• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제9권6호
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• pp.341-346
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• 2005

The mechanism underlying oxidant-induced intracellular $Ca^{2+}$ ($[Ca^{2+}]_i$) increase was studied in cultured bovine aortic endothelial cells (BAECs) using fura-2 AM. In the presence of 2 mM extracellular $Ca^{2+}$, the application of DTBNP ($20{\mu}M$), a membrane-permeable oxidant, caused an increase in $[Ca^{2+}]_i$, and DTT (2 mM) as a reductant completely reversed the effect of DTBNP. The $[Ca^{2+}]_i$ increase induced by DTBNP was also observed in an extracellular $Ca^{2+}$-free/2 mM EGTA solution, indicating the release of $Ca^{2+}$ from intracellular store(s). After endoplasmic reticulum was depleted by an $IP_3$-generating agonist, ATP ($30{\mu}M$) or an ER $Ca^{2+}$ pump inhibitor, thapsigargin ($1{\mu}M$), DTBNP-stressed BAECs showed an increase of $[Ca^{2+}]_i$ in $Ca^{2+}$-free/2 mM EGTA solution. Ratio-differences before and after the application of DTBNP after pretreatment with ATP or thapsigargin were $0.42{\pm}0.15$ and $0.49{\pm}0.07$, respectively (n=7), which are significantly reduced, compared to the control value of $0.72{\pm}0.07$ in a $Ca^{2+}$-free/2 mM EGTA solution. After the protonophore CCCP ($10{\mu}M$) challenge to release mitochondrial $Ca^{2+}$, the similar result was obtained. Ratio-difference before and after the application of DTBNP after pretreatment with CCCP was $0.46{\pm}0.09$ (n=7). Simultaneous application of thapsigargin and CCCP completely abolished the DTBNP-induced $[Ca^{2+}]_i$ increase. The above results together indicate that the increase of $[Ca^{2+}]_i$ by DTBNP resulted from the release of $Ca^{2+}$ from both endoplasmic reticulum and mitochondria.

• 대한약리학회지
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• 제28권2호
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• pp.181-190
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• 1992

흰쥐 적출관류 부신에서 선택적인 nicotine 수용체 효능약인 DMPP(1,1-dimethyl-4-phenylpiperazinium)와 acetylcholine(ACh)의 카테콜아민(CA) 분비작용에 대한 opioids의 영향을 연구하고자 시행하여 얻어진 연구결과는 다음과 같다. Methionine-enkephalin$(9.68{\times}10^{-6}\;M)$으로 전처치시 DMPP(100 uM)과 $ACh(50\;{\mu}g)$에 의한 CA 유리작용이 현저히 억제되었으며 basal CA release는 영향을 받지 않았다. Morphine$(1.73{\times}10^{-5}\;M)$으로 전처치시 DMPP 및 excess $K^+$의 CA 분비작용은 뚜렷이 약화되었다. Morphine 역시 그자체는 basal CA release에는 영향을 미치지 않았다. Opiate 수용체 길항제인 naloxone$(1.22{\times}10^{-7}\;M)$은 DMPP 및 ACh에 의한 CA 분비작용을 현저히 차단 하였으나 basal CA release에는 영향을 미치지 못하였다. 이와 같은 연구결과로 보아, 흰쥐 관류 부신에서 니코틴 수용체에 의한 CA 분비작용은 내인성 opioid peptide에 의해서 억제되며, 이는 부신에 존재하는 opiate 수용체 흥분작용에 기인되는 것으로 사료된다.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제9권6호
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• pp.333-339
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• 2005

B/K protein is a novel protein containing double C2-like domains. We examined the specific signaling pathway that regulates the transcription of B/K in PC12 cells. When the cells were treated with forskolin ($50{\mu}M$), B/K mRNA and protein levels were time-dependently decreased, reaching the lowest level at 3 or 4 hr, and thereafter returning to the control level. Chemicals such as dibutyryl-cAMP, cellpermeable cyclic AMP (cAMP) analogue and CGS21680, adenosine receptor $A_{2A}$ agonist, also repressed the B/K transcription. However, 1,9-dideoxyforskolin did not show inhibitory effect on B/K transcription, suggesting direct involvement of cAMP in the forskolin-induced inhibition of B/K transcription. Effect of forskolin, dibutyryl cAMP and CGS21680 was significantly reduced in PKA-deficient PC12 cell line (PC12-123.7). One cAMP-response element (CRE)-like sequence (B/K CLS) was found in the promoter region of B/K DNA, and electrophoretic mobility shift assay indicated its binding to CREM and CREB. Forskolin significantly suppressed the promoter activity in CHO-K1 cells transfected with the constructs containing B/K CLS, but not with the construct in which B/K CLS was mutated (AC：TG). Taken together, we suggest that the transcription of B/K gene in PC12 cells may be regulated by PKA-dependent mechanism.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제12권2호
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• pp.43-49
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• 2008

