An alkalophilic microorganism capable of degrading dyes was developed for the treatment of alkaline dye solution. This strain was identified as Pseudomonas species. Using this microorganism, biological treatment of dye was studied in Erlenmeyer flasks. The characteristics of this microorganism were observed under various incubating-condition such as temperature, pH, nitrogen source, and macronutrients concentration. The removal effciencies of Disperse Red 60 from synthetic wastewater were 33.5 ~ 36.9% at the range of $30{\sim}40^{\circ}C$, and they were 31.1 ~ 36.7% at the range of initial pH 8 ~ pH 10, respectively. The optimal culture medium was found to be 0.25%(w/v) yeast extract, 0.25%(w/v) polypeptone, 0.1%(w/v) $KH_2PO_4$, 0.2%(w/v) $MgSO_4{\cdot}7H_2O$, and 1.0%(w/v) $Na_2CO_3$. In treatment of various dyes using Erlenmeyer flasks, the removal effciencies of Disperse Blue 87, Disperse Yellow 64, Disperse Red 60, Acid Blue 193, Acid Red 138, and Direct Yellow 23 were found to be 76%, 71%, 58%, 93%, 94%, and 90% respectively after 24hrs reaction of alkalophilic strain Pseudomonas sp. YBE-12.
토양으로부터 호알칼리성 미생물을 분리하여 동정 한 결과, Bacillus속의 특성을 나타내어 Bacillus sp. SH-8로 명명하였다. Bacillus sp. SH-8은 초기 pH 9.0이상의 알칼리에서만 생육이 가능하였으며 중성 pH에서는 불가능하였다. Bacillus sp. SH-8로부터 U.V.조사에 의해 중성배지에서도 생육이 가능한 변이주를 분리하여 Bacillus sp. SH-8M으로 명명하였으며, 초기 pH 6.9부터 11.0까지 생육이 가능하였다. 따라서 이들 두 균주는 pH 변화에 따른 생육과 효소생산을 비교, 검토하는데 적합한 균주로 생각된다.
An alkalophilic bacterium producing alkaline protease(s) was isolated from soil. It was a Gram-positive, non-sporulating, immotile, irregular rod, strictly aerobic, and weak acid-forming bacterium. The morphological, physiological, and biochemical characteristics of the isolate resembled those of the Coryneform bacteria. However, there was not any species within this genera to which this microorganism can be closely matched. Therefore, it is provisionally identified as a Coryneform bacterium TU-19.
In order to obtain a strain of producing lipase which has resistance against alkaline and detergent, a screening test was carried out. Among 500 strains isolated from soil samples, the strain J-19 was selected for this study. The composition of the optimum medium for the highest lipase production was 2.0% glycerin, 1.0% corn steep liquor, 2.0% yeast extract, 0.1% $MgSO_4$$7H_2O$, 0.2% $K_2HPO_4$, 1.5% soybean oil and 0.1% LAS(linear alkylbenzene sulfonate) with initial pH value of 10.0 and 3-day cultivation at $25^{\circ}C$. The lipase activity of the strain J-19 under optimal condition was 3.3. units/ml, which was increased about 1.3-fold than that of basal medium.
An alkalophilic microorganism for overproduction of cyclodextrin glucanotransferase (CGTase) was newly isolated from hot-water spring soil, and identified as Bacillus firmus var. alkalophilus H609. The strain maintained stability during preservation and cultivation for the enzyme production, and produced significant amount of CGTase corresponding to the volumetric activity of 75 units/mL at 37C, initial pH of 11.2, and after 40 hours. The strain excreted several different proteins showing CGTase activity that catalyzed the formation of mainly beta-and Gamma-type cyclodextrin (ratio of 7:1) from soluble starch without accumulation of alpha-type. Other enzymatic properties were also investigated.
Xylanase를 생산하는 호알칼리성 균주를 토양으로부터 분리하여 동정하였다. 토양으로부터 분리한 호알칼리성 균주 3000여종 중 xylanase 활성이 가장 높은 균주인 strain DK-2386 균주를 선별하였다. Gram 염색과 SEM을 통한 형태학적 특성을 관찰하였으며, Methods for General and Molecular Bacteriology와 Bergey's manual of systematic bacteriology, 그리고 Biochemical tests for identification of medical bacteria에 준하여 생화학적 특성을 확인한 결과 배양액의 색은 붉은 빛을 나타내었으며, Gram양성 간균, 내생포자형성, catalase 양성, oxidase 양성, 혐기성 양성, glucose로부터 gas 형성 양성, casein 가수분해 양성, starch 가수분해 양성, CMC 가수분해 양성, xylan 가수분해 양성, nitrate 환원능 양성이며 10% NaCl 농도에서도 생육하는 것을 확인하였다. 균체의 지방산 조성 분석 결과 $C_{15:0\;ISO}$ 27.35%와 $C_{15:0\;ANTEISO}$ 31.54%, $C_{16:0}$ 9.70%로 이루어져 Bacillus속으로 동정되었으며, 16S rDNA 염기서열 분석결과 B. agaradhaerens와 100%의 유사성을 갖는 것을 확인하였다. (사)한국종균협회로부터 분양받은 Bacillus agaradhaerens 40952, B. alcalophilus와 strain DK-2386 균주사이의 생화학적 특성을 비교한 결과 B. agaradhaerens와 속과 종이 같으나 미세하게 특성이 다른 균주로 판단되어 B. agarad haerens DK-2386이라 명명하였다.
