We have reported a sensitive, specific and simple direct competitive ELISA method to detect aflatoxin in agricultural commodities. We evaluated the ELISA for practical use to detect aflatoxins contaminated in the domestic and foreign agricultural commodities. The detection limits of the direct ELISA for residual aflatoxins in rice, pine nuts, corns, almonds, bean nuts, and pistachio were 10 ppb and in peanuts and cashew nuts were 20 ppb, which were elucidated from the standard curves of ELISA for aflatoxin fortified into the agricultural commodities. Residue studies of naturally contaminated aflatoxins in the agricultural commodities were also carried out by using direct ELISA. As the results of the studies, it was revealed that there were no residues of aflatoxins in 20 rice samples produced in south Korea, 20 pine nut samples in south Korea (9 samples), USA (1 sample) and China (10 samples), each of 20 almond, pistachio and bean nut samples in USA. However, aflatoxin residues were detected in corn samples imported from north Korea (350∼585 ppb in 2 of 3 samples), from USA (109*326 ppb in 6 of 6 samples) and domestic corns (61-326 ppb in 7 of 17 samples). The toxins were contaminated in corn imported from USA for popcorn (17∼20 ppb, in 3 of 10 samples) whereas no residues were detected in corn from south Korea and China. In case of cashew nuts imported from India, 11.4∼23.1 ppb of aflatoxins were detected in 4 from 20 samples. Most of the contaminated foods were harvested before 1995. Thus, hygienic managements of the foods should be required during storage and circulation at market.
Aflatoxins are toxic and carcinogenic secondary metabolites which are produced by trains of A. flavus and A. parasiticus during their growth on foods and feedstuffs. Aflatoxins are a group of closely related heterocyclic compounds of which $B_1$, $B_2$, and $G_2$ are the major members. Aflatoxins are synthesized via a polyketide pathway in which the general steps are acetate, an-thraquinones, xanthone and aflatoxins. Aflatoxin formation is favored by high moisture or high $a_w$(0.95${\sim}$0.99). The limiting $a_w$ for aflatoxin production on agricultural commodities is 0.83. Optimum temperature for aflatoxin production by the molds is $25{\sim}30^{\circ}C$ and the incubation time for the maximum production of the toxin is 7${\sim}$15 days. The limiting temperatures for aflatoxin production are ${\leq}7.5^{\circ}C\;and\;\geq40^{\circ}C$. Cycling temperatures may or may not stimulate aflatoxin production depending on the amplitude of cycling, substrate and strains of molds. Aflatoxin pro-ducing molds are aerobic organisms and thus have a requirement for oxygen. A decreasing $O_2$ concentration and/or increasing concentrations of $CO_2$ or $N_2$ depress the mold growth and aflatoxin formation. A. flavus grows competitively or associatively in the presence of other microorganisms and occasionally loses the competition with other microorganisms. Some lactic acid bacteria have been shown to reduce growth and aflatoxin production by A. parasiticus. Carbon source is the most important nutritional factors affecting aflatoxin formation by the molds. Sucrose, fructose and glucose are the most favorable carbon sources. Food substrates of plant derived products which have high carbohydrate content such as agricultural commodities and their products are most vulnerable to contamination by aflatoxins.
Aspergillus kawachii 혹은 A. shirousamii는 저장 중인 쌀에서 A. flavus에 의한 aflatoxin의 시발생성시기에는 영향을 주지 못하였으나 생성속도와 생성량은 현저하게 감소시키었다. 백미를 A. flavus로 접종하여 상대습도 85%, $28^{\circ}C$에서 저장하는 동안 aflatoxin $B_1$은 35일 후에 최고 $40{\mu}g/50g$ 생성되었다. 같은 조건에서 A. kawachii 동시접종한 경우에는 45일 후 최고 $25{\mu}g/50g$ 생성되었으나 A. shirousamii를 동시접종한 경우에는 60일 동안 흔적 정도만이 검출되었다. Aflatoxin을 첨가한 쌀에 A. kawachii 및 A. shirousamii를 7일간 키우면 각각 97% 및 98%의 aflatoxin이 감소되었다. 또한 aflatoxin을 첨가한 쌀을 A. kawachii 및 A. shirousamii로 만든 쌀 고오지로 48시간 당화시키는 동안 각각 30-67% 및 16-57%의 aflatoxin이 감소되었다.
