전보에 개발된 배지에 국산 포도당을 이용한 발효결과, 구연산 생성은 37∼43g/ι이었다. 제품X의 경우는 제품Y에 비해 구연산 생성이 우수하여 43g/ι가 생성되었다. 국산 포도당을 Ambelite-IR -120으로 처리하고, peptone도 potassium ferrocyan-ide로 처리하여 금속이온을 제거한 뒤에, 10mg/ι의 철 이온을 첨가하였을 때 구연산 생성은 53gm/ι에 달하였다. 또한 원래 Sakaguchi 배지에 비해 3배나 많이 구연산이 생성되었다. 분리 동정된 Asp. niger를 다른 문헌과 비교하였을 때 큰 손색이 없었으며, 앞으로의 생리연구 및 mutation 연구가 필요하겠다.
Author investigated fluorence antibody reaction for the antigenic relationships between Asp niger group, Asp flavus and Asp parasiticus which was indicated as follows: 1. It was concluded that there are complete differences in the antigenic properties each other because it has not cross reaction, therefore identification of strains will be simpley classified. 2. A complete cross reaction between Asp flavus and Asp parasitic us in the Asp flavus groups existed, accordingly this reaction could not identified the strain and classified between Asp. flavus and Asp. parasiticus. 3. This experiment also followed with the separated each strains from the origin (Meju, Nuruk, ATCC, NRRL), but there no differences. From the above results, this method could be classified between Asp flavus group and Asp niger group in the genus Aspergillus, but classification of Asp. flavus and Asp. parasiticus should hardely conclude with this method.
Racemic epoxide에 대한 입체선택적 가수분해능을 가지고 있는 곰팡이, Aspergillus niger LK로부터 epoxide hydrolase (EH, EC 3.3.2.3) 유전자의 진화적 유연관계 분석을 행하였다. A. niger LK의 EH 염기서열로부터 유추한 EH 단백질 아미노산 서열은 여러 박테리아의 EH들 및 포유동물의 microsomal EH들과 유의적인 유사성을 가지고 있었으며 a/$\beta$ hydrolase fold family에 속하였다. A. niger LK의 EH 단백질의 입체구조예측은 Protein Data Bank에 수록된 lqo7의 3D 결정구조와 90.6% identity를 가지는 것으로 나타났으며 다른 EH들의 아미노산 서열비교를 행한 결과 Asp$^{192}$ , Asp$^{348}$ 및 His$^{374}$ 이 catalytic triad를 구성하고 있는 것으로 추정되었다. 여러 생물종의 EH서열을 기능적 및 구조적 domain 서열을 기초로 하여 multiple sequence alignment를 행하고 Neighbor-Joining/UPGMA method를 이용하여 계통수를 복원한 결과 다른 생물종들의 EH와의 진화거리는 서로 1.841∼2.682로 멀었으나 EH의 기능을 가지기 위한 oxyanion hole 및 a/$\beta$ hydrolase fold family의 catalytic triad는 잘 보존되고 있어 공통조상으로부터 진화되어 왔음을 알 수 있었다.
액젓 또는 어간장 제조시 발효기간의 단축과 향미를 개선할 목적으로 최근들어 soy sauce용 koji를 많이 이용하고 있으나 본 연구에서는 soy sauce용 koji를 대체하기 위하여 어육을 기질로 한 koji의 제조 가능성을 검토하였다. 마쇄한 정어리육과 전분을 혼합한 후 살균 처리한 다음 Aspergillus awamori(KFCC. 11439), Aspergillus guercinus (KFCC. 11595), Aspergillus niger(KFCC. 11239), Aspergillus oryzae(KFCC. 32343) 및 Aspergillus sojae(KFCC. l1559)의 곰팡이균을 각각 접종하여 배양 시간에 따른 생육특성을 조사하고 우수한 균주를 선정하여 정어리육을 기질로 한 koji의 효소적 특성을 조사하였다. 생육특성을 조사한 바 $30^{\circ}C$에서 48시간 배양한 후 곰팡이의 포자가 형성되었으며 protease 및 lipase activity는 배양 72시간까지 계속 증가하는 현상을 보였고 trimethylamine생성은 배양 96시간까지 Aspergillus awamori와 Aspergillus niger를 접종한 처리구를 제외하고는 모두 감소되었으며 5종의 Aspergillus spp중 Aspergillus oryzae와 Aspergillus sojae가 비교적 우수한 균주로 선발되었고 적정 배양시간은 72시간이었다. 이 균주를 대상으로 적정 koji의 제조조건을 검토하기 위하여 pH의 변화, 전분의 첨가양 및 배양온도에 따른 protease및 lipase activity를 조사한 바 protease activity는 Asp. oryzae를 접종한 경우 pH 9 부근에서 Asp. sojae의 경우는 pH $6\~7$에서 가장 높은 활성을 나타냈고 lipase activity는 pH $6\~7$ 범위에서 가장 높았다. 전분의 첨가양은 어육중량의 $20\%$(w/w), 배양온도는 Asp. oryzae는 $30\~35^{\circ}C$ 범위에서 Asp. sojae는 $35^{\circ}C$ 부근에서 이들의 활성도가 가장 높게 나타나 어육을 기질로 한 koji의 제조 가능성을 확인할 수 있었다.
