CHOI, JAE-MUN;DOO-SANG KIM;MOON-SICK YANG;HYUNG-RAK KIM;JAE-HO KIM
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제11권6호
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pp.1066-1070
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2001
The PhyA gene, encoding myo-inositol hexakisphosphate phosphohydrolase in Aspergillus niger var. awamori (wild-type), was cloned and sequenced. The cDNA was overexpressed by a multicopy gene expression system in Pichia pastoris KM71. Recombinant, wild-type and commercial phytase from Aspergilus ficuum NRRL 3135 (Natuphos) were purified. The PhyA gene of Aspergillus niger var awamori showed perfect homology to the phytase of Aspergillus ficcum and $97\%$ homology to A. niger var awamori (L02421). Wild-type phytase was highly glycosylated and more thermostable than the other two, while deglycosylated farms of three phytases showed identical molecular weight, 507 kDa. After heating at $80^{\circ}C$, wild-type, commercial, and recombinant phytases retained $57\%, 32%,\;and\;8\%$ of their original activities, respectively. In conclusion, glycosylation plays a key role in the thermostability of phytase and its enzymatic characterization.
410 strains which belong to the genus aspergillus were isolated from specimens collected throught South Korea, and 17 species nad 1 variety through the 13 species groups were identified according to Repaer-Fennell's classification key. Among them the species and variety unrecorded in Korea are as follows : A, giganiteus, A. pseudogloucus, A. spinulosus, A.ficuum, A.japonicus, A.flavus var. columnaris, A. flavipes.
Oligofructo당 생산에 이용될 수있는 endoinulinase 분석방법은 그 균주가 endo- 및 exoinulinase를 함께 내는 경우, 일반적인 환원당 분석법으로는 정량하기가 어려워진다. 이 실험에서는 endoinulinase만을 선택적으로 정량하기 위한 하나의 방법으로써 항체 분석법을 이용하였다. Aspergillus niger ATCC 16882 조효소액을 CM-DEAE ion exchange chromatography, pI 2.5-5에서 preparative isoelectric focusing, HPLC gel filtration을 통해 순수하게 endoinulinase에 대한 항체를 얻었다.DEAE-ion exchange 및 protein A에서 정제된 이항체는 immunoassay 한 결과, exoinulinase 가 아닌 endoinulinase와 만 특이하게 반응하였고, immuno affinity chromatography 결과들은 배양액 중의 다른 단백질과 반응하지 않음이 확인되었다. 이눌린을 유일한 탄소원으로 한 배지에서 자란 1200여개의 야생균주들로부터 배양 특성이 우수한 균주를 1차로 선별하고 이 균주들의 endoinulinase 함량을 rocket immunoassay를 통하여 조사하였다. 이 중 1개의 균주는 Novozyme의 ATCC 1688와 비교할만한 정도의 endoinulinase를 배양액 중에 분비함을 확임할 수 있었다.
The INU2 gene encoding an endoinulinase of Aspergillus ficuum was expressed by the Kluyveromyces marxianus INU1 promoter in a SUC2-deleted Saccharomyces cerevisiae to produce the endoinulinase free of an exoinulinase and an extracellular invertase in the culture medium. When inulin was included in the medium, a recombinant yeast strain produced the sufficient amount of the enzyme to make a halo around its colony. An expression of endoinulinase was dependent on the culture temperature and shaking. The highest expression of endoinulinase was observed at $30^{\circ}C$, and 150rpm.
Chemical analysis of salted fish was analyzed in 60 samples collected from various moloha markets in Sohag, Qena and Aswan Governorates, Upper Egypt. Moloha contained 52.9% water content, while organic matter content represented 71.79% of dry weight and 33.81%($338.12{\pm}8.64mg\;g^{-1}$) of fresh weight. Total salts and soluble salts represented 13.29% and 10.19%($132.88{\pm}7.65\;and\;101.93{\pm}5.76mg\;g^{-1}$ of fresh weight), respectively. pH values were more or less neutral. Mycological investigation of examined samples revealed that fifty-five fungal species and one variety belonging to 11 genera were identified. The fungal genera of highest occurrence and their respective number of species were Aspergillus(A. flavus, A. niger, A. fumigatus, A. montevidensis, A. ficuum, A. parasiticus and A. mangini) and Penicillium(P. citrinum, P. puberulum, P. aurantiogriseum and P. roquefortii). On the other hand, yeast represented 18.2% and 3.0% of total counts of fungi on Czapeks-dextrose agar and 15%NaCl-Czapeks-dextrose agar media, respectively. Samples were assayed for potential presence of mycotoxins. Ten out of 60 samples(16.7%) were proved to be toxic. It is the first record of mycotoxins contamination of salted fish in Egypt. The ability of 340 isolates of recovered fungi was screened for production of mycotoxins and extracellular enzymes.
