Kim, Jae-Seok;Lee, Su-Kyung;Ko, Dae-Hyun;Hyun, Jungwon;Kim, Hyun Soo
Annals of Laboratory Medicine
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v.39
no.1
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pp.50-57
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2019
Background: The Automated Fluorescent Immunoassay System (AFIAS) rotavirus assay (Boditech Med Inc., Chuncheon, Korea) is a new rapid antigen test for rotavirus detection. We evaluated the performance of this assay for detecting rotaviruses and their specific genotypes in clinical stool samples. Methods: AFIAS rotavirus assay was performed in 103 rotavirus-positive and 103 rotavirus-negative stool samples (confirmed by both PCR and ELISA), and its results were compared with those of PCR, ELISA, and immunochromatographic assay (ICA). We evaluated diagnostic sensitivity/specificity, the detectability of rotavirus subtypes, lower limit of detection (LLOD), reproducibility, cross-reactivity, and interference of AFIAS rotavirus assay. Results: Based on PCR and ELISA results, diagnostic sensitivity and specificity of the AFIAS rotavirus assay were both 99.0%. LLOD results showed that the AFIAS assay had sensitivity similar to or greater than ICA and ELISA. High reproducibility was confirmed, and no cross-reactivity or interference was detected. This assay could detect genotypes G1P[8], G2P[4], G3P[8], G4P[6], G4P[8], G8P[4], G8P[8], G9P[4], and G9P[8]. Conclusions: The AFIAS rotavirus assay showed high reproducibility, sensitivity, and specificity as well as excellent agreement with ELISA, PCR, and ICA. It detected the most common as well as unusual genotypes of rotavirus prevalent in Korea. It could be a useful onsite assay for rapid, convenient, and cost-effective detection of rotavirus infection.
Kim, Dae-Woong;Kim, Gun-Joong;Kim, Hae-Jo;Ghil, Sung-Ho
Biomedical Science Letters
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v.16
no.4
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pp.279-285
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2010
Endogenous cannabinoids (endocannabinoids) display various pharmacological effects including pain control, anti-inflammation, and neuroprotection. The synthesis and release of endocannabinoids are regulated under both physiological and pathological conditions. The main degrading enzyme of endocannabinoid is fatty acid amide hydrolase (FAAH). Therefore we have developed the fluorescence-based assay system for FAAH. We established stable CosM6 cell lines expressing human FAAH. We also synthesized 2-oxo-2H-chromen-7-yl decanoate (DAEC) as a fluorogenic substrate for FAAH. When crude membrane extracts stably expressing FAAH was incubated with DAEC at $25^{\circ}C$, FAAH reacted specifically to DAEC and catalyzes the hydrolysis of DAEC into decanoic acid and highly fluorescent coumarin. Furthermore, the serin hydrolase inhibitor, phenylmethanesulfonylfluoride, inhibited the coumarin release to the reaction buffer in concentration dependent manner. This assay system is suitable for high-throughput screening since this system has simple experimental procedure and measurement method.
Yun, Ji Young;Jeong, Jin Boo;Eo, Hyun Ji;Kwon, Kun Woo;Hong, Se Chul;Jeong, Hyung Jin;Koo, Jin Suk
The Korea Journal of Herbology
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v.27
no.6
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pp.7-13
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2012
Objectives : Reactive oxygen species (ROS) have been associated with pathogenic processes including carcinogenesis through direct effect on DNA directly and by acting as a tumor promoter. Therefore, it has been regarded that ROS may be a major target for cancer prevention. The root of Paeonia lactiflora pall (PL), a traditional Chinese herb, has been a component of effective prescriptions for treatment of liver disease. Also, there are some reports about the antioxidant activities of the extracts from PL. However, little has been known about the effects of PL against oxidative damage. This work aimed to elucidate the anti-oxidant effects of Paeonia lactiflora pall (PL) in the non-cellular system and cellular system. Methods : Antioxidant activities of PL were evaluated by hydroxyl radical scavenging assay and $Fe^{2+}$ chelating assay. Anti-oxidative effect of PL was evaluated by ${\varphi}X$-174 RF I plasmid DNA cleavage assay in non-cellular system. In addition, DNA migration assay, expression level of phospho-H2AX, MTT assay and lipid peroxidation assay were performed for evaluate the anti-oxidative effect of PL in cellular system. Results : PL had a dose-dependent hydroxyl radical scavenging and $Fe^{2+}$ chelating capacity. In addition, PL inhibited oxidative DNA and cell damage induced by hydroxyl radical in non-cellular system and cellular system. Conclusion : Taken together, P. lactiflora pall may be possible for the application to a potential drug for treating the oxidative diseases such as cancer.
Objectives Fish vitellogenin (VTG) is produced in the female liver during oogenesis through the estradiol cycle and produced in the male liver by endocrine disrupting chemicals (EDCs) such as alkylphenols. In this study, we propose that the VTG concentration in the pale chub could be detected using monoclonal antibodies and polyclonal antibodies against vitellin (Vn) in a VTG enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) system. Methods Monoclonal antibodies and polyclonal antibodies were produced using the Vn extracted from the matured ovum of the ovary. The VTG was extracted from the plasma of the male pale chub. The Vn and VTG were confirmed by measuring the molecular weight of their proteins using sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and the specificity of the antibodies was checked through western blotting methods. The assay system was validated with respect to optimal assay concentrations, specificity, recovery, and intra- and inter-assay variations. Results The Vn consisted of two protein bands with apparent molecular weights of 64 and 37 kDa. The SDS-PAGE indicated protein weights of 146 and 77 kDa in the VTG. The assay range was 15.6 ng/mL to 2,000 ng/mL, and the value of the intra- and inter-assay variations were within 10.0% and 14.7%, respectively. The recovery rate was $99.5{\pm}5.5%$. Conclusions A sandwich ELISA was developed that could be used to qualify the VTG of pale chub in screening for EDCs. Pale chub is an ideal species for observing estrogen activity in the environment because of its extensive habitat and extensive food chain. The ELISA developed here would be more favorable than those for other species for determining the effect of long-term food chain accumulation of EDCs in aquatic environments.
