삽입하여 클로닝한 후에 E.coli HB101 균주에 형질전환하였으며, 이 클로운을 pKL-20-1로 명명했고 이 형질전환체는 Bombyxmori 유충을 치사시키는 독소물질을 생산하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제24권2호
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• pp.173-177
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• 1996

Bacillus thuringiensis subsp. morrisoni PG-14 is a gram-positive soil bacterium producing mosquitocidal parasporal inclusions composed of several crystal proteins. Among these crystal protein genes, cryIVD gene is one of major component which has 72 kDa in size. However, these parasporal inclusions sink quickly from the surface of water where mosquito larval feeding occurred. To develope mosquitocidal cyanobacterium, therefore, we constructed the expression vector, pCYASK 5-1 harboring cryIVD gene. The expression vector, pCYASK5-1 was transformed into the cyanobacterium Syne- chocystis PCC6803 reported as a natural mosquito larval food source and the transformants were selected with kanamycin. Expression of IVD gene in transformant was characterized by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) and immunoblot analysis. The mosquitocidal activity of a transformant was determined with Culex tritaeniorhynchus. The results showed that, the transformed cyanobacterium is toxic to mosquito larvae and will be expected as a potential agent that is used for mosquito control.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제5권3호
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• pp.138-142
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• 1995

Bacillus thuringiensis strain BT-209 was isolated from a soybean grain dust sample in Korea. The strain BT-209 produced two different sizes of cuboidal crystals and one spore in the cell. In the biochemical characterization, the strain BT-209 showed negative reactions on the production of urease, and the utilization of citrate and sucrose. Examination of its antibiotic resistance revealed that while the strain BT-209 showed higher sensitivity than B. thuringiensis subsp. kurstaki HD-1 to ampicillin, bacitracin, chlortetracycline, gentamycin, neomycin, penicillin G, tetracycline and tobramycin, it was more resistant to methicillin than B. thuringiensis subsp. kurstaki HD-1. The $\delta$-endotoxin crystal of strain BT-209 consisted of three proteins with apparent molecular weights of appoximately 148, 135 and 62 kDa on a 10% SDS-PAGE. The strain BT-209 had at least eight different plasmids with sizes of 4.1, 5.2, 6.3, 8.6, 14.6, 24.5, 67.6 and 77.6 Kb. The strain BT-209 showed strong lethalities of 70% and 87% against Bombyx mori and Hyphantria cunea larvae. at 72 h, respectively.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제21권5호
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• pp.428-434
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• 1993

Cloning and expression of two different crystal protein genes from transformed Bacillus thuringiensis were investigated. B. thuringiensis NT0423 is toxic to both Lepidopterous and Dipte-rous larvae. The pCG5 vector carrying crystal protein genes (mosquitocidal and hemolytic activity) of B. thurigiensis subsp. morrisoni PG-14 was transformed into B. thurigiensis NT0423. Transformant has expressed two type crystals of bipyramid from NT0423 and ovoid from pCG5 in one cell.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제33권2호
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• pp.154-158
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• 2005

Twenty-three Bacillus thuringiensis strains isolated from Korea were screened to detect the cry-type genes using PCR with 21 specific oligonucleotide primers. Eight strains contained distinct multiple crystal genes; cry1Aa2, cry1Ab1, cry1Ac1 and cry2Aa1. These results indicate that the strains coincided with the B. thuringiensis subsp. kurstaki strain. The other 15 strains were not recognised to the 21 specific primers.

• Applied Biological Chemistry
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• 제41권2호
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• pp.137-140
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• 1998

딱정 벌레목 유충에 살충성을 나타내는 형질 전환 토마토 식물체를 4세대까지 분자 육종을 하였다. 분자 육종된 4세대 식물체에서 살충성 유전자인 B.t.t. 독소 유전자와 유전자가 발현되는 것을 확인하였다. 이 4세대 형질 전환 식물체는 독소 유전자 발현에 의해 딱정 벌레 유충에 살충성을 나타내고 있음이 확인 되었고, 4세대 형질 전환 식물체는 염색체는 2 배수체로 확인되어 정상적인 토마토 식물체임이 증명 되었다. 이 결과들은 형질 전환에 사용된 독소 유전자가 다음 세대로 안정되게 유전되고 있음을 나타내고 있다는 증거이다. 이러한 형질 전환된 식물체의 분자 육종은 농업에 있어서 현재의 일시적인 해충 방제에 비해 장기적인 해충 구제에 대한 새로운 방법의 가능성을 제시하고 있다고 하겠다.

