Kim, Ki-Chan;Lee, Seung-Don;Han, Ju-Hee;Sohng, Jae-Kyung;Liou, Kwang-Kyoung
한국생물공학회:학술대회논문집
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2000.11a
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pp.749-754
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2000
PCR primers were designed based on consensus sequences of dTDP-D-glucose 4,6-dehydratase, one of the enzymes involved in the biosynthesis of deoxysugar. The PCR product (360 bp) was obtained from Thermus caldophilus GK24. Colony hybridization was carried out to the cosmid library constructed from T. caldophilus GK24 genomic DNA by the PCR product DNA fragment. We isolated a cosmid clone (pSMTC-1) that was subcloned to call pKCB series plasmid (BamHI fragments), partially sequenced and analyzed. pKCB80 (4.2 kb-BamHI DNA fragment) of them showed ORFs that was orfA, orfB, orfC and orfD. The orfABCD gene cluster is the deosysugar biosynthetic gene ; orfA (glucose-1-phosphate thymidylytransferase), orfB (dTDP-D-glucose 4,6-dehydratase), orfC (dTDP-4-keto-L-rhamnose reductase) and orfD (dTDP-4-keto-6-deoxy-D-glucose 3,5-epimerase). The gene cluster that was related in biosynthesis of dTDP-L-rhamnose was also identified by computer analysis, and we proposed that the biosynthetic pathway of deoxysugar analyzed from DNA sequencing of pKCB80 is from D-glucose-1-phosphate, dTDP-D-glucose, dTDP-4-keto-6-deoxy-D-glucose via dTDP-4-keto-L-rhamnose to dTDP-L-rhamnose.
Gene and promoter structures of metallothionein(MT) from Miho spine loach (Cobitis choii; Cypriniformes) were characterized, and the transcriptional responses to experimental exposures to heavy metals and heat stress were examined. The C. choii metallothionein displayed well-conserved features of teleostean metallothioneins at gDNA, mRNA and amino acid levels. Bioinformatic analysis predicted that the C. choii MT regulatory region potentially possessed various motifs or elements targeted by various transcription factors associated with metal-coordinating regulation (e.g., metal transcription factor-1), immune responses (e.g., nuclear factor kappa B), and thermal modulations (e.g., heat shock factor). Acute heavy-metal exposures to 0.5 or $1.0\;{\mu}M$ of cadmium (Cd), copper (Cu), manganese (Mn), nickel (Ni) or zinc (Zn) showed that MT transcription was significantly stimulated by Cd (9.6-fold relative to non-exposed control) and Cu (10.4-fold), only moderately by Mn (2.4-fold), but hardly by Ni and Zn. Elevation of water temperature from $25^{\circ}C$ to $31^{\circ}C$ caused a rapid modulation of MT mRNAs toward upregulation to 9.5-fold; however, afterward the elevated mRNA level slightly decreased during further incubation at $31^{\circ}C$ for 6 h. Results from this study suggest that MT-based expression assay could be a useful basis for better understanding the metal- and/or heat-caused stresses in this endangered fish species.
Seok-Yong Kim;Seok-Jong Suh;Seon-Hwa Ha;Seon-Kap Hwang;Joo-Hyun Nam;Dong-Sun Lee;Soon-Duck Hong;Jong-Guk Kim
Journal of Life Science
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v.8
no.5
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pp.614-621
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1998
An extracellular inulinase from Penicillium sp. which isolated from soil sample was purified to a single protein th-rough ammonium sulfate fractionation, DEAE-Sephacel ion exchange chromatography and Toyopearl HW 65 F gel filtration. The temperature and pH for the enzyme reaction were around 6$0^{\circ}C$ and 4.0, respectively. The enzyme was stable at 3$0^{\circ}C$-5$0^{\circ}C$ and in the pH range of 4 to 5. $CuCl_2$, $HgCl_2$ and EDTA inhibited the enzyme activity strongly. By contrast, $MnCl_2$ and $CaCl_2$ activated the enzyme activity. The molecular weight of the purified enzyme was esti-mated to be 77,000 dalton by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The Km values of the enzyme for inulin were calculated to be $2.2\times10^{-3}$M. TLC analysis suggested that purified enzyme is exo-type inulinase. The NH2-terminal amino acid sequences of the purified enzyme was determined to be $NH_2$-X-Glu-Ser-Tyr-Thr-Glu-Lys/Leu-Tyr-Arg-Pro.
