• BMB Reports
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• 제34권2호
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• pp.134-138
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• 2001

By adding sodium chloride (2.5%) into a Bacillus amyloliquefaciens DJ-4 culture broth, two serine-type fibrinolytic proteases with a molecular weight of 29 (subtilisin DJ-4) and 38-kDa were stimulated on the SDS-fibrin zymogram or inhibitor gels. B. amyloliquefaciens DJ-4 showed the highest proteolytic activity (5.52 plasmin NIH unit/ml) on the fibrin plate based on the molar ratio when cells were subjected to the 2.5% NaCl. Using a fibrin plate, the secreted protease from this strain in the presence of 5% NaCl showed that about 49% of the enzyme's activity remained after incubation at $60^{\circ}C$ for 30 min, but as the salt concentration was increased (10% NaCl) the activity nearly disappeared (0.14 plasmin NIH unit/ml). However, through a fibrin zymography assay, three fibrinolytic enzymes (38, 53 and 80-kDa) from the cells in the presence of 10% NaCl were detected. Also, two salt-activated serine-type fibrinolytic professes (29 and 38kDa) showed thermostability from 65 to $70^{\circ}C$ for 30 min. Furthermore, these professes also showed stability, pH 6-11. In particular, 29-kDa (subtilisin DJ-4) was very stable in the pH range of 4-11 at $4^{\circ}C$ for 48 h.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제26권5호
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• pp.946-952
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• 2016

The eglS gene in Bacillus amyloliquefaciens encodes an endo-β-1,4-glucanase that belongs to glycosyl hydrolase family 5. In this study, a disruption mutant of gene eglS was constructed to examine its role in bacterial adaptation in plants. The mutant TB2_k, eglS gene inactivated bacterial strain, was remarkably impaired in extracellular cellulase activity. When inoculated on Brassica campestris, the TB2_k population was reduced by more than 60% compared with the wild-type strain in the root, stem, and leaf tissues. Overexpression of eglS in the wild-type strain increased the bacteria population in the plant tissues. Further studies revealed that the transcription level of eglS was correlated with bacterial population. These data demonstrate that endo-β-1,4-glucanase of B. amyloliquefaciens is required for its optimal endophytic colonization.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제14권3호
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• pp.525-531
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• 2004

A strain antagonistic to Fusarium solani, CHO104, was selected from approximately 100 microorganisms isolated from soil. Strain CHO104 was identified as Bacillus amyloliquefaciens and found to be Gram-positive based on the Biolog system and 16S rRNA methods. A culture broth of B. amyloliquefaciens CHO104 also exhibited antimicrobial activity against various microorganisms. As such, the EtOAc extract of the culture broth was isolated by various column chromatographic procedures and HPLC. The antimicrobial and antifungal substance was then characterized as macrolactin A $(C_{24}H_{34}O_5)$ using high-resolution EI-MS and NMR analyses, and found to be very effective in inhibiting the growth of Staphylococcus aureus, E. coli, and Botrytis cinerea, even when using a concentration of one-twentieth of the benzoic acid as the control compound.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제21권11호
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• pp.1166-1173
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• 2011

Meju is a traditional Korean fermented soy product used as a key element for soy sauce and doenjang. Bacilli with antimicrobial activity were isolated from meju prepared by traditional methods at Sunchang county, Jeollabukdo, Korea. Six isolates were identified as Bacillus amyloliquefaciens by recA gene sequencing and RAPD-PCR. One isolate, B. amyloliquefaciens MJ5-41, showed the strongest fibrinolytic activity. A 27 kDa active fibrinolytic enzyme, AprE5-41, was purified from the culture supernatant of MJ5-41 grown on LB by chromatographic methods. The optimum pH and temperature for purified AprE5-41 were 7.0 and $45^{\circ}C$, respectively. AprE5-41 quickly degraded $A{\alpha}$ and $B{\beta}$ chains but not the ${\gamma}$-chain of fibrinogen. AprE5-41 exhibited the highest specificity for N-succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe p-nitroanilide, a known substrate for ${\alpha}$-chymotrypsin, cathepsin G, and subtilisin BPN'. The structural gene, aprE5-41, was cloned by PCR and successfully expressed in B. subtilis.

