The immobilization of enzyme is one of the key issues both in the field of enzymatic research and industrialization. In this work, we reported a facile method to immobilize Candida Antarctica lipase B (CALB) in alginate carrier. In the presence of calcium cation, the enzyme-alginate suspension could be cross-linked to form beads with porous structure at room temperature, and the enzyme CALB was dispersed in the beads. Activity of the enzyme-alginate composite was verified by enzymatic hydrolysis reaction of p-nitrophenol butyrate in aqueous phase. The effects of reaction parameters such as temperature, pH, embedding and lyophilized time on the reactive behavior were discussed. Reuse cycle experiments for the hydrolysis of p-nitrophenol butyrate demonstrated that activity of the enzyme-alginate composite was maintained without marked deactivation up to 6 repeated cycles.
To graft N-isopropylacrylamide (NIPAAm) onto alginate, varying dosages of ${\gamma}$-rays were irradiated onto alginate films in deionized water and methanol media, which are non-solvents of alginate. We investigated the hydrogels graft ratio, mechanical strength, swelling kinetics and ratio, and behavior with respect to drug release. The graft yield of NIPAAm increased upon increasing the irradiation dose. The use of the aqueous solution increased the graft yield relative to that obtained in methanol. The mechanical strength of the grafted hydrogels increased after grafting with NIPAAm. In a study of the swelling kinetics, we found that all hydrogels reached an equilibrium swollen state within 3 h. The equilibrium swelling ratio of the hydrogels decreased upon increasing the irradiation dose. The swelling ratio of the hydrogels decreased dramatically between 30 and 35$^{\circ}C$ because phase separation of NIPAAm occurred at 32$^{\circ}C$. The swelling process, with respect to the temperature change, was repeatable. An NIPAAm-grafted alginate containing a drug sustained its release rate until 3 h after an initial high drug release caused by a burst effect.
Several topical preparations containing lidocaine, a widely used local anesthetic agent, have been developed and marketed recently for the treatment of premature ejaculation. In this study, microemulsion(ME)-based hydrogels containing lidocaine were prepared by dispersing ME to hydrogel bases such as Carbopol, sod. alginate, and sod. carboxymethylcellulose. Lidocaine-containing ME was thermodynamically stable over 6 months and had a diameter ranging from 10 to 100 nm. In vitro skin penetration of lidocaine from ME-based hydrogels followed apparent zero-order kinetics. ME-based hydrogel showed higher drug penetration during fifteen minutes after application than alcoholic hydrogel, reference preparation. Tail flick test in rat was introduced to compare in vivo local anesthetic effects of different hydrogels, and the results showed that ME-based hydrogels are superior to other hydrogels. In optical microscopy, recrystallization of lidocaine was observed within 5 min after application of reference hydrogel, but there was no change in ME-based hydrogels even after 30 minnute. These results indicated that ME-based hydrogels had some advantages in skin penetration, anesthetic effect and physical stability compared with alcoholic hydrogels. Finally it is possible to conclude that ME-based hydrogels containing lidocaine is a good topical drug delivery system for the treatment of premature ejaculation.
Purpose: The object of this study is to develop a novel BMP-2 delivery system for continuous osteogenic differentiation and to induce osteogenesis of stem cells using a bi-phase alginate carrier in vitro. Methods: Alginate nanoparticle loaded BMP-2 was prepared by the reverse emulsification-diffusion technique. Physical properties and release profiles of alginate carriers were measured by Instron and ELISA kit, respectively. Cell viability and alkaline phosphate activity of hBMSCs differentiation was also evaluated by MTS and Metra BAP assays, respectively. Results: Optimal concentration for bi-phase alginate carrier was determined as 2 wt% by evaluating mechanical and biological properties, and differentiation of BMSCs for bone regeneration. The 2% bi-phase alginate carrier had the lowest initial and final release ratio. In addition, the 2% bi-phase alginate carrier had a little higher ALP activity than the homogeneous carrier. An improved controlled release profile was obtained by combining alginate hydrogel with lyophilized particles. Conclusion: Bi-phase alginate carrier has many advantages such as biocompatibility and controlled release capability. It is expected to be effective as a scaffold and carrier in bone tissue engineering.