To develop an elderly diet food that can easily be chewed and swallowed, we manufactured elderly diet food using chicken breast meat with various amounts (0.9, 1.1, 1.3 and 1.5 g) of gelatin used as a viscosity agent, and evaluated their physico-chemical and sensory properties. As the amount of gelatin decreased, the lightness were increased, but the redness and yellowness were decreased. In the texture profile analysis, hardness, springiness, gumminess and chewiness were significantly increased with increased amounts of gelatin, but adhesiveness gradually decreased. Cohesiveness was no significantly difference. Free amino acid contents in elderly diet food using chicken breast meat did not show trend to increase or decrease, but the tyrosine contents were significantly decreased with increased amounts of gelatin. The sensory evaluations including taste, flavor and color were not significantly different. However, the texture and overall acceptance of elderly diet food using chicken meat containing 1.3 g of gelatin had the highest acceptance.
The CryIIA gene encoding the insecticidal crystal protein of Bacillus thuringiens!s subsp. kurstalri HD-l has been cloned in Escherichia col!, and its nucleotide sequences were determined completely. 5kb Hindlli fragment harboring CryIIA gene was screened in the large ca. 225kb plasmid DNA by southern blot. HindlIT digested 5kb fragment was ligated into pUC19 and transformed in E. coli. The 4kb BamHI-HindlIT fragment containing the CryIIA gene was subcloned and named pSKIIA. DNA sequence analysis demonstrates that pSKIIA is the gene of an operon which is comprised of Lhree open reading frames (designated orn, orf2 and or£3). The CrylIA gene is composed of 3,952bp-long BamHI-Hindill DNA restriction fragment. The orf3 code for a polypeptide of 633 amino acid residues. The protoxin protein has a predicted molecular weight of 70,780. The E. coli derived protoxin gene product is biologICally active against three species of Lepidopteran (Plu.lelia maculipennis, He/iolhis assulta, Spodoptera litura) and a species of Dip Leran( Culex pipines) larvae in bioassay.
Drought stress is a crucial environmental factor determining crop survival and productivity. The goal of this study was to clearly identify a new drought stress-tolerance gene in Brassica rapa. From KBGP-24K microarray data with the B. rapa ssp. pekinensis inbred line 'Chiifu' under drought stress treatment, a gene which was named BrDSR (B. rapa Drought Stress Resistance) was chosen among 738 drought-responsive unigenes. BrDSR function has yet to be determined, but its expression was induced over 6-fold by drought. To characterize BrDSR, the gene was isolated from B. rapa inbred line 'CT001' and found to contain a 438-bp open reading frame encoding a 145 amino acid protein. The full-length cDNA of BrDSR was used to construct an over-expression vector, 'pSL100'. Tobacco transformation was then conducted to analyze whether the BrDSR gene can increase drought tolerance in plants. The BrDSR expression level in T1 transgenic tobacco plants selected via PCR and DNA blot analyses was up to 2.6-fold higher than non-transgenic tobacco. Analysis of phenotype clearly showed that BrDSR-expressing tobacco plants exhibited more tolerance than wild type under 10 d drought stress. Taking all of these findings together, we expect that BrDSR functions effectively in plant growth and survival of drought stress conditions.
Proceedings of the Korean Society of Embryo Transfer Conference
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2002.11a
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pp.97-97
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2002
Human eryhropoietin (EPO) is acidic glycoprotein hormone that plays key role in hematopoiesis by facilitating differentiation of erythrocyte and formation of hemoglobin (Hb) and is used for the treatment of anemia. Human EPO is consist of 166 amino acids which is modified by three N-glycosylations (24, 38, 83) and single O-glycosylation (126). N-glycosylation is reported to be related to the cellular secretion and activity of EPO. In this study, we examined effects of mutagenesis in glycosylation site of recombinat hEPO for the cellular secretion during production from cultured CHO cell. We produced rhEpo which was cloned by PCR from human liver cDNA (TaKaRa) in cultured CHO cell. Using supernatant of the culture, ELISA assay and western analysis were performed. To estimate biological activity, 20IU of rhuEpo was subcutaneously injected into four ICR mice. After 8 days, HCT level was increased average 13 per cent, RBC was increased ca. 2${\times}$10$\^$6//${\mu}\ell$. In disease model Rat (anemia c-kit, WSRC-WS/WS), HCT was increased ca. 12%, RBC was increased ca. 1.6${\times}$10$\^$6//${\mu}\ell$. These results suggests that rhEpo we produced has biological activity. To remove glycosylation site by substituting 24, 38, 83, and 126th asparagine (or serine) with glutamic acid, overlapping -extension site-directed mutagenesis was performed. To add novel glycosylation sites, 69, 105th leucine was mutated to asparagine. Mutant EPO construct was transfected into CHO cell. Supernatant of the cell culture was analyzed using ELISA assay with monoclonal anti-EPO antibody (Medac, Germany). Since, several reports for mutagenesis of glycosylation sites showed case-by-case results, we examined both transient expression and stable expression. Addition of novel glycosylation sites resulted no secretion while deletion mutants had little effect except some double deletion mutants (24/83 and 38/83) and triple mutant. We suggest that not single but combination of glycosyl group affect secretion of EPO.
