• 한국미생물·생명공학회지
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• 제26권4호
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• pp.290-296
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• 1998

Alkaline protease 생산력이 우수한 야생형인 A. oryzae val. oryzae의 핵을 순수 분리하여 영양요구성 변이주인 P. chrysogenum(T$yr^{-}$)의 원형질체에 전달하는 핵전이를 이용하여 종간잡종을 형성시킨 후 이들 형질전환체으로 부터 alkaline protease 고생산 균주를 획득하였다. 핵전이를 위한 원형질체 형성 및 재생 조건에서는 Novozym 234의 농도 1%, 삼투안정제는 0.6 M KCl, 효 소의 처리 시간은 180분 그리고 최적 pH는 5.8로 나타났다. 핵전이에 의한 형질전환의 빈도는 1.3~3.8$\times$$10^{-4}$으로 비교적 낮은 편이었으며, 유전적 안정성, conidia의 크기, DNA함량의 측정 그리고 핵염색의 결과 형질전환체의 핵형은 aneuploid로 추정되었다. 형질전환체의 alkaline protease 활성은 모균주와 비교하여 1.1~2.2배 증가하였다.다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제22권5호
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• pp.515-521
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• 1994

A bacterial strain, which showed the high protease activity at low temperature and the high tolerance for the surfactant, was isolated from soil and identified as Xanthomonas sp. YL-37. The optimal temperature, initial pH, and cultivation time for the production of the alkaline protease by Xanthomonas sp. YL-37 were 20$\circC , 11.0, and 84 hours, respectively. In the jar fermenter culture of Xanthomonas sp. YL-37, the alkaline protease activity was about 15,000 DU/ml/-broth after cultivating for 108 hours. The optimal pH and temperature for the protease activity were 70$\circC and 11.0, respectively. The protease was relatively stable at the pH range of 7.0~12.0 and at the temperatures below 50$\circC . The protease activity at 20$\circC was about the level of 40% of its activity at 70$\circC . The enzyme was suggested as a serine protease because the enzyme activity was inhibited by phenylmethane sulfonyl fluoride, a serine modifier.

• 미생물학회지
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• 제26권4호
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• pp.355-361
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• 1988

성장속도가 빠르고포지형성이 우수한 방사균 일주를 토양에서 분리한 뒤 분리균의 특성을 조사한 결과 세포외 단백질 분해 효소가 중성과 알카리성의 두 종류가 생성되었으며 $\beta$-lactamase도 생성함을 알았다. 이 균주를 acriflarin 또는 NTG로서 처리하여 얻은 변이주는 포자의 형성, $\beta$-lactamase의 생성 및 protease의 생합성 능력이 소실 또는 크게 저하되었다. 일단계의 변이주 취득에서 동시에 형질의 변화가 다양하게 나타난 원인을 규명한 결과 호알카리성 protease의 생합성이 크게 저하되었음을 알았다. 따라서 방선균에서 포자형성과 호알카리성 protease의 활성이 일정한 연관성이 있을 것으로 판단되었다.

• 한국양식학회지
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• 제18권4호
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• pp.245-251
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• 2005

본 연구는 rotifer, B. rotundiformis를 대상으로 소화효소 실험을 하기 위해 이들이 가지고 있는 소화효소의 최고 활성 조건을 확인하기 위해 수행하였다. rotifer, B. rotundiformis의 $\alpha$-amylase, total alkaline Protease, trypsin 및 TG-lipase는 Tris-HCl buffer 보다 phosphate-NaOH buffer 안정적인 효소활성을 보였다. $\alpha$-amylase, trypsin 및 TG-lipase는 pH 8.0에서, total alkaline proteaset pH 7.0에서 높은 효소 활성을 나타내었다. $\alpha$-amylase 활성은 $40^{\circ}C$에서 가장 높은 활성을 보였으며, total alkaline pretense와 trypsin은 $55{\~}60^{\circ}C$의 온도에서 높은 활성을 나타내었다. 반면 TG-lipase 활성은 $25{\~}30^{\circ}C$의 낮은 온도에서 활성이 높았다. $\alpha$-amylase, total alkaline pretense, trypsin 및 TG-lipase의 활성의 적정 기질 농도는 $3.5\%$ starch, $\0.6%$ azo-casein, $87.5{\mu}M$ BApNA and 81.2 mM olive oil이었다. $\alpha$-amylase, total alkaline protease, trypsin 및 TG-lipase의 활성의 적정 반응시간은 40, 60, 30 and 25 min으로 나타났다. 본 연구 결과에서 얻어진 자료는 rotifer, B. rotundiformis의 소화효소 연구를 위한 기초 자료로 이용될 것이다.

