• 미생물학회지
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• 제31권1호
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• pp.1-8
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• 1993

Aspergillus niger 와 Penicillium verruculosum F-3 균주의 돌연변이체 선발은 ultraviolet (UV) 단일처리와 UV 및 N-methyl-N'-nitrosoguanidine(MNNG) 이중처리에 의해 얻었다. 원형질체 형성을 위한 최적조건으로는 pH 5.8, 상투압안정제로는 0.6 M KCI이 최적이었으며, A-niger 와 P. verruculosum 의 재생율은 각각 54.6%, 49.8% 로 나타났다. 핵전이에 의한 형질전환율은 $7{\times}10^{5}~1{\times}10^{5}$ 이었고, 형질전환체의 유전적 안정성은 4.5%~66.5%, conidia 의 크기와 DNA 함량의 측정결과 각각 $2.6{\pm}0.7{\sim}6.5{\pm}0.5{\mu}m$, 5.7~31.3 ${\mu}g/10^{8}$ condia 를 나타내어 aneuploid 로 추측되었다. 모균주와 형질전환체들간의 유전적 안정성과 효소 활성도를 비교하여 선발되 5 균주의 전제 수용성단백질의 전기영동양상은 차이가 있었으며, 동위효소의 양상은 모균주와 유사하지만 CMCase 의 경우 2 균주(TAPW15706, TAPW157-7), $\beta$-glucosidase 의 경우 5균주 (TAPW157-1, TAPW157-4, TAPW 157-5, TAPW157-6, TAPW157-7)에서 band 의 세기가 증가하였음을 관찰할 수 있었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제5권2호
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• pp.110-113
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• 1995

Transposon Tn5 was used to induce random insertional mutations in Bradyrhizobium japonicum, a soybean endosymbiont. By genomic Southern blot analysis, transposition events were found to have occurred randomly throughout the B. japonicum genome. After screening 3, 626 mutants by auxotrophy test, a histidine auxotroph was isolated. Upon plant infection test, the His mutant showed a 3~4 day delay in nodule formation.

• 한국식품영양과학회지
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• 제29권6호
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• pp.987-994
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• 2000

한국 전통누룩으로부터 분리.동정된 Asp. coreanus NR 15-1, Asp. oryzae NR 15-3, 그리고 Asp. oryzae NR 2-5로부터 amylase활성이 높고 세포융합에 사용될 변이주를 분리하고 그의 특성을 검토했다. Aspergillus 속 사상균을 변이처리하기 위한 변이원으로는 NTG를 사용하였으며 Asp. coreanus NR 15-1로부터 총 15종의 변이주중 8종의 영양요구변이주, Asp. oryzae NR 15-3 으로부터 총 5종중 3종의 영양요구변이주를, Asp. oryzae NR 2-5로부터 총 6종중 2종의 영양요구변이주를 분리하였다. 이들 영양요구변이주는 최소배지 에서는 생육하지 않았으며 특정 아미노산과 핵산염기 등을 배지에 첨가했을 경우에만 생육하였다. 분리된 변이주의 당화력, 액화력 및 산 생성능 등을 검토한 결과, 산 생성능이 우수한 균주인 Asp. coreanus NR 15-1로부터 glucoamylase 활성이 높은 \ulcorner(Arg.￣) 변이주와 Asp. oryzae NR 2-5로 부터 $\alpha$-amylase 활성이 우수한 영양요구변이주인 Z6(Ade.￣) 변이주를 세포융합에 사용이 가능한 변이주라 사료되었다. 앞으로 이 들의 변이주를 대상으로 세포융합을 통해 우수한 사상균주를 획득할 수 있는 기초적 자료가 됨으로서 전통누룩의 과학화에 기여할 뿔만 아니라 외국 주류와 경쟁력이 있고 과학화된 전통주류의 개발이 가능하리 라 사료된다.