Flavonoids have been shown to affect calcium signaling in neurons. However, there are no reports on the effect of apigenin on glutamate-induced calcium signaling in neurons. We investigated whether apigenin affects glutamate-induced increase of free intracellular $Ca^{2+}$ concentration ($[Ca^{2+}]_i$) in cultured rat hippocampal neurons, using fura-2-based digital calcium imaging and microfluorimetry. The hippocampal neurons were used between 10 and 13 days in culture from embryonic day 18 rats. Pretreatment of the cells with apigenin ($1{\mu}M$ to $100{\mu}M$) for 5 min inhibited glutamate ($100{\mu}M$, 1 min) induced $[Ca^{2+}]_i$ increase, concentration-dependently. Pretreatment with apigenin ($30{\mu}M$) for 5 min significantly decreased the $[Ca^{2+}]_i$ responses induced by two ionotropic glutamate receptor agonists, alpha-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic (AMPA, $10{\mu}M$, 1 min) and N-methyl-D-aspartate (NMDA, $100{\mu}M$, 1 min), and significantly inhibited the AMPA-induced peak currents. Treatment with apigenin also significantly inhibited the $[Ca^{2+}]_i$ response induced by 50 mM KCl solution, decreased the $[Ca^{2+}]_i$ responses induced by the metabotropic glutamate receptor agonist, (S)-3,5-dihydroxy-phenylglycine (DHPG, 100 $[Ca^{2+}]_i$, 90 s), and inhibited the caffeine (10 mM, 2 min)-induced $[Ca^{2+}]_i$ responses. Furthermore, treatment with apigenin ($30{\mu}M$) significantly inhibited the amplitude and frequency of 0.1 mM $[Mg^{2+}]_o$-induced $[Ca^{2+}]_i$ spikes. These data together suggest that apigenin inhibits glutamate-induced calcium signaling in cultured rat hippocampal neurons.

• 대한약리학회지
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• 제29권2호
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• pp.245-252
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• 1993

Amiloride는 $Na{^+}$ channels를 선택적으로 억제하는 potassium sparing diuretic이다. 본 연구에서는 amiloride와 아데노신 수용체의 상호작용을 밝히고자, 흰쥐에서 얻은 crude adipocytic membrane fractions의 adenylyl cyclase activity를 여러 조건하에서 측정하였다. 우선 GTP가 isoproterenol-stimulated adenylyl cyclase activity에 미치는 영향을 조사함으로서 $G_i$ protein (inhibitory guanine nucleotide binding protein)의 기능을 알아보았다. 그 결과 amiloride는 높은 GTP 농도에서 isoproterenol-stimulated adenylyl cyclase의 활성을 억제하는 것을 관찰할 수 없었다. 이와는 대조적으로 amiloride 존재 하에서 2-chloroadenosine을 사용하여 아데노신 수용체를 경유한 isoproterenol-stimulated adenylyl cyclase activity가 억제되는 정도를 측정하였을 때, 2-chloroadenosine의 농도에 따라 큰 변화 없거나 오히려 억제 효과가 더욱 크게 나타났다. 그러나 위와 같은 조건하에서 propranolol에 의한 isoproterenol-stimulated adenylyl cyclase activity의 억제는 amiloride에 의해서 유의하게 변하지 않는 것으로 보아서, 수용체를 매개로 한 $G_s$ protein의 기능은 amiloride에 의해 영향을 받지 않는 것으로 생각된다. 그리고 amiloride에 의해 증가된, 2-chloroadenosine-mediated adenylyl cyclase의 억제 효과는 150mM NaCl 존재 하에서도 그대로 유지되었다. 이러한 결과로 보아 amiloride는 아데노신 수용체와 결합하여 $G_i$ proteins과의 coupling을 용이하게 할 뿐만 아니라, $G_i$ protein을 선택적으로 변화시켜 $G_i$ protein의 GTP 의존적인 adenylyl cyclase의 억제 기능을 제거하는 두 작용을 갖는 것으로 사료된다.

