• 미생물학회지
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• 제52권3호
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• pp.260-268
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• 2016

본 연구의 목적은 시중에 판매되고 있는 쌈장에서 용혈성을 가지는 Bacillus cereus MH-2를 분리하여, EGCG 노출에 따른 MH-2 균주의 세포 반응과 프로테옴 분석을 위해 수행되었다. 다양한 농도의 EGCG에 노출된 MH-2 균주는 노출시간이 증가함에 따라 생존률은 점차 감소함을 보였다. MH-2 균주의 alginate 생성량은 EGCG의 농도가 증가함에 따라 감소하였으며, 특정 EGCG 농도에서 노출시간이 진행됨에 따라 그 생성량은 증가하는 것으로 나타났다. SDS-PAGE 및 anti-DnaK와 anti-GroEL의 단일항체를 이용한 Western blot 통한 분석으로, 두 가지 스트레스 충격단백질인 70 kDa의 DnaK와 60 kDa의 GroEL의 발현은 대수생장기의 배양에서 EGCG의 농도에 비례하여 감소하는 것을 확인하였다. EGCG에 노출된 세균의 세포 외부형태 변화를 주사전자현미경을 이용하여 관찰한 결과, 세포 표면의 돌출부 생성과 함께 세포의 뭉그러짐이 관찰되었다. EGCG에 노출된 Bacillus cereus MH-2 배양의 수용성 단백질 부분에 대한 2-DE에서 20개의 단백질 스팟이 EGCG 노출에 의해 크게 변화하는 것이 확인되었다. 장독소(hemolysin BL lytic component L1, hemolysin BL-binding protein), chaperon (DnaK, GroEL), 세포방어요소(peptidase M4 family proteins), 에너지 및 물질대사 등에 수반되는 이들 단백질은 MALDI-TOF를 사용한 peptide mass fingerprinting에 의해 동정되었다. 이들 결과는 B. cereus MH-2에 대한 EGCG-유도 스트레스와 세포독성의 기작을 이해하는데 중요한 단서를 제공할 것이다.

• KSBB Journal
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• 제32권3호
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• pp.179-186
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• 2017

This study was undertaken to identify and characterize hemolytic Bacillus cereus isolated from commercial ssam-jang. The physiological and biochemical properties of isolate were first examined. Using the BIOLOG system, the isolate was identified and assigned to B. cereus MH-2. Phylogenetic tree of MH-2 was plotted based on 16S rRNA sequence comparisons. Hemolytic activity was observed around wells of sheep blood agar plates seeded with MH-2 cultures; the zone of hemolysis gradually increased with increasing incubation time of the cultures. Zymographic analysis estimated the molecular weight of the presumed hemolysis-causing molecule to be about 30 kDa. Survival rates of MH-2 cells decreased with increasing NaCl concentrations in the media. The stress shock proteins (e.g., DnaK and GroEL) induced by NaCl were reduced in proportion to the NaCl concentration and exposure period to B. cereus MH-2. Analysis of SDS-PAGE and Western blot revealed that the stress shock proteins, 70-kDa DnaK and 60-kDa GroEL were decreased proportionate to the NaCl concentrations as well as exposure period in exponentially growing cultures. Scanning electron microscopy demonstrated the presence of perforations and irregular rod forms with wrinkled surfaces in cells treated with NaCl.