• 한국균학회지
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• 제21권3호
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• pp.230-234
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• 1993

R. nigricans Ehrenberg의 돌연변이주를 분리하기 위하여 화학적인 돌연변이원인 N-Methyl-N'-Nitro-N-Nitrosoguanidine(MNNG)과 Ethyl Methane Sulphonate(EMS)의 최적 처리 조건을 조사하였을 때, MNNG농도는 $125{\mu}g/ml$, 처리시간이 60분일 때 돌연변이율이 가장 높은 생존율 0.1-1.0%를 나타내었다. MNNG를 이용하여 영양요구성 돌연변이주 Leucine auxotroph를 분리하였으며, 포자낭병의 길이가 축소된 것, 포자낭병의 모양이 나선형으로 변한 것, 그리고 포자낭과 포자낭포자의 크기가 감소된 것 등 세 가지 형태적 변이주를 분리하였다.

• 미생물학회지
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• 제22권4호
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• pp.207-214
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• 1984

2-deoxy-D-glucose가 첨가된(25 pg/ml) 최소액체 배지에 8.5시간 전 배양하여 swelling 시킨 conidiospore에 2% driselase와 2% ${\beta}-glucuronidase$를 동량 혼합한 효소용액을 처리하여 반응시킨 결과 protoplast형성 시간 2시간이내로 단축 시킬 수 있었다. 5% Ficoll(m.w. 400,000)용액을 사용하여 conidial protoplast를 보다 순수하게 분리 벙제할 수 있었으며, protoplast를 Giemsa로 핵 염색한 결과, 대부분의 protoplast는 하나의 핵을 갖고 있었다. 또한 전자현미경으로 관찰한 결과 conidiospore에서 유래된 protoplast는 세포벽 성분이 남아 있지 아니한 완전한 protoplast인 것으로 판명되었다. 영양요구성 돌연변이주에서 유래된 conidial protoplast의 융합률은 $3.4{\times}10^{-1}$에서 $4.9{\times}10^{-1}$수준으로 이는 mycelial protoplast의 경우보다 5-28배 가량 높은 수준의 것이었다.

• 약학회지
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• 제35권1호
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• pp.30-37
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• 1991

Streptomyces actuosus DMCJ-49 and Streptomyces minoensis DMCJ-144 produce the .alpha.-amylase inhibitor. Inerspecific protoplast fusion technique was used to increase the productivity of .alpha.-amylase inhibitor. Four auxotrophic mutants were obtained respectively from two strains by N-methyl-N'-nitor-N-nitrosoguanidine(3mg/ml) treatment. The optimum conditions for the protoplast formation of Streptomyces actuosus DMCJ-49 ade was as follows; 1.2% w/v of glycine, 3mg/ml of lysozyme, and 30 min of lysozyme treatment followed by 36 hr. incubation in the protop-last formation medium. In case of DMCJ-144-his those were 1.2%w/v, 3 mg/ml, 30 minutes and 60 hours, respectively. Regeneration was accomplished with hypertonic soft agar medium that contained 0.4M sucrose, 20mM CaCl$_2$, 50 mM MgCl$_2$ and low levels of phosphate. Fusion of protoplasts carrying different auxotrophic markers was achieved by treatment with polyethylene glycol. The optimum concentration of polyethylene glycol 1450 for the production of recombinants was 40%w/v. When the protoplasts was treated with 40% polyethylene glycol for 30 minutes, the frequency of recombinants was 6.5$\times$$10^{-3}$ and the $\alpha$-amylase inhibition activity of $ade^-his^-$ No. 4, which is the fusant with the most improved activity increased from 33 to 125 I.U./ml.

• 약학회지
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• 제38권5호
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• pp.595-601
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• 1994

Acetaminophen, a widely used analgesic, can be formed by N-acetylation and p-hydroxylation of aniline. Interspecific protoplast fusion technique was used to get acetaminophen directly from aniline and to increase the productivity of acetaminophen. Three auxotrophic mutants were obtained from S. griseus(ATCC 13273) and S. hygroscopicus(KCTC 1089) by N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine(NTG) treatment. Regeneration frequencies of S. griseus$(his^-)$, S. griseus$(lys^-)$, S. hygroscopicus$(arg^-)$ were 42%, 45%, and 31%, respectively. Fusion of protoplasts carrying different auxotrophic markers was achieved by treatment with polyethylene glycol. When protoplasts were treated with 50% polyethylene glycol for 3 minutes, the fusion frequency between S. griseus$(his^-)$ and S. hygroscopicus$(arg^-)$ was $3.8{\times}10^{-5}$. The fusion frequency between S. griseus$(lys^-)$ and S. hygroscopicus$(arg^-)$ was $5.6{\times}10^{-4}$. When we checked the production of acetaminophen, thirty-four out of the fifty-six fusants produced larger amounts of acetaminophen than the parent strains did. Nine fusants produced twice more and twenty-five fusants produced one to two times more of acetaminophen than their parents.