• 한국균학회지
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• 제41권4호
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• pp.261-267
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• 2013

Pseudoperonospora cubensis에 의한 오이 노균병의 생물적 방제를 위하여 오이 재배단지의 오이 식물체 126균주를 분리하였다. 그 중에서 잎 절편 생물검정 통하여 5균주를 선발하였다. CC110균주는 오이노균병 예방과 치료효과 검정에서 전혀 병이 발생하지 않았지만 무처리는 15.0~18% 노균병이 발생하였다. CC110균주는 gyrB gene sequence 분석에 의하여 Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum로 동정하였다. CC110균주를 TSB배지에서 배양한 배양액은 LB, NB와 KB 배지에서 배양한 배양액보다 오이 노균병 발생이 적어 효과적이었다. CC110균주를 TSB배지에서 배양한 배양액의 원액, 2배와 5배 희석한 처리구에서 0%, 3.0%와 8.0% 그리고 배양여액을 원액, 2배와 5배 희석한 처리구에서 0%, 4.0%와 7.0% 노균병이 발생하였고, 무처리는 21.0% 발생하였다. 오이 유묘검정에서 CC110균주를 TSB배지에서 배양한 배양액은 오이 노균병이 35.0% 발생하였고 무처리는 82.0% 발생하였다. 비닐하우스 포장에서 오이 노균병에 대하여 B. amyloliquefaciens CC110균주를 5일 간격 4회 처리가 7일 간격 3회 처리보다 방제효과가 높았다.

• Journal of Animal Science and Technology
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• 제52권1호
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• pp.65-70
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• 2010

사료곡물을 효율적으로 이용하기 위해, 산성 cellulase를 분비하는 ATC6 균주를 선발하였다. 선발된 ATC6 균주의 형태, 당 이용성 및 16S rDNA 서열분석 등을 통해 동정한 결과 Bacillus amyloliquefaciens에 속하는 것으로 나타났으므로, B. amyloliquefaciens ATC6로 명명하였다. B. amyloliquefaciens ATC6가 분비하는 cellulase 효소의 활성은 대수생장기 중반부터 급격히 증가하였고, 균의 생장이 정체기에 이르면 효소의 활성도 더 이상 증가하지 않는 것으로 나타났다. 효소의 최적 pH를 조사한 결과, pH 4.5에서 최대의 효소 활성을 나타내었으며, pH 4.0에서도 최고 활성의 80% 이상을 유지하였다. 또한 pH 4.0~pH 8.0까지 상대적으로 넓은 범위에서 최대 활성의 60% 이상을 유지하였다. Cellulase 활성의 최적 온도는 $55^{\circ}C$ 이었으며, $75^{\circ}C$의 고온에서도 최대 활성의 50% 정도의 활성을 나타내었다. 효소의 열 안정성을 조사한 결과, $45^{\circ}C$ 및 $55^{\circ}C$에서는 2시간 후에도 효소의 활성이 안정하게 유지되었으나, $65^{\circ}C$에서는 시간의 경과와 함께 효소 활성이 급격히 감소하는 것으로 나타났다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제41권1호
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• pp.33-43
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• 2013

식품으로서 안전하게 섭취하여 혈전증을 사전에 예방하거나 개선할 수 있도록 하기 위하여, 전통적 방법으로 제조한 청국장으로부터 미생물을 분리하여 혈전분해 효소활성이 우수한 미생물을 선발 동정한 결과, Bacillus amyloliquefaciens HC188이라 명명하였다. 선발미생물이 생산하는 혈전분해효소를 분리 및 정제한 결과, 50.7배의 정제도와 5.5%의 수율을 나타내었고, 혈전분해 효소단백질의 분자량은 22.3 kDa이었으며, N-terminal 아미노산 서열은 Ala-Gln-Ser-Val-Pro-Tyr-Gly-Val-Ser-Gln-Ile-Lys-Ala-Pro-Ala로 분석되었다. 효소의 최적반응 pH와 온도는 pH 8.0과 $40^{\circ}C$로 나타났으며, pH 6.0-8.0과 $20-40^{\circ}C$ 사이에서 효소가 비교적 안정하였다. 금속이온에 대한 영향은 2 mM과 5 mM 농도의 $CoCl_2$와 $CaCl_2$의 금속이온이 존재할 때 효소활성이 증가하였으며, inhibitor로서 EDTA와 PMSF에 의해 효소활성이 저해되므로 청국장에서 분리한 B. amyloliquefaciens HC188가 생성한 혈전분해 효소는 metallo-serine protease로 사료되었다.

