• 한국환경과학회지
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• 제16권12호
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• pp.1337-1343
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• 2007

The aim of this study was to isolate chicken feather-degrading bacteria with high keratinolytic activity and to investigate cultural conditions affecting keratinolytic enzyme production by a selected isolate. A chicken feather-degrading bacterial strain CH3 was isolated from poultry wastes. Isolate CH3 degraded whole chicken feather completely within 3 days. On the basis of phenotypical and 16S rDNA studies, isolate CH3 was identified as Bacillus thuringiensis CH3. This strain is the first B. thuringiensis described as a feather degrader. The bacterium grew with an optimum at pH 8.0 and $37^{\circ}C$, where maximum keratinolytic activity was also observed. The composition of optimal medium for keratinolytic enzyme production was feather 0.1%, sucrose 0.7%, casein 0.3%, $K_2HPO_4$ 0.03%, $KH_2PO_4$ 0.04%, $MgCl_2$ 0.01% and NaCl 0.05%, respectively. The keratinolytic enzyme had a pH and temperature optima 9.0 and $45^{\circ}C$, respectively. The keratinolytic activity was inhibited ethylenediaminetetraacetic acid, phenylmethylsulfonyl fluoride, and metal ions like $Hg^{2+},\;Cu^{2+}\;and\;Zn^{2+}$. The enzyme activated by $Fe^{2+}$, dithiothreitol and 2-mercaptoethanol.

• 한국수정란이식학회:학술대회논문집
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• 한국수정란이식학회 2002년도 국제심포지엄
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• pp.108-108
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• 2002

포유동물의 암컷 생식기관에 존재하는 다양한 종류의 matrix metallo-proteinase (MMP)는 난소와 자궁의 구성성분의 주기적인 변화를 조절하며 이중 난소의 MMP는 난포의 성장과 배란 그리고 퇴화 동안 조직재구성에 매우 중요한 역할을 한다고 알려져 있다. 본 실험에서는 근래에 새로 발견된 사람의 난포액에 존재하는 분자량 약 110kDa인 MMP-2 isoform GA110을 동정하고 자 하였다. 난포액으로부터 GA110 단백질을 분리하기 위하여 난포액에 5mM ethylenediaminetetraacetic acid(EDTA)를 처리한 후 DEAE Sepharose Fast Flow를 이용한 chromatography를 시행하였다. 그 결과, 난포액 단백질들은 0.2M NaCl 의 분획에서 GA110 활성을 나타내었고 anti-human MMP-2 antibody에 대한 면역반응도 뚜렷이 나타났다. DEAE Sepharose Fast Flow에서 얻은 분획 중 GA110의 활성과 면역반응을 모두 나타내는 분획만을 모아 Gelatin Sepharose 4B affinity chromatography로 다시 분리하였다 분리한 결과 resin에 흡착된 단백질 (eluate) 분획들에서 매우 뚜렷한 GA110 gelatinase 활성을 나타내었으며 면역반응 또한 관찰되었다. 이 분획들의 단백질을 농축한 후 zymography를 시행하여 나타난 GA110 단백질 band를 잘라 내었으며 이로부터 단백질을 electroelution하여 농축한 후 reducing agent인 2-mercaptoethanol를 처리하였다. 이를 전기영동 후 MMP-2 (propeptide region) antibody를 사용하여 immunoblotting 한 결과 70-72kDa의 단백질만이 면역반응을 나타내었다. 마지막으로 위와 같이 준비된 70-72kDa 단백질의 아미노산 서열을 Edman degradation 방법으로 분석하였다. 그 결과 이 단백질의 N 말단의 10개의 아미노산 배열 순서가 알려진 사람의 proMMP-2의 전체 배열순서 중 propetide domain의 N 말단에서부터 다섯 번째에서 시작하여 10개의 아미노산의 서열과 정확하게 일치하였다. 위 결과들로 미루어 사람의 난포액에 존재하는 MMP-2의 새로운 isoform인 GA110은 70-72kDa의 ProMMP-2가 disulfide bond를 통해 homodimer 구조를 이루고 있는 것으로 여겨진다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제19권5호
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• pp.456-463
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• 1991

Bif. longum KCTC 3215에 의한 Beta-galactosidase의 최적생성조건은 탄소원으로 lactose 1.0, 초기 pH 7.0, 배양온도 $37^{\circ}C$ 및 배양시간 17시간 후였다. 이 효소는 protamine sulfate, ammonium sulfate, DEAE-Sephadex A-50 ion exchange chromatography 및 Sephadex G-150 gel filtration 등 4단계 정제과정을 거쳐 9.25배 정제되었다.

• Archives of Pharmacal Research
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• 제28권7호
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• pp.816-822
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• 2005

Catharsius protease-2 (CPM-2) was isolated from the body of dung beetles, Catharsius molossus, using a three step purification process (ammonium sulfate fractionation, gel filtration on Bio-Gel P-60, and affinity chromatography on DEAE Affi-Gel blue). The purified CPM-2, having a molecular weight of 24 kDa, was assessed homogeneously by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The N-terminal amino acid sequence of CPM-2 was composed of X Val Gin Asp Phe Val Glu Glu lie Leu. CPM-2 was inactivated by $Cu^{2+}\;and\;Zn^{2+}$ and strongly inhibited by typical serine proteinase inhibitors such as TLCK, soybean trypsin inhibitor, aprotinin, benzamidine, and ${\alpha}_1$-antitrypsin. However, EDTA, EGTA, cysteine, $\beta$-mercaptoethanol, E64, and elastatinal had little effect on enzyme activity. In addition, antiplasmin and antithrombin III were not sensitive to CPM-2. Based on the results of a fibrinolytic activity test, CPM-2 readily cleaved $A{\alpha}-$ and $B{\beta}$-chains of fibrinogen and fibrin, and y-chain of fibrinogen more slowly. The nonspecific action of the enzyme resulted in extensive hydrolysis, releasing a variety of fibrinopeptides of fibrinogen and fibrin. Polyclonal antibodies of CPM-2 were reactive to the native form of antigen. The ELISA was applied to detect quantities, in nanograms, of the antigen in CPM-2 protein.

• 한국수정란이식학회지
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• 제18권3호
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• pp.243-248
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• 2003

1. 생쥐 고환으로부터 얻은 세포를 배양하여 군집을 형성하는 것을 관찰할 수 있었으며, AP, SSEA-1, -3, -4과 Integrin $\alpha$6, $\beta$1 및 Oct4의 발현을 확인하였다. 2. 생쥐 생식줄기세포를 3-5일정도 배양하게 되면, 여러 층으로 이루어진 군집을 이루게 되는데 이는 생쥐 배아줄기세포나 배아생식줄기세포의 형태와 같은 것이었다. 3. 생쥐 생식줄기세포를 체외에서 효과적으로 분리, 배양할 수 있는 조건을 확립하였다.