• Applied Microscopy
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• 제30권4호
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• pp.403-412
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• 2000

1. 아메바 항-액틴의 Ag-Ab 반응과 이를 항-생쥐 IgG-금 입자로 표지한 결과는 주로 정세 포 및 정자의 핵질에 특이적으로 표지되었고 첨체에서는 그 반응을 볼 수 없었다. 2. 표지된 항-액탠 금 입자로 볼 때 정자 핵질의 G-액틴 또는 G-actin oligomer는 정세포의 F-액틴에서 유래되는 것으로 사료된다. 3. 첨체의 액틴은 주로 F-액틴으로 첨체돌기 형성에 참여하지 않는 위상인 것으로 관찰된다. 4. 미세구조의 변화, 정세포 체적의 감소, 정세포 및 정자 핵에 표지되는 금 입자의 증가와 이들 현상이 나타나는 동시성으로 볼 때 정세포 핵의 형태변화의 내용은 응축이고 이는 F-actin의 탈중합 반응에 의한 G-액틴의 생성이 원인일 것으로 사료된다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제33권3호
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• pp.155-164
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• 1995

Cyptosporidium parvum의 발달 단계별 actin과 myosin의 분포 위치를 면역황금염색법을 이용하여 관찰하였다. $Depomedrol^{\circledR}$을 ICR마우스에 피하주사하여 면역억제시킨 후 C. parvum이 발현된 마우스 회장을 잘라 LR gold로 포매하여 초박절편을 떴다. 일차항체로는 chickenbackmuscle actin과 bovine uterus myosin에 대한 rabbit polyclonal antibody를 사용하였고 이차항체로는 10 mm 크기의 황금입자가 결합된 goatanti-rabbit lgG를 반응시켰다 Uranylacetate와 leadcitrate로 염색한 후 투과전자현미경으로 관찰하였다 Trophozoite에서는 세포막에서 주로 actin과 myosin이 관찰되었고 feederorganelle 주위 세포질에는 actin이 분포하였다. Meront와 같이 활발히 분열하고 있는 단계에서는 세포막과 세포질 전체에 actin이 분포되어있었으며 myosin은 세포막에서만 소량 관찰되었다. 핵과 anlage of rhoptries 등은 두 단백질에 모두 염색되지 않았다. Macrogametocyte 에서는 amylopectin-lile bodies에서 actin과 myosin이 모두 관찰되었으나 wall forming bodies에서는 관찰되지 않았고 feederorganelle 주위 세포질 부분에서는 actin이 관찰되었다. Sporozoite를 포함하는 oocyst와 merozoite를 포함하는 meront에서는 세포막과 세포막사이에서 actin이 다수 관찰 되었으며 myosin은 소량 관찰되었다. Merozoites가 빠져나가 속이 비어있는 parasitophorous vacuole중에는 microspike를 형성한 것들이 종종 관찰되었고 이것이 좀더 길어져 마치 microvilli와 같이 보이는 경우도 있었으며 이러한 구조물에서도 actin이 다수 관찰되었다. 이상의 결과로 미루어 actin과 myosin은 세포막에 주로 분포하면서 C. parvum의 형태를 유지시키며 또한 세포막의 움직임을 조절하는 cytoskeletalproteiA으로서의 역할이 주된 작용일 것으로 생각되었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제12권4호
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• pp.628-634
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• 2002

A microfilament-based motility in Toxoplasma gondii (T. gondii) Is involved in host cell invasion, yet the exact mechanism has not yet been determined. Accordingly, the current study examined the localization of actin and tubulin in T gondii using immunofluorescent (IF) and immunogold staining for electron microscopy. Indirect immunofluorescence (IF) staining using anti-actin and anti-tubulin monoclonal antibodies (mAbs) revealed localization of fluorescence on the entire surface of the tachyzoites. The actin in T. gondii was observed by immunogold staining, and the gold particles were seen on the surface, especially at the anterior end and in the cytoplasm of the parasite. However, there were no gold particles in the nucleus, rhoptries, and dense granules. The tubulin in T gondii was located on the surface and in the cytoplasm of the tachyzoites in the extracellular parasite, compared with anterior part of tachyzoites in the intracellular parasite. The antigens of T gondii recognized by anti-actin mAb were 107 kDa, 50 kDa, 48 kDa, and 40 kDa proteins, while those recognized by anti-tubulin mAb were 56 kDa, 52 kDa, and 34 kDa proteins. Tachyzoites of T gondii pretreated with the actin inhibitor, cytochalasin D (20 $\mu\textrm{g}$/ml), and tubulin inhibitor, colchicine (2$\times$10$\^$-6/ M), for 30 min at 37$\^{C}$ were used to infect the isolated mouse macrophages (tachyzo ites:macrophage=2:1). Pretreatment with the inhibitors resulted in lower multiplication of tachyzoites within the macrophages than in the untreated group 18 h post infection (p<0.05). Therefore, the present results suggest that actin and tubulin appear to be involved in the invasion of and multiplication in host cells.