The study was performed to investigated the excellent microbial anticaries substance which is more effective than the chlorohexidine in the dental caries treatment. For the screening of alkaliphilic microorganism, more than 1200 bacterial strains were isolated from sea soil sample. A typ-ical strain which produced the most excellent antimicrobial substance was selected. The strain was identified novel alkalophilic Bacillus sp. through the results of morphological, biochemical and chemotaxonomical characteristics and 16S rDNA sequencing and designated as Bacillus alkalophilshaggy JY-827.
토양에서 분리한 여러 알칼리성 세균을 대상으로 제한효소의 유무를 조사하여 Bacillu sp. 8-13으로부터 제한효소의 활성을 발견할 수 있었다. 이 균주의 제한효소는 streptomycin sulfate 침전, ammonium sulfate 침전, DEAD-cellulose와 phosphocellulose ion exchange colum chromatography와 phosphocellulose ion exchange colum chromatography 과정을 통하여 정제하였고 0.1 SDS를 포함하는 7.5 polyacrylamide gel electrophoresis로 subunit의 분잘량을 조사한 결과 약 32,000 dalton이었다. 또 특히 이 균주는 형태적 배양학적 특성이 Bacillus alkalophilus subsp. haldurans와 매우 유사하며, 최적 생육, pH는 10.3이었고, 최적 증식온도는 $50^{\circ}C$ 이었다.
토양에서 분리된 호알칼리성 coryneform bacteria TU-19는 적어도 세종류의 단백질분해효소(Protease I, II, III)를 생성분비하였다. 이 균주의 효소생산과 관련된 배양조건을 조사해본 결과 최적온도 및 pH는 각각 $30^{\circ}C$와 10.0인 것으로 나타났다. 이틀 배양된 배양액으로부터 이 효소들을 정제하기 위해서 ammonium sulfate fractionation, gel filtration 및 QAE-Sephadex column chromatography 등을 순차적으로 행하였다. 그 결과 이들 세종류의 효소는 SDS-PAGE pattern으로 평가했을 때 single band로 순수 정제되었으며, 각각의 분자량은 120, 80, 45 kDa이었다. 정제된 효소의 특성을 살펴보면 Pretense I과 II의 최적 pH와 온도는 각각 $10.5,\;45^{\circ}C$이었으며, Protease III는 11.0과 $50^{\circ}C$로 나타났다. 또한 이들 세효소는 10 mM PMSF 농도에서 효소활성을 완전히 상실하였으며, pCMB, 1,10-phenanthroline, IAA, EDTA에는 별 영향이 없는 것으로 보아 serine protease의 일종으로 생각된다.
호알칼리성 protease를 분비하는 토양에서 분리된 Bacillus sp. DK1122 균주로부터 효소의 생산조건을 검토 후, 효소를 정제하고 특성을 알아보았다. 본 균주의 효소생산 최적 배지조성은 0.5% (w/v) glucose, 0.8% (w/v) yeast extract, 0.5% (w/v) polypeptone, 0.1% (w/v) K2HPO4, 0.02% (w/v) MgSO4· 7H2O, 1% (w/v) Na2CO3, 3% (w/v) NaCl, pH 9.0이었으며, 종배양액 0.5% 접종시 40℃에서 24시간 배양했을 때 효소 생산량이 가장 높았다. Bacillus sp. DK1122가 생산하는 alkaline protease를 70% 포화 ammonium sulfate로 침전시키고, CM-Sepharose column chromatography에 의해 23.9%의 수율에 2.8배의 정제도를 지니는 효소를 얻을 수 있었다. SDS-PAGE를 통해 정제된 protease는 27 kDa의 크기의 단일 subunit으로 확인되었고, 정제된 효소의 최적 pH는 9.0, 최적온도는 60℃였으며, 50℃에서 1시간까지 열에 안정하였고, 60℃에서 10 mM CaCl2 첨가 후 3시간까지 90%의 활성을 유지하여 Ca2+에 의해 열안정성이 증가하였다. 본 연구를 통해 정제된 호알칼리성 protease는 식품, 세제 및 관련산업에서의 응용성이 매우 높을 것으로 기대된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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