• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제25권8호
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• pp.1281-1290
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• 2015

Thermolysin and its homologs are a group of metalloproteases that have been widely used in both therapeutic and biotechnological applications. We here report the identification and characterization of a novel thermolysin-like protease, BtsTLP1, from insect pathogen Bacillus thuringiensis serovar Sichuansis strain MC28. BtsTLP1 is extracellularly produced in Bacillus subtilis, and the active protein was purified via successive chromatographic steps. The mature form of BtsTLP1 has a molecule mass of 35.6 kDa as determined by mass spectrometry analyses. The biochemical characterization indicates that BtsTLP1 has an apparent K_m value of 1.57 mg/ml for azocasein and is active between 20℃ and 80℃. Unlike other reported neutral gram-positive thermolysin homologs with optimal pH around 7, BtsTLP1 exhibits an alkaline pH optimum around 10. The activity of BtsTLP1 is strongly inhibited by EDTA and a group of specific divalent ions, with Zn²⁺ and Cu²⁺ showing particular effects in promoting the enzyme autolysis. Furthermore, our data also indicate that BtsTLP1 has potential in cleaning applications.

• Applied Biological Chemistry
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• 제35권5호
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• pp.361-366
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• 1992

토양전염 병원성 사상균인 Fusarium oxyporum, Rhizoctonica solani에 대하여 길항력을 갖는 균주 Bacillus subtilis를 근권 토양에서 분리하여 동정한 후 이들 균주의 사상균에 대한 길항력, 발아율 및 작물의 생육에 미치는 영향력을 검토하였다. 또한 이 균주의 chromosome에 Bacillus thuringiensis(BT) 독소유전자를 삽입하여 균주의 형질변환을 유도하였다. BT 독소 유전자는 southern blotting에 의하여 확인되었으나 이의 최종 생성물인 독소 단백질은 SDS-PAGE에 확인되지 않았다. 이들 형질변환된 균주의 생리 및 생화학적 특성을 조사한 결과 모균주와 차이는 없었으며, BT 독소유전자가 삽입된 균주는 선충의 유충에 대한 생물학적 검정에서는 효과가 인정되지 않았으나 누에에 있어서는 1X 균체 희석액에서 10내지 20% 정도의 치사율이 관찰되었다. 모균주와 BT 독소유전자에 의하여 형질변환된 균주 모두 발아율 및 작물의 생육을 향상시켰다.

• Food Science and Biotechnology
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• 제18권3호
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• pp.594-603
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• 2009

The genus Bacillus includes a variety of diverse bacterial species, which are widespread throughout the environment due to their ubiquitous nature. A well-known member of the genus, Bacillus cereus, is a food poisoning bacterium causing both emetic and diarrhoeal disease. Other Bacillus species, particularly B. subtilis, B. licheniformis, B. pumilus, and B. thuringiensis, have also recently been recognized as causative agents of food poisoning. However, reviews and research pertaining to bacilli have focused on B. cereus. Here, we review the literature regarding the potentially toxigenic Bacillus species and the toxins produced that are associated with food poisoning.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제11권3호
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• pp.223-231
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• 1983

