유미 양서류의 일종인 액솔로를 (Ambystoma mexicanum)의 정자가 난자 속으로 들어가는 일련의 과정을 관찰하였다. 액솔로틀의 난은 전형적인 다수정 현상을 보이는 것으로 나타났으며, 수정이 일어날 때 정자의 꼬리를 포함한 모든 부분이 난자의 표면을 뚫고 들어간다. 각각의 정자가 들어가는 점은 난자 표면에 명확한 부분 즉, 정자 침입점으로 구별된다. 그러나, 수정이 시작되는 단계에서는 난자의 표면에 별다른 붕괴현상이 관찰되지 않으며, 일단 수정이 끝난 후에는 정자 침입점은 긴 미세융모로 덮이게 된다.
Mexican axolotl(Ambystoma mexicanum)의 생활사, 기원, 실험실내에서의 유지 및 교배방법 등을 소개한다. 이 종은 난자형성과 발생의 연구면에서 몇가지 대단히 유리한 점을 가지고 있다. 즉 큰 염색체를 가진 대형의 난자를 보유하고 있는 점, 난자가 수란관을 통과하는 동안 총배설강내에서 수정하는 점, 초기 배아의 실험발생학, 세포학 및 생화학적 연구에 쉽사리 이용할 수 있다는 점과, 무엇보다도 난자형성과 배발생동안의 여러 가지 중요한 기능에 영향을 미치는 30여개 이상의 유전자를 이용하여 유전자조절현상을 밝혀낼 수 있다는 점이다.
Keskin, Ilknur;Gurgen, Duygu Gursoy;Avinca, Didem;Ozdemir, Ekrem Musa;Keskin, Suat Utku;Karabulut, Seda
대한수의학회지
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제61권3호
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pp.25.1-25.7
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2021
The axolotl has extraordinary regeneration capacity compared to other vertebrates. This remarkable potential has been attributed to its life-long neoteny, characterized by the exhibition of embryonic characteristics at the adult stage. A recent study provided a detailed morphological analysis of the sperm morphology of the Ambystoma mexicanum using routine and detailed histological techniques. The primary purpose of the present study is to describe a simple and inexpensive method for evaluating the morphology of axolotl sperm. In this study, spermatophore structures were collected and spread on slides and air-dried. The slides were stained with periodic acid Schiff, toluidine blue, Masson's trichrome, Giemsa, Spermac, and Diff-Quik dye for a morphological examination. The slides were coated with gold/palladium for a scanning electron microscopy examination. The sperm of the axolotl consisted of an elongated head, a neck, and a flagellum covered with an undulating membrane. The lengths of the midpiece, tail, and head were 8.575 ㎛, 356.544 ㎛, and 103.661 ㎛, respectively. In the flagellum part, the wavy membrane structure, whose function has not been explained, surrounds the tail. The data obtained from this study will constitute an important step in designing future research on the reproductive and regeneration capacity of the axolotl.
From the present study, following conclusions can be drawn: 1. lide in other species, axolotl FGF-8 is proposed to play a similar role in the early phase of limb development. However, the mechanism of its expression might be somewhat different from amniotes considering its characteristic mesenchymal expression. 2. In the regenerating axolotl limbs, Fgf-8 expression profile suggests that it is involved in wound gealing, dedifferentiation, and blastema formation. 3. Exoggenously supplied FGF-8 can accelerate blastema formation and concomitantly increase the Msx-1 expression level at the early stage of limb regeneration. Furthermore, it can partially substitute for nerve factor(s) as has been indicated by the induction of blastema formation in the denervated regenerates after FGF-8 application. 4. The unique expression feature of Fgf-8 in hte mesenechymal tissue of the regenerating axolotl limb might be casually related to its remarkable regeneration capacity of urodele.
현재 약 40종의 유전인자가 Mexican axolotl에 알려져 있다. 이 유전인자 들은 모두 열성인자로서 발생에 미치는 영향과 시기에 따라 5군으로 분류되었다. 즉, 난자형성에 영향을 미치는 유전자군(maternal-effect gene), 인의 크기에 영향을 미치는군, 특수 조직이나 기관발생에 영향을 미치는군, 모든 세포와 조직에 치사 작용을하는 유전자군(autonomous lethals), 그리고 색소세포에 영향을 미치는 유전자군들이다. 본 논문은 이 유전자들의 표현형과 현재 추구되고 있는 실험방법들에 대하여 간단히 소개하였다.
리소솜 acid phosphatase(LAP)를 포함하는 리소솜 산성 가수 분해 효소는 세포 내,외 성분의 분해에 중요한 기능을 수행하며, 유미 양서류의 다리 재생 과정에서 LAP의 효소 활성도는 탈분화시기에 특이적으로 증가하는 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 멕시코산 도룡뇽의 일종인 axolotl(Ambystoma mexicanum)의 다리 재생 가정에서 정상적인 다리 재생 조직과 retinoic acid (RA)가 처리된 다리 재생 조직에서 LAP의 분포 및 발현을 면역 화학적 방법으로 조사하였다. Axolotl의 다리 재생 조직에서 한국산 도룡뇽(Hynobius leechii)의 LAP에 대한 단일 항체를 이용한 면역 반응도는 줄 탈분화시기에 있는 wound epidermis와 미분화된 중배엽성 세포인 blastema 세포, 탈분화 상태의 근육과 연골 부위 세포에서 나타나는 것으로 조사되었다. 또한 LAP의 면역 반응도는 재생단게의 초기에 점차 증가하여 탈분화시기 동안 최대치에 도달하였으며, 재분화가 시작되면서 basal level 까지 서서히 감소하는 것으로 나타나\ulcorner. 유미 양서류의 다리 재생 과정에서 골격 패턴의 복제를 유발시키는 것으로 알려져 있는 RA 처리는 LAP의 면역 반응도를 강화시키는 것으로 나타나\ulcorner. 즉, RA가 처리된 다리 재생 조직에서 LAP의 면역 반응도는 정상적인 다리 재생 조직에서 보다 강하게 나타났으며, 면역 반응도가 나타나는 시기 또한 연장되는 것으로 조사되었다. 이와 같은 결과는 다리 재생 조직에서 RA 처리가 탈분화시기의 연장에 관여한다는 것을 시사하고 있다.