• 한국잠사학회:학술대회논문집
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• 한국잠사학회 2003년도 제46회 춘계 학술연구 발표회
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• pp.31-32
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• 2003

Bacillus thuringiensis produces insecticidal parasporal inclusions (crystal protein) used as a major ingredient of most microbial insecticides. Although many B. thuringiensis strains and their crystal proteins have been isolated and characterized, such findings have limitation of usefulness. For enhanced toxicity, fast effects, and the delay of resistance development, research on genetic manipulation of crystal genes and proteins by genetic engineering should be continued. (omitted)

• 한국잠사곤충학회지
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• 제31권1호
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• pp.37-44
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• 1989

Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki, aizawai, dendrolimus, finitimus 그리고 israelensis의 결정성독소의 특성을 구명하기 위하여 이들 균주들이 생산하는 결정성독소들을 alkali용액, SDS용액, 누에소화액 그리고 부분정제된 누에소화액 protease에 용해시켜 전기영동을 실시 이들 독소의 저분자화 현상을 조사하였으며 또한 amino산 조성과 면역학적 특성을 조사하여 아래와 같은 결과를 얻었다. 1. Alkali 용액과 1% SDS-1% $\beta$-mercaptoethanol에 결정성독소들을 용해시킨 결과 subsp. kurstaki, dendrolimus, finitimus 그리고 aizawai로부터는 분자량 1.3$\times$105과 6.5$\times$104의 subunit가 주 band로 나타났고 subsp. israelensis에서는 분자량 4$\times$104과 1.4$\times$104의 subunit가 주 band로 나타났다. 2. 누에소화액에 의한 결정성독소의 분해상은 alkali용액이나 SDS-mercaptoethanol 처리때와 같은 pattern을 보여 주었다. 3. 부분정제된 누에소화액 protease로 결정성독소를 용해시켰을 경우 subsp. kurstaki, aizawai, finitimus에서는 분자량 1.3$\times$105의 subunit는 용해되어 거의 나타나지 않았고 6.0-6.4$\times$104의 subunit가 주 band로 나타났으며 subsp. dendrolimus에서는 분해 정도가 약하게 나타났고 subsp. israelensis에서는 alkali나 SDS 처리때와 비슷한 전기영동상을 나타냄으로써 누에소화액 protease에 의하여 용해되지 않았음을 보여 주었다. 4. 결정성독소의 amino산 조성은 subsp. israelensis에서는 aspartic산이 14.5%로 가장 많은 비율을 차지하였고 그외 4개의 subsp.에서는 glutamic산이 13.9-14.6%로 가장 많았다. 5. 결정성독소의 면역학적 특성을 보면 subsp. israelensis의 항체는 그것의 항원과만 반응하고 그외 4개의 subsp.의 항체는 각각의 항원과 그리고 서로 다른 항원과 교호하여 반응하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제17권9호
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• pp.1498-1503
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• 2007

To identify novel crystal proteins, Bacillus thuringiensis 2385-1 was isolated from Korean soil samples and characterized. The H-serotype of 2385-1 was identical to that of subsp. kenyae (H4a4c), and its crystal toxin was bipyramidal-shaped. However, 2385-1 showed a much higher toxicity towards Plutella xylostella and Spodoptera exigua larvae than subsp. kenyae. In addition, the crystal protein profile and plasmid DNA pattern of 2385-1 differed from those of subsp. kenyae. To verify the crystal protein gene types of 2385-1, a PCR-RFLP analysis was performed, and the results revealed that 2385-1 contained two novel cry1-type crystal protein genes, cryl-5 and cry1-12, in addition to the crylJal gene. The deduced amino acid sequences of cryl-5 and cry1-12 showed a 97.9% and 75.7% sequence similarity with the CrylAb and CrylJa crystal proteins, respectively. Among the novel crystal proteins, Cry1-5 showed a high toxicity towards P. xylostella and S. exigua larvae. In conclusion, B. thuringiensis 2385-1 is a new isolate in terms of its gene types, and should be a promising source for an insecticide to control lepidopteran larvae.

• 한국응용곤충학회지
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• 제48권4호
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• pp.509-517
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• 2009

국내에서 분리된 Bacillus thuringiensis subsp. aizawai CAB109균주가 난방제 해충으로 알려진 담배거세미나방과 파밤나방에 동시에 높은 독성을 보이는 것으로 나타났다. B.t. CAB109 균주의 활성을 평가하기 위해 혈청형이 aizawai이면서 미생물농약으로 시판중인 TB-WP제품 및 SC제품과의 살충활성을 비교한 결과, B.t. CAB109균주, TB-WP제품, SC제품은 담배거세미나방 2령충에 대한 반수치사농도($LC_{50}$)가 각각 $1.3{\times}10^5cfu/ml$, $2.3{\times}10^6cfu/ml$, $5.2{\times}10^5cfu/ml$으로 나타났고 파밤나방 2령충에 대한 반수치사농도는 $1.8{\times}10^4cfu/ml$, $1.3{\times}10^6cfu/ml$, $1.5{\times}10^6cfu/ml$으로 나타나 두 종 해충 모두에서 B.t. CAB109 균주가 독성이 더 높은 것을 볼 수 있었다. B.t. CAB109균주가 이미 알려져 있는 aizawai와 비교해 차이가 나는 새로운 유전자를 소유하는지 확인하기 위해 Plasmid DNA를 추출하여 전기영동 한 결과 B.t. subsp. aizawai HD-133과 다른 패턴을 보이는 것을 확인 할 수 있었고 Cry1-Cry5의 primer를 사용하여 PCR을 진행한 결과 B.t. subsp. aizawai CAB109균주는 Cry1Aa, 1Ab, 1C, 1D를 B.t. subsp. aizawai HD-133은 Cry1Aa, 1Ab를 가지고 있음을 확인 할 수 있었다.