Bacillus thuringiensis 16개 균주에서 Beta-exotoxin 생산을 연구하였다. 균주는 Conner-Han-sen Mineral Salts 배지에 시험균을 접종하여 28$^{\circ}C$에서 진탕배양을 한 후 Micrococcus flava을 이용하여 감수성과 생산능을 조사했고, Spectrophotometer를 이용하여 260nM에서 생산량량과 생산속도 등을 조사했다. 1. Bacillus thuringiensis의 돌연변이 균주BTK2-T1, BTK2-T13, BTK2-T17, BTK2-T33과 BTK2-T40은 Conner-Hansen 배지에서 배양 6시간부터 Stationary Phase에 접어들어 가서 48시간 배양과 별 차이를 나타내지 않았으나, Bata-exotoxin의 생산은 6시간 배양에서는 O.D. 260nm에서 약 1.0미만(약 40$\mu\textrm{g}$/$m\ell$)이였고, 12시간 배양에서는 O.D.260nm에서 약 1.7미만(약 70$\mu\textrm{g}$/$m\ell$) 이었으며, 24시간배양부터 48시간 배양에 서는 거의 증가를 보이지 않고 O.D. 260nm에서 2.0내지 2.3(약 85$\mu\textrm{g}$/$m\ell$)을 계속 유지했다. 48시간 배양균주들은 BTK2는 배지 $m\ell$당 80$\mu\textrm{g}$(5.5$\times$$10^{8}$ Cells/$m\ell$), BTK2-T13은 84$\mu\textrm{g}$(4.3$\times$$10^{8}$ Cells/$m\ell$), BTK2-T17은 87$\mu\textrm{g}$(1.4$\times$$10^{8}$ Cells/$m\ell$), 그리고 BTK2-T33은 84$\mu\textrm{g}$ (4.9$\times$$10^{8}$ Cells/$m\ell$)을 분비했다. 2. 다른 혈청형 균주들도 모두 Beta-exotoxin을 생산했는데, 48시간 배양 배지 $m\ell$당 70$\mu\textrm{g}$을 분비한 균주는 BTK-1이고, BTK-37 균주는 $m\ell$당 88$\mu\textrm{g}$(6.1$\times$$10^{8}$ Cells/$m\ell$) BTK-35 균주는 $m\ell$당 81$\mu\textrm{g}$(5.2$\times$$10^{8}$ Cells/$m\ell$)을 생산했고. 그외는 모두 70$\mu\textrm{g}$미만이었다. 3. Beta-exotoxin과 B. thuringiensis 균체을 동시에 per os, interaperitoneal injection, subcuntaneous injection, nasal cavity inoculation, intracerebral injection을 120시간 처리했어도 치사효과를 나타내지 않았다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제19권4호
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• pp.189-201
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• 1976

공업폐수를 이용하여 미생물 살충제를 생산하기 위하여 배양방법, 배양조건 및 생물학적 검정을 행한 결과는 다음과 같다. (1) B. thuringiensis avr. thuringiensis는 특히 나비목 해충에 유효한 ${\delta}-endotoxin$과 파리목에 유효한 fly-toxin을 생산하는 세균이다. (2) 제사공장에서 폐기되는 자견수를 영양원으로서 본 세균배양에 이용할 목적으로 분석한 결과 많은 량의 무기물과 단백질이 용으로부터 추출되어 나왔음을 알았다. (3) GYS 배지와 citrate salts배지를 만들때 물대신 자견수를 사용하면 가장 경제적으로 많은 량의 ${\delta}-endotoxin$을 얻을 있다. (4) GYS 배지에 8gr/l의 glucose 첨가시 균체와 crystal의 혼합물 생산량이 가장 많았다. (5) 아미노산중 leucine + isoleucine _ valine을 $1.25{\times}10^{-3}M$ 농도로 citrate salts 배지에 첨가시 공시세균의 증식이 훨씬 좋았다. (6) Na-glutamate를 citrate salts배지에 $2.5{\times}10^{-3}M$ 첨가시 가장 좋은 증식을 보였다. (7) 공시 나무목 해충중에서 total body extract의 pH가 가장 높은 Pieris rapae Linne (pH 8.4)에서 가장 좋은 살충효과를 보이고 Dendrolimus spectabilis Bulter와 Bombyx mori Linne에서는 효과가 낮았다. (9) 본 세균의 배양 상등액은 초파리에 대하여 높은 살충률을 보여 열에 안정한 exotoxin의 존재를 확인하였다.