재생중인 양서류의 다리에 레티노익산을 처리하면 패턴 복제가 유발되며 이러한 현상은 탈분화 정도와 깊이 연관이 있다. 본 연구에서는 한국산 도롱뇽(Hynobius leechii)과 멕시코산 도롱뇽의 일종인 엑소로틀(Ambystoma mexicanum)의 다리 재생 과정에서 탈분화 과정에 관여할 것으로 추정되는 트립신 및 키모트립신과 유사한 단백질 분해 효소의 활성도를 재생 단계에 따라 조사해 봄으로써 이들 단백질 분해효소의 활성도와 레티노익산에 의해 증가되는 탈분화 상태의 정도사이에 상관 관계가 있는지를 알아 보고자 하였으며 다리 생산 기간중 상기 효소의 활성도 변화에 종 특이적 차이가 존재하는 지를 알아보고자 하였다. 연구 결과, 이들 효소의 활성도는 탈분화시기에서 최대에 도달함을 알수 있었고 레티노익산 처리는 트립신 유사 단백질 분해 효소의 활성도를 증가시키는 것으로 나타났다. 이러한 효과는 한국산 도롱뇽에서 두드러졌고 이는 레티노익산 처리에 의한 반응에 종 특이적 차이가 있음을 반영하는 것으로 해석 되었다. 본 연구 결과는 트립신 및 키모트립신 유사 단백질 분해 효소가 재생중인 다리의 탈분화 과정에 중요한 작용을 하고 있으며, 이들 단백질 분해 효소가 레티노익산 처리에 의한 탈분화 과정의 강화에 관여하리라는 것을 암시한다.
Recent evidence has suggested that trunk neural crest cell generally assumed to have equivalent differentiation potentials, demonstrate differentiation bias along the anterior/posterior axis. In amphibian and fish, neural crest cells give rise to three chromatophore types, melanophores, xantho-phores, and iridophores. Each pigment cell type has distinct characteristics but there is speculation about the cellular plasticity that exists among them. Neural crest cells migrate along specific routes, ventromedially and dorsolaterally. Neural crest cells that travel dorsolaterally are the first cells to begin migration in the axolotl and are the major contributors to the visible pigment pattern. Many factors and mechanisms that are responsible for guiding migratory neural crest cells along potential pathways or determining their fate remain unknown. A single lineage of the crest, which becomes restricted to one of the three pigment cell types, gives us the opportunity to examine the existence of neural crest stem cell populations and cellular plasticity. Study presented here showed results from recent in vitro studies designed to identify parameters influencing differentiation events of individual neural crest-derived pigment cell lineages. Melanophore production from neural crest explants originating from different levels along the anterior/posterior axis of wild type-axolotl embryos were compared and demonstrate that the differentiation of melanophores is enhanced in subpopulation of neural crest treated with forskolin. Forskolin (an adenylate cyclase activator) increases intracellular CAMP concentration and eventually activates the protein kinase-A signaling pathway. Melanophore number, melanin content, and tyrosinase activity in explants taken from the anterior-most region of the crest increased significantly in response to forskolin treatment. This study suggests implications of region specific influences and developmental regulation in the development of pigment pattern.
앞서 본 연구실에서는 도롱뇽(Hynobius leechii) 다리 재생 과정중 기존의 조직들이 와해되고 조직 및 그 구성 세포의 분화 양성이 소멸되는 탈분화 과정중 시소솜 acid phosphatase의 활성도가 급격히 증가함을 보고한바 있다. 본 연구에서는 다리 재생 과정에서 이 효소의 시간적, 공간적 분포 및 발현 양상을 알아보기 위해 단일 항체를 만들었다. 리소솜 acid phosphatase에 대한 22단일 항체균중 5항체군이 탈분화 조직과 강한 면역반응을 보였으며 이들의 시간적, 공간적 반응 양상은 조직의 탈분화 상태와 일치하였다. 이 결과는 탈분화 과정시 증가하는 리소솜 acid phosphatase의 활성도가 이 효소의 시간적, 공간적 분포 및 발현 양상과 밀접히 연관되어 있음을 반영하며 탈분화 과정중 이 효소의 역할이 매우 중요함을 시사하고 있다. Immunoblotting 결과 이들 단일 항체군은 리소솜 acid phosphatase의 monomer인 53kDa밴드를 인식하였다. 한편 도롱뇽의 리소솜 acid phosphatase에 대한 단일 항체와 타종의 LAP에 대한 cross-reactivity를 immunoblot으로 조사한 결과 양서류인 axolotl(Ambystoma mexicanum)과 Xenopus laevis에서는 유사한 분자량 band에서 반응이 나타났으나 그외 생쥐, 초파리, C.elegans에서는 cross-reactivity가 없는 것으로 조사되었다. 이러한 결과들은 본 연구에서 만들어진 단일 항체가 한국산 도롱뇽의 리소솜 acid phosphatase를 특이적으로 인식하며 나아가 양서류내에서는 이 효소의 상동서이 높음을 시사하고 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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