• 대한약리학회지
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• 제24권2호
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• pp.189-195
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• 1988

인체 정관 평활근에서 각종 자율신경전달체 수용체의 유무를 조사하고 benzodiazepine계의 진정-항불안제인 diazepam이 평활근 운동성에 미치는 작용을 관찰하기 위하여, 32내지 45세의 건강한 지원자로부터 정관절편을 얻었다. 정관 절제술은 국소마취하에 시행되었고, 정관절편의 수축력 측정은 등장성장력측정기에 의하였다. 적출장기실험조 내에서 정관절편의 자율수축은 관찰되지 않았으나, norepinephrine에 대한 반응성은 $33^{\circ}C$에서 가장 예민하였던 바, 이 norepinephrine에 의한 농도의존적 수축력증가작용은 알파-아드레날린성 차단제인 phentolamine에 의해 억제되었다. 또 인체 정관절편은 본 실험의 조건하에서 isoproterenol 의하여 수축하였고, 이 수축작용은 베타-아드레날린성 차단제인 propranolol 의하여 완전히 제거되었다. 동시에 인체 정관절편은 acetylcholine에의해서도 비교적 강하게 수축하였고, 이 수축작용은 콜린성 무스카린성 차단제인 atropine에 의하여 완전히 억제되었다. Diazepam은 norepinephrine에 의한 수축을농도 의존적으로 억 제 하였다. 이상의 결과를 종합하면, 인체 정관 평활근은 체온보다 낮은 $33^{\circ}C$에서 그 활동성이 가장 강하고, 자율신경에 대하여서는 아드레날린성 및 콜린성 수용체가 공존하고 있으며, diazepam은 그 수축력을 약화시킨다고 사료된다.

• 한국산학기술학회논문지
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• 제17권11호
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• pp.640-647
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• 2016

형광 간섭 현상을 최소화시켜 상대적으로 민감한 측정이 가능한 aequorin기반 luminescence기술은 $G_{{\alpha}16}$ 단백질 도입을 통해 세포 내부의 칼슘 이동 신호를 감지하여 G 단백질 결합 수용체(G protein-coupled receptor, GPCR)의 기능 분석을 가능하게 하는 세포 기반 분석 기술로 수용체 및 G 단백질 유전자 전달의 최적화 과정이 필수적이다. 본 연구를 위해 corticotropin releasing factor receptor subtype 2(CRF2) 수용체를 모델 시스템으로 CRF2와 $G_{{\alpha}16}$ 단백질이 구축된 세 가지 안정화 세포주를 제작하였고, 이들을 이용한 서로 다른 세 가지 조건의 임시 발현 세포주에서 작용제(sauvagine)와 길항제(K41498)의 반응성을 분석하여 최적의 유전자 전달 방법을 도출하고자 하였다. 그 결과 sauvagine 및 K41498의 농도에 따른 반응에서 CRF2-$G_{{\alpha}16}$ 안정화 세포주가 임시 발현 세포주보다 10배 이상의 유효신호 비율을 나타내었고(z'=0.77) 임시 발현 세포주의 경우 $G_{{\alpha}16}$의 안정화 발현 이후에 CRF2를 전달하는 경우가 다른 임시 발현 조건보다 2배 이상 높은 효율을 보였다(z'=0.84). 따라서 임시 유전자 전달 기술을 GPCR 세포 기능 분석 시스템에 활용할 경우 $G_{{\alpha}16}$ 단백질에 대한 안정화 세포주를 우선적으로 구축하고, 목표하는 다양한 수용체들을 단계적으로 발현시키는 것이 최선의 방법이라 판단된다.

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제3권1호
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• pp.37-43
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• 2000