An experiment was conducted to measure the effect of crude phytase supplementation on the growing performance, blood concentrations of some minerals and tibia characteristics of broiler chickens. Day-old 240 male broiler chickens (Avian) were randomly allotted to four treatments. There were six replicates per treatment, and ten chicks per replicate. Treatments consisted of two levels of crude phytase (0 and 600U/kg) made from Aspergillus ficuum and two levels of non-phytate P (0.45 and 0.35% NPP for the starter period, and 0.35 and 0.25% NPP for the grower period), making the experiment 2$\times$2 factorial. The starter period was from hatch to 21 d of age, and grower period was from 22 to 35 d of age. Feed intake and weight gain of chicks fed diet containing phytase were higher(P〈0.05) than those of chicks fed diets without phytase, however, no differences was found in feed/gain. mortality, and nutrient availabilities regarding the phytase supplementation. Chickens fed diets with low NPP and phytase excreted lower P than did birds fed diets containing normal NPP without phytase. The level of NPP and phytase did not affect N excretion. The Ca availability was increased by feeding low NPP diet. Dietary phytase increased the availabilities of P and Mg, but decreased those of Fe and Zn. There was interactions between dietary NPP level and phytase addition on mineral availability. Tibia was lighter and shorter in low NPP groups, and heavier in phytase treated groups. The tibial contents of Ca, P and Mg decreased in low NPP treated groups, but increased in phytase treated groups. The ash content of tibia of chickens fed diet with phytase was higher than that of birds fed diets without phytase. These data suggest that the crude phytase supplementation to broiler diets containing low NPP level improves growth performance and mineral availability and, reduces fecal P excretion.
In order to improve the availability of phytase and probiotics together, a phytase gene from Aspergillus ficuum has been expressed in Lactobacillus. In this study, the transformed Lactobacillus with phytase gene was fed to pigs to determine its effect on pig production, feed conversion and gut microbes. Forty eight, 60-day-old, castrated pigs (Duroc${\times}$Landrace${\times}$Pietrain) were assigned to 6 groups, 8 pigs for each group. Group 1 was the control, group 2 was added with chlortetracycline (500 mg/kg), group 3 was added with the transformed Lactobacillus (500 mg/kg) with 20% (w/w) of calcium monohydrogen phosphate (CMP, $CaHPO_{4}$) removed, group 4 was added with the natural Lactobacillus (500 mg/kg) with 20% (w/w) of CMP removed, group 5 was added with the transformed Lactobacillus (500 mg/kg) with 40% (w/w) of CMP removed, group 6 was added with phytase (500 mg/kg) with 40% (w/w) of CMP removed. The results showed: i) the average daily gain (ADG) was improved in groups 2, 3 and 4 (p<0.05); ii) the diarrhea rates in the groups added with Lactobacillus were lower than in the other groups (p<0.05), in which the transformed Lactobacillus had more effect on reducing digestive disease; iii) the transformed Lactobacillus was most effective in improving the digestibilities of crude protein (CP), calcium (Ca), phosphorus (P), compared with the other groups (p<0.05); iv) Lactobacillus could increase lactic acid bacterium number and ammonia concentrations, and decrease pH values and E. coli number in pig feces (p<0.05); v) the phytase activity in the feces of pigs fed with the transformed Lactobacillus was 133.32 U/g, which was higher than in group 4 (9.58 U/g, p<0.05), and was almost the same as group 6 (135.94 U/g); vi) the transformed Lactobacillus could increase serum concentrations of IgA, triglyceride, and glutamic oxaloacetic transaminase activity (p<0.05), and had no significant effect on other serum indexes (p>0.05).
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[게시일 2004년 10월 1일]
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