$Tomato$$spotted$$wilt$$virus$ (TSWV)-infected $Capsicum$$annuum$ plants were collected from open fields during June to July in 2010. The TSWV isolates were designated as Gneung, Ghang-Kjj, Gchang-Njc, Ghae, and Pap. The nucleotide sequence of the nucleocapsid protein (N) and movement protein (NSm) of the five isolates was determined. The pathogenicity of the five isolates was determined on 14 $C.$$annuum$ cultivars two times by using mechanical inoculation. The five isolates induced different response: Both Gneung and Gchang-Kjj did not infect any of the cultivars in the 2nd trial, while Gchang-Njc, Ghae and Pap infected 11, 6 and 13 of 14 cultivars, respectively. The five isolates also were tested on $Solanum$$lycopersicum$ breeding line TGC09-71 and three $Nicotiana$ species. $S.$$lycopersicum$ showed a similar response to the five isolates as did $C.$$annuum$. Both Gchang-Njc and Ghae infected systemically all three $Nicotiana$ species tested. While both Pap and Gneung did not infect any of the $Nicotiana$ species tested. In conclusion, five TSWV isolates induced different infection spectra in $C.$$annuum$ cultivars, $Nicotiana$ species and an $S.$$lycopersicum$ breeding line. Amino acid sequence analysis of the NSm gene could not support or explain the different infection spectra of the five isolates. This study indicated that various isolates must be used as virus inocula for evaluation of $C.$$annuum$ and $S.$$lycopersicum$ cultivars in breeding programs for TSWV resistance.
Black necrotic spots were observed from the fruits of paprika that were cultivating in a vinylhouse. The casual agents of the symptom were identified as several isolates of Pepper mild mottle virus (PMMoV) by responses of indicator plants, electron microscopy, and RT-PCR analysis. Symptoms of the viral disease were mild mottle in the young leaves, necrotic spots on the fruits and the fruit apex of paprika, but the symptoms were not shown on the mature leaves. All of the PMMoV isolates were determined as $P_{1.2.3}$ pathotypes from the biological responses on the chilli pepper lines used for discrimination of tobamovirus pathotypes. Pathogenicity of the PMMoV isolates was also confirmed using mechanical inoculation method to paprika seedlings. The coat protein (CP) genes of the PMMoV isolates were compared at the nucleotide and amino acid levels with the previously published PMMoV isolate. The isolates share 96 to 99% CP nucleotide identity among the isolates. The CP of $P_{1.2}$-pathotype PMMoV-P2 presented Met at position 139, But the CPs of $P_{1.2.3}$-pathotype PMMoVs from paprika showed Met to Asn substitution at the same position. This is the first report of identification of $P_{1.2.3}$-pathotype PMMoV isolates from paprika in Korea.
This experiment was conducted to investigate the feed value of dried aloe leaf meal and the changes of blood values in growing pigs A total of 48 three crossbred pig(Landrace${\times}$Yorkshire${\times}$Hampshire) weighing average 25kg initially were randomly distributed into 12 groups of 4 heads(2 females and 2 males) each There groups were alloted on one of the following 3 dietary treatment : non-supplumented diet (control group), diet supplemented with 3% of dried aloe leaf meal(Aloe 3% group), diet supplemented with 6% dried aloe leaf meal(Aloe 6% group). The results obstained in feeding trial for 6 weeks and analysis of blood were summarized as follows : 1. In the chemical composition of dried aloe leaf meal contents of crude protein and crude ash were 9.43% and 15.10%, respectively. Amino acid composition was also inferior to other grain and bran feeds. 2. Daily gain of control, Aloe 3% and 6% groups were 740.5, 658.1 and 197.1 g respectively. Three were significant difference in daily gain among groups( p<0.05) and tended to be decreased with increasing levels of dried aloe leaf meal. 3. Daily feed intake of control, Aloe 3% and Aloe 6% groups were 1,960.5, 1,737.0 and 1,123.0 g, respectively. There were significant differences in daily feed intake among treatments(p<0.05) and tended to be decreased with increasing levels of dried aloe leaf meal. 4. Feed efficiency of control, Aloe 3% and Aloe 6% groups were 2.72, 2.63 and 5.70 respectively. Feed efficiency for pig fed diet supplemented with 3% of dried aloe leaf meal was a little superior to control, although no statistical difference was obstained between two treatments. 5. The digestibilities of dry matter, crude protein, nitrogen free extract and extract were significantly (p<0.05) higher for control group than for Aloe 3% and Aloe 6% groups. But there were no significant differences in digestibility of crude fat and crude fiber between control and Aloe 3% groups. 6. There were no difference between aloe leaf meal administrated groups and control group in blood picture and serum chemistry.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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