We used a mammalian GnRH antagonist, $[Ac-3,4-dehydro-Pro^1,\;D-p-F-Phe^2,\;D-Trp^{3.6}]$-GnRH, to examine the details of the salmon type gonadotropin-releasing hormone (sGnRH) and GnRH agonist analog $(Des-Gly^{10}$[d-Ala^6]-ethylamide GnRH; GnRHa) functions in the control of maturational gonadotropin (GTH II) secretion, in precocious male rainbow trout, in both in vivo and in vitro experiments. In the in vivo study, plasma GTH II levels increased by sGnRH or GnRHa treatment, but the response was more rapid and stronger in the GnRHa treatment group. The increase in GTH II was significantly suppressed by the GnRH antagonist, while the antagonist had no effect on basal GTH II levels in both groups. The GnRH antagonist showed stronger suppression of GTH II levels in the sGnRH treatment fish than in the GnRHa treatment fish. In addition, plasma androgenic steroid hormones (testosterone and 11-ketotestosterone) increased by the sGnRH or GnRHa treatment. The GnRH antagonist significantly inhibited the increases in plasma androgenic steroid hormone levels stimulated by the sGnRH or GnRHa, while the antagonist had no effect on basal androgenic steroid hormone levels in both groups. In the in vitro study, treatment with sGnRH or GnRHa increased GTH II release from the cultured dispersed pituitary cells, but the response was stronger in the GnRHa treatment group. The increase in GTH II release by GnRH was suppressed by adding the GnRH antagonist, dose­dependently. On the other hand, basal release of GTH II did not decrease by the GnRH antagonist treatment in both groups. These results suggest that the GnRH antagonist, $[Ac-3,4-dehydro-Pro^1,\;D-p-F-Phe^2,\;D-Trp^{3.6}]-GnRH$, used in this study is effective in blocking the action of GnRH-induced GTH II release from the pituitary gland both in vivo and in vitro.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제28권4호
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• pp.307-315
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• 2001

Objective: To evaluate the clinical outcomes and influencing factors of in vitro fertilization and embryo transfer (IVF-ET) in patients with failed pregnancy after microsurgical reversal of tubal sterilization. Materials and Methods : From January, 1997 to December, 2000, IVF-ET was performed in two groups; the study TR (tubal reanastomosis) group consisted of 147 cycles in 66 patients with failed microsurgical reversal of tubal sterilization, and the control group of 115 cycles in 67 patients with bilateral tubal occlusion (BTO). The two groups were evaluated and compared for clinical characteristics, clinical pregnancy rates, and factors influencing the outcomes of IVF-ET. Results: Compared with the control BTO group, age and the previous parity were significantly higher ($36.3{\pm}2.7$ vs. $33.6{\pm}2.0$ years, p<0.05; $1.6{\pm}0.7$ vs. $0.2{\pm}0.4$, p<0.05), and the clinical pregnancy rate per cycle was significantly lower (23.8% (35/147) vs. 29.3% (34/115), p<0.05) in the TR group. Difference in the clinical pregnancy rates was age-related, since there was no significant difference between the two groups, except for the previous parity ($1.6{\pm}0.7$ vs. $0.1{\pm}0.3$, p<0.05), when the patients aged 37 years or older were excluded. No difference was found in terms of the following: the proportion of controlled ovarian hyperstimulation (COH) cycles with GnRH agonist ultrashort protocol, the duration of COH, the dosage of gonadotropins used, and the numbers of oocytes retrieved and of embryos transferred, irrespective of age correction. Conclusions: The outcomes of IVF-ET following the failed microsurgical reversal of tubal sterilization depend upon patient age. The previous fertility of patients does not seem to be a factor of better IVF-ET prognosis.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제55권2호
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• pp.165-174
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• 2003

연구배경 : 천식은 우리나라에서 유병률이 높은 질병 중에 하나이다. 국내에서도 천식 진료 지침이 발표되었지만 일차 진료에서 천식 진료의 실제 양상에 대해서는 연구된 바가 없다. 본 연구를 통해서 일차 진료에서 천식 진료의 실제 양상을 규명하는데 도움을 얻고자 하였다. 방 법 : 2002년 11월 서울 지역 내과 개원의 710명을 대상으로 경증 및 중증 천식 시나리오를 제시하고 천식 진료의 실제 양상에 대해서 설문 조사하였다. 1차에서는 우편조사를, 2차에서는 방문 수거조사를 실시하였으며 325명이 응답하였다 (응답률 46%). 결 과 : 응답자 중 경증 및 중증 천식시나리오에 대하여 경구 테오필린(theophylline)제를 처방하겠다고 답한 경우는 각각 71%, 81%으로 제일 많았다. 그 다음으로 많이 처방하겠다고 답한 것은 거담제(mucolytics), 경구 베타$_2$-항진제 순이었다. 하지만, 흡입 스테로이드를 처방하겠다고 답한 경우는 경증 및 중증 천식에 각각에 대하여 36%, 56%이었다. 진단적 검사로 폐기능 검사를 하겠다고 답한 경우보다 흉부 방사선 검사를 하겠다고 답한 경우가 더 많았다. 결 론 : 서울 지역 내과 개원의들은 천식 환자 치료에 흡입 스테로이드보다 경구 기관지확장제를 더 선호하였다. 일차 진료에서 천식 진료의 실제 양상과 천식 지침 사이의 차이를 줄이는데 노력을 경주해야 하겠다.