Butylated hydroxytoluene (BHT) is widely used antioxidant food additives. It has been extensively studied for potential toxicities. BHT appears adverse effects in liver and thyroid. In this study, we evaluated the genetic toxicity of BHT with more advanced methods, in vitro mouse lymphoma assay $tk^{+/-}$ gene assay (MLA) and in vivo mouse supravital micronucleus (MN) assay. BHT did not appear the significantly results in the absence and presence of metabolic activation system with MLA. Also, in vivo testing of BHT yielded negative results with supravital MN assay. These results suggest that BHT itself was not generally considered genotoxic.
Melanin concentrating hormone is a neuropeptide highly expressed in the brain that regulates several physiological functions mediated by receptors in the G-protein coupled receptor family, especially plays an important role in the complex regulation of energy balance and body weight mediated by the melanin concentrating hormone receptor subtype 1 (MCH1). Compelling pharmacological evidence implicating MCH1 signaling in the regulation of food intake and energy expenditure has generated a great deal of interest by pharmaceutical companies as MCH1 antagonists may have potential therapeutic benefit in the treatment of obesity and metabolic syndrome. Although fluorescence-based calcium mobilization assay platform has been one of the most widely accepted tools for receptor research and drug discovery, fluorescence interference and shallow assay window limit their application in high throughput screening and have led to a growing interest in alternative, luminescence-based technologies. Herein, a luminescence-based functional assay system for the MCH1 receptor was developed and validated with the mitochondrial targeted aequorin. Aequorin based functional assay system for MCH1 presented excellent Z' factor (0.8983) and high signal-to-noise ratio (141.9). The nonpeptide MCH1 receptor antagonist, SNAP 7941 and GSK 803430, exhibited $IC_{50}$ values of 0.62 ${\pm}$ 0.11 and 12.29 ${\pm}$ 2.31 nM with excellent correlation coefficient. These results suggest that the aequorin based assay system for MCH1 is a strong alternative to the traditional GPCR related tools such as radioligand binding experiments and fluorescence functional determinations for the compound screening and receptor research.
Proceedings of the Korean Society of Toxicology Conference
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2003.10b
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pp.95-95
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2003
The comet assay has been recently validated as a sensitive and specific test system for the quantification of DNA damage. with 11 substances that demonstrated positive results in at least one test among 4 standard short-term genotoxicity tests, and to evaluate its ability to predict rodent carcinogenicity.(omitted)
P-glycoprotein (P-gp) is a permeability glycoprotein also known as multidrug resistance protein 1 (MDR1). P-gp is an ATP-binding cassette (ABC) transporter that pumps various types of drugs out of cells. These transporters reduce the intracellular concentrations of drugs and disturb drug absorption. The Caco-2 cell permeability assay system is an effective in vitro system that predicts the intestinal absorption of drugs and the functions of enzymes and transporters. Rhodamine-123 (R-123) and digoxin are well-known P-gp substrates that have been used to determine the function of P-gp. Efflux of P-gp substrates by P-gp has been routinely evaluated. To date, a number of herbal medicines have been tested with Caco-2 cell permeability assay system to assess bioavailability. There are growing efforts to find phytochemicals that potentially regulate P-gp function. The Caco-2 cell permeability assay system is a primary strategy to search for candidates of P-gp inhibitors. In this mini review, we have summarized the P-gp modulation by herbal extracts, decoctions or single components from natural products using Caco-2 cell permeability assays. Many natural products are known to regulate P-gp and herbal medicines could be used in combination with conventional drugs to enhance bioavailability.
In order to evaluate the mutagenic potentential in mammalian system for those pesticides which were proved to be mutagenic in Salmonella microsome assay system, we have studied drug-resistant mutagenesis in cultured L5178Y cells and unscheduled DNA synthesis in human lymphocytes in vitro. We have tested five pesticides: insecticides DDVP and trichlorfon, fungicide TMTD and herbicides MO and NIP. Of these pesticides, TMTD induced weak mutation to MTX-resistance in L5178Y cells in vitro and gave positive responses in DNA repair assay system. Therefore, its potential genetic risks in human beings should be re-evaluated. DDVP and trichlorfon gave negative response in L5178Y mutagenesis test system but stimulated incorporation of $^{3}H$-TdR in DNA repar assay. MO and NIP gave also negative responses both in L5178Y mutagenesis test systemand in DNA repair assay system.
To determine effectively the chitinolytic activity of rCHT1 from the hard tick H. longicornis expressed in baculovirus-mediated Spodoptera frugtperda (Sf) 9 cells, a simple and sensitive assay system was established in solid phase using agarose gel containing ethylene glycol chitin as substrate. The various factors affecting the efficacy of the assay were also investigated. The effects of various temperature, dosages of proteins, pH of media and time courses of reaction were examined to verify the sensitivity of assay for chitinolytic activity of rCHT1 protein. It was found that the optimal reactive conditions were $37^{\circ}C$ of temperature, 12 to 15 hours of reactive times, $0.1{\mu}g$ of protein concentration and pH 5 to 7 of media. Using the assay system designed, the functional activities of H. longicornis rCHT1l protein could be evaluated simply and sensitively.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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