• 생명과학회지
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• 제19권11호
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• pp.1672-1678
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• 2009

B. amyloliquefaciens IUB158-03균주에서 정제된 항진균물질은 극성인 용매에 잘 용해되고, pH 6.0~10.0와 $-70{\sim}121^{\circ}C$에서와 같이 넓은 범위의 온도 및 pH에서 안정성을 보였다. 항진균물질의 FAB-MS, UV 흡수 스펙트럼, 아미노산 조성 등을 분석한 결과 분자량은 1,042 이었고, TLC를 이용하여 분석한 결과 ninhydrin solution에서 보라색으로 발색되었다. UV 스펙트럼은 220 nm, 277 nm에서 ${\lambda}max$를 보였으며, $Asn_3$, $Gln_2$, $Ser_1$ $Gly_1$, $Tyr_1$의 아미노산 조성을 갖는 것으로 나타났다. 그리고 $^1H$-NMR spectrum, $^1H$-COSY, HMQC 을 분석한 결과 iturin A계에 속하는 물질로 확인되었다. NIH3T3 섬유아세포에 대해 항진균물질이 세포독성을 나타내지 않는 것은 물론 마우스에 항진균물질을 경구투여하여 장기 내의 변화와 백혈구 수, 생체내의 생리적인 기능면에서 정상 마우스와 차이를 보이지 않았으므로 생체독성이 없는 것으로 나타났다. 따라서 본 연구를 통하여 B. amyloliquefaciens IUB158-03에서 분리된 항진균물질이 앞으로 고추탄저병의 생물적 방제제로 이용될 수 있는 잠재성을 갖고 있는 것으로 사료된다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제28권2호
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• pp.239-246
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• 2015

The present study was conducted to evaluate the effect of the dietary supplementation of Bacillus amyloliquefaciens-based direct-fed microbial (DFM) on growth performance, nutrient utilization, intestinal morphology and cecal microflora in broiler chickens. A total of two hundred and eighty eight 1-d-old Arbor Acres male broilers were randomly allocated to one of four experimental treatments in a completely randomized design. Each treatment was fed to eight replicate cages, with nine birds per cage. Dietary treatments were composed of an antibiotic-free basal diet (control), and the basal diet supplemented with either 15 mg/kg of virginiamycin as antibiotic growth promoter (AGP), 30 mg/kg of Bacillus amyloliquefaciens-based DFM (DFM 30) or 60 mg/kg of Bacillus amyloliquefaciens-based DFM (DFM 60). Experimental diets were fed in two phases: starter (d 1 to 21) and finisher (d 22 to 42). Growth performance, nutrient utilization, morphological parameters of the small intestine and cecal microbial populations were measured at the end of the starter (d 21) and finisher (d 42) phases. During the starter phase, DFM and virginiamycin supplementation improved the feed conversion ratio (FCR; p<0.01) compared with the control group. For the finisher phase and the overall experiment (d 1 to 42) broilers fed diets with the DFM had better body weight gain (BWG) and FCR than that of control (p<0.05). Supplementation of virginiamycin and DFM significantly increased the total tract apparent digestibility of crude protein (CP), dry matter (DM) and gross energy during both starter and finisher phases (p<0.05) compared with the control group. On d 21, villus height, crypt depth and villus height to crypt depth ratio of duodenum, jejunum, and ileum were significantly increased for the birds fed with the DFM diets as compared with the control group (p<0.05). The DFM 30, DFM 60, and AGP groups decreased the Escherichia coli population in cecum at d 21 and d 42 compared with control group (p<0.01). In addition, the population of Lactobacillus was increased in DFM 30 and DFM 60 groups as compared with control and AGP groups (p<0.01). It can be concluded that Bacillus amyloliquefaciens-based DFM could be an alternative to the use of AGPs in broilers diets based on plant protein.

• 미생물학회지
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• 제50권2호
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• pp.158-163
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• 2014

된장으로부터 mannanase 생산균으로 산성 배지에서 분리된 YB-1402는 그람양성 간균으로 포자를 형성하며, 16S rDNA 염기서열과 생화학적 성질이 Bacillus amyloliquefaciens와 가장 높은 유사도를 보였다. 분리균 YB-1402는 konjac을 3% 첨가한 LB 액체배지에서 약 150 U/ml의 최대 mannanase 생산성을 보였다. 분리균의 배양상등액을 사용하여 SDS-PAGE 활성염색을 실시한 결과 분자량이 약 38 kDa로 추정되는 한 종류의 mannanase만이 관찰되었으며, $55^{\circ}C$와 pH 5.5 반응조건에서 mannanase의 최대활성을 보였다. 특히 mannanase는 pH 3.0-10의 범위에서 1시간 방치하였을 때 실활되지 않은 특성을 지니고 있었다. Locust bean gum과 mannooligosaccharides를 mannanase로 분해하였을 때 mannose, mannobiose와 mannotriose가 최종 분해산물로 관찰되었으며 mannotriose 이상의 중합도를 갖는 mannooligosaccharides를 분해하는 것으로 확인되었다.