The sustained release dosage form which delivers melatonin (MT) in a circadian fashion over 8 h is of clinical value for those who have disordered circadian rhythms because of its short halflife. The purpose of this study was to evaluate the gelling properties and release characteristics of alginate beads varying multivalent cationic species $(Al^{+++}, \; Ba^{++}, \; Ca^{++}, \; Mg^{++}, \; Fe^{+++}, \; Zn^{++})$. The surface morphologies of Ca- and Ba-alginate beads were also studied using scanning electron microscope (SEM). MT, an indole amide pineal hormone was used as a model drug. The $Ca^{++}, \; Ba^{++}, \; Zn^{++}, \; Al^{++}\; and\; Fe^{+++}\; ions\; except\; Mg^{++}$ induced gelling of sodium alginate. The strength of multivalent cationic alginate beads was as follows: $Al^{+++}\llFe^{+++} the induced hydrogel beads were very fragile and less spherical. Fe-alginate beads were also fragile but stronger compared to Al-alginate beads. Ba-alginate beads had a similar gelling strength but was less spherical when compared to Ca-alginate beads. Zn-alginate beads were weaker than Ca- and Ba-alginate beads. Very crude and rough crystals of Ba- and Ca-alginate beads at higher magnifications were observed. However, the type and shape of rough crystals of Ba- and Ca-alginate beads were quite different. No significant differences in release profiles from MT-loaded multivalent cationic alginate beads were observed in the gastric fluid. Most drugs were continuously released upto 80% for 5 h, mainly governed by the passive diffusion without swelling and disintegrating the alginate beads. In the intestinal fluid, there was a significant difference iq the release profiles of MT-loaded multivalent cationic alginate beads. The release rate of Ca-alginate beads was faster when compared to other multivalent cationic alginate beads and was completed for 3 h. Ba-alginate beads had a very long lag time (7 h) and then rapidly released thereafter. MT was continuously released from Feand Zn-alginate beads with initial burstout release. It is assumed that the different release rofiles of multivalent cationic alginate beads resulted from forces of swelling and disintegration of alginate beads in addition to passive diffusion, depending on types of multivalent ions, gelling strength and drug solubility. It was estimated that 0.2M $CaCl_2$ concentration was optimal in terms of trapping efficiency of MT and gelling strength of Ca-alginate beads. In the gastric fluid, Ca-alginate beads gelled at 0.2 M $CaCl_2$ concentration had higher bead strength, resulting in the most retarded release when compared to other concentrations. In the intestinal fluid, the decreased release of Ca-alginate beads prepared at 0.2 M $CaCl_2$ concentration was also observed. However, release profiles of Ca-alginate beads were quite similar regardless of $CaCl_2$ concentration. Either too low or high $CaCl_2$ concentrations may not be useful for gelling and curing of alginate beads. Optimal $CaCl_2$ concentrations must be decided in terms of trapping efficiency and release and profiles of drug followed by curing time and gelling strength of alginate beads.
Ku, Jongbeom;Seonwoo, Hoon;Jang, Kyoung-Je;Park, Sangbae;Chung, Jong Hoon
한국농업기계학회:학술대회논문집
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한국농업기계학회 2017년도 춘계공동학술대회
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pp.107-107
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2017
3D bioprinting is a technology to produce complex tissue constructs through printing living cells with hydrogel in a layer-by-layer process. To produce more stable 3D cell-laden structures, various materials have been developed such as alginate, fibrin and gelatin. However, most of these hydrogels are chemically bound using crosslinkers which can cause some problems in cytotoxicity and cell viability. On the other hand, thermosensitive hydrogels are physically cross-linked by non-covalent interaction without crosslinker, facilitating stable cytotoxicity and cell viability. The examples of currently reported thermosensitive hydrogels are poly(ethylene glycol)/poly(propylene glycol)/poly(ethylene glycol) (PEG-PPG-PEG) and poly(ethylene glycol)/poly(lactic acid-co-glycolic acid) (PEG/PLGA). Chitosan, which have been widely used in tissue engineering due to its biocompatibility and osteoconductivity, can be used as thermosensitive hydrogels. However, despite the many advantages, chitosan hydrogel has not yet been used as a bioink. The purpose of this study was to develop a bioink by chitosan hydrogel for 3D bioprinting and to evaluate the suitability and potential ability of the developed chitosan hydrogel as a bioink. To prepare the chitosan hydrogel solution, ${\beta}-glycerolphosphate$ solution was added to the chitosan solution at the final pH ranged from 6.9 to 7.1. Gelation time decreased exponentially with increasing temperature. Scanning electron microscopy (SEM) image showed that chitosan hydrogel had irregular porous structure. From the water soluble tetrazolium salt (WST) and live and dead assay data, it was proven that there was no significant cytotoxicity and that cells were well dispersed. The chitosan hydrogel was well printed under temperature-controlled condition, and cells were well laden inside gel. The cytotoxicity of laden cells was evaluated by live and dead assay. In conclusion, chitosan bioink can be a candidate for 3D bioprinting.