• 환경위생공학
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• 제5권2호
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• pp.103-110
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• 1990

For production of thermophilic and alkaline protease, Bacillus sp. strain AP-5 was isolated from a compost. The production of the protease was reached at maximum for 4 days at $55^{\circ}$ in standing culture. Chitin and Cellulose as carbon source, and Skim Milk as nitrogen source were favorable for the production of the enzyme. Optimal temperature and optimal pH of the enzyme was $55^{\circ}$ and 11, respectively. Metal ion didn't effect on the enzyme activity, the protease was very stable at heat treatment of 30 min at $55^{\circ}$.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권6호
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• pp.545-551
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• 1989

알칼리성 Bacillus속 8-16 균주의 내열ㆍ알칼리성단백질 분해효소를 정제하여 그 특성을 조사하였다. 본 균주의 알칼리성 protease를 아세톤침전, CM-셀룰로즈크로마토그래피, Sephadex G-100 및 G-75 젤 여과법으로 정제하였고 비활성이 37배되게 하여 단일단백질이 될 때까지 순수정제하였다. 이 효소는 7$0^{\circ}C$ pH 11에서 pH 12 사이에서 최대 활성을 나타냈고 6$0^{\circ}C$에서는 한시간 동안 안정하였다. 이 효소의 $K_m$치는 1.3mg/$m\ell$이며 분자량 33,000으로 추정된다. 또한 이 효소는 Cu$^{2+}$ 및 Mn$^{2+}$에 의해서 약간 활성화되고 Ag$^+$, Hg$^{2+}$ 및 PMSF에 의해서 저해되므로 활성부위에 serine기가 관여하는 것으로 추정된다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권2호
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• pp.169-177
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• 1992

토양으로부터 alkaline protease 생성능이 강한 Streptomyces griseus HC-1141을 분리하였으며, 효소생산의 최적 배양조건은 0.5 casein, 0.05 ammonium chloride, 0.1 ferrous sulfate, 2.0의 lactose, pH 8.0에서 84시간 배양했을 때이다. 효소의 정제는 ammonium sulfate 침전, DEAE-cellulose ion exchange chromatography, Sephadex G-150 gel filtration, crystallization으로 하여 53.23배 정제할 수 있었으며 polyacrylamide gel 전기영동상 단일밴드를 나타내었다.

• 약학회지
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• 제34권1호
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• pp.47-53
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• 1990

Alkalophilic bacteria isolated from compost were selected, identified and tested for production of alkaline protease. The bacterium was tentatively assigned to Bacillus sp. based on the morphological, cultural and biochemical characteristics. The optimum pH of growth was 10 Galactose and Sodium glutamate enhanced the production of alkaline protease. The protease was most active at pH 11.0 and $60^{\circ}C$ and stable in the range of pH 5-11 and temp. $30^{\circ}-55^{\circ}C$. The protease was stabilized by the presence of calcium salts.

• Applied Biological Chemistry
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• 제38권2호
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• pp.106-110
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• 1995

알칼리성 protease를 생산하는 균을 고추장에서 분리하여 Alteromonas sp. CN301로 동정하고 그 알칼리성 protease를 생산하여 정제효소의 성질을 조사한 결과, 최적 pH 12.0, 최적 온도 $35^{\circ}C$이었으며 pH 안정성은 $pH\;6.0{\sim}13.0$ 범위에서 80% 이상의 잔존효소 활성을 나타냈고 $50^{\circ}C$에서 1시간 처리로 64%의 활성을 보였다. SDS-PAGE에 의한 분자량은 31,000 dalton이었고 $Hg^{2+}$를 제외한 다른 금속이온에 대해서는 저해를 받지 않았다. 계면활성제인 Triton X-100, Tween 20과 80은 이 효소의 활성을 상승시키는 효과를 보였으며 EDTA와 PMSF에 의하여 효소활성이 저해되므로 효소분자 중에 금속이온을 가지는 serine protease로 생각되었다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제20권4호
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• pp.388-394
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• 1991

Alkaline protease producing bacteria were isolated from soil and identified as Bacillus sp. CW-1121. It was found that the production of alkaline protease reached to maximum in 5 day of fermentation at 4$0^{\circ}C$. The enzyme was purified by ammonium sulfate precipitation, gel filtration on Sephadex G-150 and DEAE-cellulose ion-exchange chromatography. The homogeneity of the purified enzyme was verified by polyacrylamide gel electrophoresis. The enzyme was purified 5.72 fold and yield of the enzyme purification was 16.71%. When the purified enzyme was applied to sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, the molecular weight was estimated to be 55, 000.