• 한국식품영양학회지
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• 제9권1호
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• pp.21-28
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• 1996

This study was attempted to investigate the production of L-tyrosine by Brevibacterium flavum ATCC 14067. To select the strain which produce more L-tyrosine, mutants were induced by N-methyl-N'-nitro-nitrosoguanidine (NTG) treatment and phenylalanine auxotrophic mutants were induced by NTG and penicillin treatments. PFP resistant mutant was isolated from a phenylalanine auxotroph by retreatment with NTG and screened for increase of L-tyrosine production. PFP-326 mutant resistant to PPP (100ug/ml) was derived from phenylalanine auxotroph by mutagenesis with NTG and PFP-106 mutant resistant to PFP (1201g/ml) was derived from PFP-326 by mutagenesis with NTG. The composition of media for L-tyrosine production in strain PFP-106 was studied. PFP-106 mutant strain produced 50mg 11 of L-tyrosine while the parent strain produced 0.56mg 11 of L-tyrosine. The optimum composition of medium for L-tyrosine by strain PFP-106 was 10cA sucrose as carbon source, 3% ammonium sulfate as nitrogen source. The optimum cultural condition for producing L-tyrosine by strain PFP-106 was L-phenylalanine at a concentration of 1000g/mg.

• 한국균학회지
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• 제13권3호
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• pp.185-189
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• 1985

식용버섯의 유전 연구와 균주 개발을 위하여 표고버섯의 담자포자에 자외선을 조사하여 영양요구성 균주를 유발하였는바, 자외선을 담자포자에 40초 조사했을때 약 5 %의 포자 생존율을 보였으며 120초 조사에서 완전히 발아력을 상실하였다. 30초에서 100초까지 10초 간격으로 자외선을 조사하여 7088 colonies를 검정한 결과 71개의 auxotrophs를 선발하여 1.0%의 유발율을 얻었으며, 60초 조사에서 1.35 %의 가장 높은 유발 빈도를 나타내었는데 이때의 포자 생존율은 1.3% 이었다. 71개의 auxotrrophs 중에서 29개 균주의 영양요구성을 검정한 결과 nucleic acid-requiring strain이 3, nucleic acid/vitamin-requiring strain이 13, nucleic acid/amino acid-requiring strain이 1, vitamin-requiring strain이 7, 그리고 amino acid-requiring strain이 5이었다.

• 미생물학회지
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• 제25권1호
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• pp.46-51
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• 1987

In order to increase the production of tryptophan by maximizing expression of recombinant trp plasmid, Klebsiella pneumoniae KC 105(pheA tyrA trpE trpR tyrR) was genetically modified. KC 107, inosine monophospate(IMP) auxotroph from KC 105 and KC 108, histidine(His) auxotroph from KC 107 were also derived respectively to increase phosphoribosylpyrophosphate(PRPP) production which is required for tryptophan biosynthesis. From KC 107 phosphoribosylpyrophosphate consumption which is required for tryptophan biosynthesis. From KC 107 and KC 108, KC 109 and KC 110, both arginine auxotrophs were derived respectively. To investigate the expression of recombinant trp plasmid in the selected K. pneumoniae mutants, the auxotrophic mutants were transformed with recombinant trp plasmids pSC 101-$trpE^{FBR}$, pSC 101-trpL(.DELTA.att) $trpE^{FBR}$ (pSC 101-trp-AF). Amount of tryptophan produced and activities of tryptophan synthase of $trpR^{-}$ mutant (KC 100) and $tyrR^{-}$ mutnat(KC 105) containing recombinant plasmid pSC 101-trp operon were increased by 30-40% as compared with KC 99(pheA tyrA trpE) containing recombinant plasmid pSC 101-trp operon. Activities of tryptophan synthase and production of tryptophan of KC 108 ($His^{-}$) and KC 109($Arg^{-}$) containing recombinant plasmid pSC 101-trp operon were increase by two-fold as compared with KC 107 containing pSC 101-trp operon.