본 연구는 키토산 알지네이트 수화겔을 사용하여 제작된 연골세포의 3차원 구조를 유지하며 생물학적, 생리학적인 기능을 유지하는데 적합한 poly (L-Lactic-co-${\varepsilon}$-Caprolactone) (PLCL) 지지체의 효과에 대한 연구이다. 체내에서 수화겔은 단독으로 지지체 역할을 하기에는 부하를 견디기에 약하다. 이에 본 연구에서는 연골세포와 유사한 세포, 세포외 기질의 3차원적 구성을 만들기 위해 PLCL 지지체와 수화겔을 사용하여 합성 지지체를 제작하였다. 염화나트륨을 사용한 입자 침출 기법으로 85%의 다공성, $300-500{\mu}m$ 크기의 구멍을 가진 탄성력 높은 지지체를 제작하였다. 소의 연골세포와 키토산 알지네이트 겔 혼합물이 PLCL 지지체에 적용되었고 대조군의 알지네이트와 비교 연구하였다. 키토산 알지네이트 수화겔과 연골세포가 혼합된 경우에 알지네이트 단독 사용에 비해 세포 성숙, 증식, 세포외 기질의 합성, sGAG 생성과 II 형 콜라겐의 발현 등의 효과가 좋은 것으로 확인되었다. 본 연구 결과를 통해 PLCL 지지체에 연골세포와 키토산 알지네이트 겔 혼합물을 적용할 경우 세포 증식과 기질의 합성에 적합한 환경을 만들 수 있으며 연골의 복구와 재생에 효과적으로 사용될 수 있을 것으로 기대된다.
Kim, Ho-Jin;Lee, Hochul;Kim, Hyuck-Soo;Kim, Kye-Hoon
한국토양비료학회지
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제47권5호
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pp.351-355
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2014
In recent years, biochar has received much attention as soil amendment, enhancing soil fertility and reducing toxicity of heavy metals with its large specific surface area and high pH. Biochar has also the effect of alleviating global warming by carbon sequestration from recycling organic wastes by pyrolysis. However, scattering of fine particles of biochar is a hindrance to expand its use from human health point-of-view. Alginate, a natural polymer without toxicity, has been used for capsulation and hydrogel fabrication due to its cross-linking nature with calcium ion. In this study, the method of cross-linkage between alginate and calcium ion was employed for making dust-free biochar bead. Then an equilibrium adsorption experiment was performed for verifying the adsorption effect of biochar bead on heavy metals (cadmium, copper, lead, arsenic, and zinc). Results showed that biochar bead had effects on adsorbing heavy metals, especially lead, except arsenic.
Alginate/carboxymethyl scleroglucan (CMSG) hydrogels were suggested as a novel carrier for the controlled release of protein drugs. The drug release characteristics of alginate hydrogels were improved by CMSG addition. Scleroglucan (Sclg) was carboxymethylated using monochloroacetic acid in aqueous alkaline medium. Alginate/CMSG hydrogels were prepared by dropping the mixture solution of alginate/CMSG into calcium chloride solution. The swelling behaviors and drug release characteristics of the hydrogels were investigated in the buffers of pH 1.2 or 7.4. As the CMSG content increased in the hydrogels, the swelling ratio of the alginate/CMSG hydrogel increased rapidly in the buffer of pH 7.4. At pH 1.2, however, the swelling ratio significantly decreased compared to that at pH 7.4. According to in vitro release tests, only 15% of ovalbumin, investigated as a model protein drug, was released from the alginate/CMSG hydrogels at pH 1.2 within 6 h. At pH 7.4, however, the drug release significantly increased due to the rapid swelling of the hydrogels. The release and swelling behaviors of the hydrogels could be controlled by changing the CMSG content in the hydrogels. These results supported the use of alginate/CMSG hydrogels as a suitable carrier for the controlled release of protein drugs in a pH responsive manner.
기존 바이오필터 기술의 문제점인 불안정한 VOCs 제거효율을 개선하기 위하여 미생물을 고분자물질에 고정화시킨 새로운 담체를 개발하였으며, styrene을 대상으로 개발된 담체의 특성을 실험적으로 조사하였다. 복합고분자담체는 천연고분자물질인 alginate와 인공고분자물질인 polyvinyl alcohol(PVA) 혼합액에 분말활성탄과 고농도 미생물 배양액을 배합하여 3 mm 크기의 구형으로 제조하였다. 회부실험 결과 제조된 복합고분자담체는 활성탄의 흡착능력이나 미생물의 생분해속도의 감소 없이 대상 VOC인 styrene을 빠른 속도로 저감할 수 있었다. 복합고분자담체를 적용한 바이오필터 장기운전 실험에서는 유입부하량 $245g/m^3/hr$에서도 95% 이상의 styrene 분해능을 나타내어, 문헌에 제시된 기존 바이오필터의 styrene 최대분해능을 초과하였다. 오염물질이 고농도로 단기간 유입되는 조건에서도 고정화된 활성미생물에 의한 생분해반응과 함께 담체에 첨가된 분말활성탄의 흡착반응에 의해 오염물질이 효과적으로 제어되었으며, 오염물질 유입농도가 낮아진 후에 활성탄에 흡착된 styrene이 미생물에 의해 분해됨을 확인하였다. 결과적으로 활성탄과 미생물을 고분자물질로 고정화하여, 활성탄의 단점(장기간 사용하기 위해서는 재생이 필요)과 미생물반응의 단점(변동부하에 처리효율이 낮음)을 동시에 최소화시켰으며, 생물학적 VOCs 저감효과를 극대화시킬 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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