농산 폐자원 중에서도 감귤 가공공정에 따라 부생되는 감귤과피를 발효 기질로서의 이용을 목적으로 분리균 Asp. niger를 사용하여 구연산 발효에 미치는 배양조건 및 영향인자를 조사하였다. 그 결과 고 체 배양에서의 최적조건 즉 감귤과피와 물을 동량 혼합하고 여기에 NH$_4$NO$_3$0.2%, MgSO$_4$7$H_2O$ 0.1%, Methanol 2.5%를 첨가하여 PH4.5로 조절한 다음포자 현탁액(1x$10^8$ spore/$m\ell$) 2%를 접종하여 균체증식 초기에 35$^{\circ}C$, 20시간 배양하고 4시간 저온 처리한 다음 구연산 생성기에서 3$0^{\circ}C$로 48시간 배양했을 때 당에 대해 80.4%의 높은 수율의 구연산을 얻었다.
Of the Asp. spp. isolated by the Institute of Applied Microbiology, Kon-Kuk University, 7 strains were selected for the study of the immunological differencences among them using gel precipitation test. The strains were the following types : 1 type of flavus and 2 types of oryzae were isolated from Meju ; 1 type of flavus from Nuruk ; and each one type of flavus, parasiticus and oryzae from Kokja.Asp.flavus from ATCC, Asp. parasiticus nad Asp. niger NRRL strains were also used in the study as a standard. From this study, several points can be raised ; 1) There was no common antigenic property between Asp. niger and Asp. flavus, because of no formation of reaction line. Therefore, all strains could be easily distinguished. 2) There was common antigenic property, that is, the formation of reaction line between Asp. flavus and Asp. parasticus. Accordingly two strains could not be easily distinguished by the gel precipitation test. 3) Each type of oryzae, parasiticus and flavus of Asp. flavus group had common antigen one another as well as specific antigens only in the difference of the reaction lines, so they could be easily identified in the gel precipitation test. 4) Each isolated strain from Meju and Nuruk appeared to be identical. 5) It was shown that the gel precipitation test of serological methods was very useful for the classification of Asp. spp.
Aspergillus niger가 생산하는 $\alpha$-galactosidase의 효소학적 성질을 조사하기 위하여 시험균주를 밀기울 배양한 후 생성된 $\alpha$-galactosidase를 염석, 이온교환 크로마토그래피 및 겔 여과 등의 방법으로 정제한 후 정제효소의 효소학적 성질을 검토하였다. Asp. niger를 밀기울 배지에서 $30^{\circ}C$, 4일 배양했을 때 효소활성이 가장 높았으며 $\alpha$-galactosidase는 황산암모늄 염석, DEAE-cellulose 및 DEAE-Sephadex A-50 이온교환 크로마토그래피, sephadex G-150 겔 여과 등에 의하여 23.7배까지 정제되었으며 비활성이 1,229U/mg.protein, 수율 14이었고 HPLC와 PAGE에 의해 순도가 확인되었다.
Tribolium castaneum은 건전미입(健全米粒)에서 완전한 생활환(生活環)을 완성(完成)하여 쌀에 가해가능성(加害可能性)을 보였으며 그 활동(活動)은 1.3%의 수분함량의 경우는 증가를 초래하였으나 곰팡이의 증식은 오히려 저해하는 경향을 보였다. T. castaneum의 생육은 Asp. repens에 의해 안정화(安定化)되었으나 Asp. niger에 의해서는 지체되었다.
인삼액기스의 첨가량을 달리한 배지에 시간별로 국균의 첨가력($\alpha$-amylase, $\beta$-amylase, protease)에 미치는 영향을 조사한 결과는 다음과 같다. 1) Asp. oryzae의 $\alpha$-amylase 활성도는 48시간 배양까지는 대조구보다 다소 높았으나 그 이후는 같은 경향을 나타내었고, Asp. oryzae의 $\beta$-amylase 활성도는 배양 24시간에서 인삼엑기스, 첨가량순으로 촉진되어 1%구까지 증가하고 3~5%구는 그 활성이 첨가량 순으로 감소되었다. Asp. oryzae의 protease 활성도에서 acid protease는 배양 72시간까지 대조구보다 활성이 높았고, 그중 3.0%구의 48시간때가 가장 역가가 높았으며 120시간 배양에서는 인삼엑기스 3.0% 이상이 효소활성의 감소가 컸다. Alkaline protease는 대조구보다 객처리구의 역가가 떨어졌다. 그러나 alkaline protease는 aeid protease보다 활성도가 높았다. 2)Asp. niger의 $\alpha$-amylase 활성도는 인삼엑기스 첨가량 순으로 높아지고 그 활성이 급증가하였다가 급감소되는 경향을 보였고, Asp. niger의 $\beta$-amylase 활성도는 인삼엑기스, 첨가량에 따라 활성이 높아졌으며 0.5~3.0% 첨가시에는 대조구 및 5.0%보다 활성이 빨고 높게 나타났으며 5.0구는 그 활성이 억제되었다. Asp. niger의 protease 활성도는 acid protease가 alkaline protease보다 효소역가가 현저하게 높았다. acid protease는 배양 48시간까지는 인삼엑기스의 첨가량에 따라 효소역가가 조해되었으나 72시간에서는 인삼엑기스 첨가량 순으로 역가가 높았고, 단 5.0%구만 현저하게 효소력이 감소되었다. Alkaline protease는 배양 24시간에서 48시간까지는 0.1%구와 0.5%구가 대조구보다 효소력이 높았고 그 이상의 인삼엑기스가 첨가된 처리구보다 효소력이 낮았다. 그러나 48시간 이후부터는 효소력은 인삼엑기스 첨가량 순으로 감소를 나타내었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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