• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제53권3호
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• pp.132-138
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• 2010

B. pseudomycoides로 부터 alanine racemase로 추정되는 유전자를 분리한 다음 6xHistidine 이 결합된 pET-21 운반체를 이용하여 E. coli BL21(DE3)에서 발현시키고 생화학 특성을 조사하였다. 재조합된 alanine racemase는 affinity chromatography를 이용하여 분리하였으며 SDS-PAGE 분석에서 약 46 kDa의 단일밴드를 나타내었다. 분리된 효소는 여러 아미노산 중에서 L-alanine에 대하여 가장 높은 활성도를 보이고 D-alanine에 대하여 두번째로 높은 활성도를 보였다. 따라서 분리된 효소는 alanine racemase로 판단되었다. 분리된 효소는 D-cysteine에 하여 상당히 저해가 되었다. 효소의 최적 활성도는 pH 9.0 근처에서 관찰되었고 산성의 조건보다는 알칼리의 조건에서 보다 안정하였다. 보효소인 PLP 0.3mM의 첨가에 의해 효소의 활성도는 약 70% 가량 증대되었다.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제53권4호
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• pp.195-201
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• 2010

B. pseudomycoides로 부터 alanine racemase 유전자를 분리한 다음 이 효소에 존재하는 두개의 cysteine을 하나(C316A) 또는 두개 모두(C316-365A) alanine으로 치환시켰다. 치환된 alanine racemamase는 pET-21 운반체에 삽입한 다음 숙주세포로서 E. coli BL21 (DE3)를 이용하여 발현시켰다. 발현된 단백질은 6XHis이 결합된 affinity chromatography를 이용하여 분리하였으며 SDS-PAGE 분석에서 모두 약 46 kDa의 주요 단일밴드를 나타내었다. Cysteine(-) 변이체의 alanine racemase가 모두 활성도를 보여 cysteine이 catalytic 또는 binding sit에 관여하지 않는 것으로 추정되었다. 변이체 효소들은 wild type에 비하여 열 안정성이 모두 떨어져 $60^{\circ}C$ pH 8.0에서의 활성도 반감시간이 각각 26(wild type), 21(C316A) 18분(C316-365A)-을 나타내었다. 이러한 결과는 cysteine이 열안정화에 상당히 기여함을 알 수 있었다. 그러나 pH 변화에 대한 안정성은 큰 차이가 없었다.

• 한국지하수토양환경학회지:지하수토양환경
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• 제19권2호
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• pp.38-43
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• 2014

In this study, we evaluated the methylene blue (MB) adsorption potential of non-treated and UV-C pretreated bacterial biomass from aqueous solution. The UV-C pretreatment denature the biomass and has increased overall functional groups when compared to non-treated biomass. The biosorbent was exposed to various pH, biomass dose, and contact time. The results showed that the dried and UV-C pretreated biomass effectively removed MB within 30 min. Dried and UV-C pretreated biomass of Bacillus pseudomycoides JH 2-2 showed a adsorption of 858.2 and 1072.4 mg/g at optimum conditions (pH: 9.0, contact time: 30 min, biomass dose: 1 g/L). Similarly, dried and UV-C pretreated biomass of Citrobacter freundii JH 11-2 showed an adsorption 868.3 and 954 mg/g at optimum conditions (pH: 9.0, contact time: 10 min, biomass dose: 1.5 g/L). The changes in the functional groups of UV-C pretreated biomass could be responsible for enhanced adsorption of MB. The results obtained have shown that non-treated and UV-C pretreated biomass has a high adsorption capacity for MB dye and can be used as a low-cost biosorbent in wastewater treatments.