• Applied Microscopy
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• 제34권2호
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• pp.121-130
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• 2004

동물의 결합조직에 분포하고 있는 섬유모세포 (fibroblast)는 결합조직을 구성하는 세포의 한 종류로서 세포질 돌기들이 잘 발달된 형태적 특징이 있는 것으로 실험쥐 담관의 경우 간흡충 등의 기생충에 의하여 물리, 화학적 상해를 받았을 때 세포변이가 유발될 뿐만 아니라, 담관 암세포로 전이되기도 하는 것으로 알려져 있다. 따라서 저자 등은 실험쥐의 담관이 기생충에 의한 상해를 받았을 때 섬유모세포의 세포 표면과 세포질의 변화를 알아보고자 실험쥐 담관에서 섬유모세포를 분리하여 전자현미경으로 확인하고 다음과 같은 결과를 얻었다. 대조군 실험쥐 담관의 섬유모세포들은 일반적인 형태로 세포돌기, 세포표면 및 세포질을 구성하고 있었으나 간흡충 감염군 실험쥐 담관의 섬유모세포는 미세소관에 의한 세포질 돌기들이 다수 발달하고 다양한 종류의 포낭형 조면소포체 그리고 세포질에 전자밀도가 높은 다양한 액포, 높은 밀도의 리보좀을 포함하는 조면소포체, 다양한 형태의 과립 및 많은 수의 미세섬유가 관찰되는 형태적 변화가 관찰되었다. 간흡충에 감염된 담관의 섬유모세포는 간흡충에 의하여 상해 받은 세포가 물리화학적 자극에 의한 적응으로 단백질 합성이 증가하며 multi-vesicular 형태의 Golgi복합체가 생성되고, 세포질돌기 형성하는 것으로 확인되었다. 세포질에 광범위하게 분포하는 multi-vesicle은 당말단인 sialic acid를 포함하고 세포내에서 세포표면의 미세융모에 이르기까지 이동하는 것으로 확인되었다. 이상의 결과로 간흡충 감염 실험쥐로부터 분리된 섬유모세포는 actin단백으로 구성된 세포돌기가 잘 발달하고, 세포내 조면소포체에서 형성된 단백질이 Golgi복합체에서 당말단인 sialic acid로 전환되어 세포표면에 분포하게 된다. 이는 간흡충 감염으로 물리 화학적 자극 자극받은 섬유세포가 미세구조적 변화를 유발하는 것으로 확인되었다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제42권4호
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• pp.185-193
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• 2004

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular protozoan parasite, which invades a wide range of hosts including humans. The exact mechanisms involved in its invasion are not fully understood. This study focused on the roles of $Ca^{2+}$ in host cell invasion and in T. gondii replication. We examined the invasion and replication of T. gondii pretreated with several calcium modulators, the conoid extrusion of tachyzoites. Calmodulin localization in T. gondii were observed using the immunogold method, and $Ca^{2+}$ levels in tachyzoites by confocal microscopy. In light microscopic observation, tachyzoites co-treated with A23187 and EGTA showed that host cell invasion and intracellular replication were decreased. The invasion of tachyzoites was slightly inhibited by the $Ca^{2+}$ channel blockers, bepridil and verapamil, and by the calmodulin antagonist, calmidazolium. We observed that calcium saline containing A23187 induced the extrusion of tachyzoite conoid. By immunoelectron microscopy, gold particles bound to anti-calmodulin or anti-actin mAb, were found to be localized on the anterior portion of tachyzoites. Remarkably reduced intracellular $Ca^{2+}$ was observed in tachyzoites treated with BAPTA/AM by confocal microscopy. These results suggest that host cell invasion and the intracellular replication of T. gondii tachyzoites are inhibited by the calcium ionophore, A23187, and by the extracellular calcium chelator, EGTA.