• 환경위생공학
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• 제14권2호
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• pp.32-39
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• 1999

The following is experimental result of selecting soil bacteria showing toxicity against Root-knot nematode (Meloidogyne hapla). Out of 286 strains isolated from soil, one(NC67) showing toxicity against M.hapla is selected The selected strain(NC67) is identified of B. thuringiensis subsp. indiana. It proved out that the toxic maerial against M. hapla produce by NC67 strain is an exotoxin. The result of examining the existence of the extercellular toxicity product by the toxic strain(NC67) by usign activated carbon column chromatography, Dowex 50W column chromatography and TLC of silical gel etc. proved out that it is a single material.

• 한국응용곤충학회:학술대회논문집
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• 한국응용곤충학회 2002년도 합동 춘계 학술발표회
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• pp.100-100
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• 2002

• 한국잠사학회:학술대회논문집
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• 한국잠사학회 2002년도 제45회 춘계 학술연구 발표회
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• pp.71-71
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• 2002

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• 한국응용곤충학회지
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• 제47권1호
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• pp.45-50
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• 2008

생리, 생태적 특성 때문에 난방제 해충으로 알려져 있는 파밤나방에 대한 친환경적인 방제방법을 개발하기 위하여 국내 등록/판매 중인 화학농약과 생물농약에 대해 생물검정을 실시했다. 국내 파밤나방에 등록되어 있는 총 58개 약제 중에서 선발된 25종의 살충제에 대하여 약효시험을 실시하였으며, 그중 신경독(Neurotoxin)작용으로 해충을 치사시키는 살충제(12종)와 해충의 성장을 저해하는 생장조절제(IGR) 및 혼합제(10종) 그리고 생물농약 B떼(3종)로 구분하여 살충효과를 검정하였다. 신경독작용을 하는 12종의 약제 중 가장 속효성이며 살충성이 좋은 것은 Avermectin계인 Emamectin benzoate (EC)가 처리 3일 후에 100%의 효과를 나타냈었고, 다음으로 Oxadiazine계인 Indoxacarb (WP)가 처리 5일 후에 100%의 사망율을, Indokacarb (WG), Indokacarb (SC), Indoxacarb + Etofenprox (WP), Pyridalyl (EW)등 4종 약제가 91%이상의 약효를 나타내었다. 한편, 처리된 10종의 곤충생장조절제 중 Diacylhydrazine계인 Methoxyfenozide + spinosad (SC) 혼합제는 처리 3일 후에 100%의 빠른 살충률을 보였고, Methoxyfenozide (WP), Tebufenozide (WP), Methoxyfenozide (SC) 등 3종 약제는 처리 5일 후에 92%이상의 살충률을 나타냈다. 생물농약인 3종류의 Bacillus thuringiensis 제는 모두 파밤나방에 35%이하의 살충률을 나타내었다.

• 미생물학회지
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• 제31권1호
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• pp.17-21
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• 1993

Bacillus thuringiensis를 한국의 토양에서 분리하여 특성을 연구했다. 8균주를 분리하여 HL-24, HL-25, HL-33, HL-34, HL-35, HL-38, HL-39와 HL-40으로 명명했으며. HL-24와 HL-25는 부정형의 crystal를 가졌고, HL-33과 HL-35는 이중피라미드형, HL-34. HL-38, HL-39와 HL-40은 둥근형의 crystal를 가진 것을 위상차현미경으로 관찰했다. 분리균들의 생화학적인 특성은 이미 알려진 균주들과 유사했으나. 특이한 차이점을 가지고 있었다. HL-25, HL-33과 HL-34는 cephalothin, colistin과 penicillin G에 내성을, HL-33과 HL-35균주는 chloramphenicol에 내성을 HL-39와 HL-40은 penicillin G에 내성을 나타냈다. 균주HL-24, HL-25, HL-33과 HL-34는 누에 유충에 대한 치사성은 100.85.55. 및 70%를 각각 나타냈으며 HL-24, HL-25, HL-38, HL-39와 HL-40의 모기 유충에 대한 치사성은 10. 20. 100. 100 및 90%였다. HL-24와 HL-25균주는 누에와 모기 유충에 모두 치사성은 나타냈으나. 모기에는 살충효과가 10~20%로 매우 낮았다.