아플라톡신은 Aspergillus flavus와 A. parasiticus에 의해 생성되는 독소대사산물로 발암물질이며 곡류(옥수수, 쌀, 보리), 땅콩, 과실류 및 종자류의 생산과 저장과정에서 생성된다. 곰팡이가 생성되기 쉬운 조건에서 오랜 기간 저장된 종자류에서 아플라톡신이 생성될 가능성이 있으며 이를 원료로 하여 유지로 가공 할 때도 아플라톡신이 이행될 우려가 있다. 또한 곡류나 두류 등을 가공하여 만든 영유아용식품도 아플라톡신 오염 가능성이 있다. 따라서 본 연구는 식용유지 및 영유아용식품에 대해 액체 추출법의 아플라톡신 시험법 적용가능 여부를 검토하고 필요시 새로운 분석방법을 확립하고자 하였다. 식용유지에 대한 아플라톡신은 MSPD (Matrix Solid Phase Dispersion)법으로 아플라톡신을 추출해 내고 면역친화성 칼럼을 사용해 정제하여 형광검출기가 장착된 고성능액체크로마토그래피(HPLC/FLD)를 이용해 분석하였다. 아플라톡신($B_1$, $B_2$, $G_1$, $G_2$) 검량선의 직선성은 상관계수가 0.999 이상을 나타냈고 회수율은 85.9~93.0%의 양호한 결과를 얻었으며 상대표준편차는 5.7% 이하였다. 식용유지에서 액체 추출법과 비교해 볼 때, MSPD-면역친화성컬럼법을 사용하여 회수율을 향상시켜 시험법을 확립하였다. 영유아용식품에 대한 아플라톡신 분석방법은 액체 추출법이 적합하였으며 아플라톡신($B_1$, $B_2$, $G_1$, $G_2$)에 대한 회수율은 89.5~92.3%로 양호한 결과를 얻었다.
아플라톡신은 Aspergillus flavus와 A. parasiticus.에 의해 생성되는 독소대사산물로 강력한 발암성물질로서 땅콩, 옥수수, 쌀, 보리 등 탄수화물이 주성분인 곡류가 그 기질로 알려져 있으며 생약에서도 검출된 보고가 있다. 본 연구는 아플라톡신($B_1$, $B_2$, $G_1$, $G_2$) 모니터링을 통해 생약의 곰팡이 독소 허용 기준 마련을 위한 기초 자료로 활용하고자 한다. 모니터링을 위해 국내(5개 지역)와 중국(2개 지역)에서 유통 중인 생약 50품목의 558시료를 수거하였다. 수거한 시료는 관능검사를 거쳐 적합한 시료를 선정하여 실험에 사용하였다. 아플라톡신 분석은 시료를 70% 메탄올로 추출하여 면역친화성 칼럼으로 정제한 후, 칼럼 후 유도체화 장치(PHRED)가 장착된 HPLC-FLD로 분석하였다. 아플라톡신 분석을 위해 시험법을 검증하였다. 그 결과 검출한계와 정량한계는 각각 $0.0l5{\sim}0.138\;{\mu}g/kg$, $0.046{\sim}0.418\;{\mu}g/kg$였으며 회수율은 67.4~96.2%로 나타났다. 검증된 시험법으로 국내와 중국에서 유통 중인 생약을 대상으로 모니터링한 결과, 생약 2건(보두, 호미카)에서 아플라톡신($B_1$, $G_1$)이 검출되었다. 보두에서는 아플라톡신 $B_1$이 1.7 ${\mu}g/kg$, $G_1$이 0.9 ${\mu}g/kg$이 검출되었고, 호미카에서는 $G_1$이 0.8 ${\mu}g/kg$ 검출되었다. 또한 생약의 주복용 형태인 탕액으로 조제 하였을 때, 아플라톡신의 이행정도를 알아보고자 생약에 아플라톡신을 오염시키고 무 압력과 압력 조건에서 열수 추출 하였다. 탕액 조제시 아플라톡신의 이행률은 무압력 조건에서 13.6~51.3%였다.
Our previous study detected aflatoxins in red chili peppers from Chile, Bolivia, and Peru, each of which have a high incidence of gallbladder cancer (GBC). Since the aflatoxin B1 concentration was not so high in these peppers, it is important to clarify the presence of other mycotoxins. Here we attempted to determine any associations between the concentrations of aflatoxins and ochratoxin A (OTA) in red chili peppers, and the corresponding GBC incidences. We collected red chili peppers from three areas in Peru: Trujillo (a high GBC incidence area), Cusco (an intermediate GBC incidence area), and Lima (a low GBC incidence rate), and from Chile and Bolivia. Aflatoxins and OTA were extracted with organic solvents. The concentrations of aflatoxins B1, B2, G1, and G2, and OTA were measured by high-performance liquid chromatography. The values obtained were compared with the incidence of GBC in each area or country. All of the red chili peppers from the three areas showed contamination with aflatoxins below the Commission of the European Communities (EC) recommended limits ($5{\mu}g/kg$), but the OTA contamination of two samples was above the EC recommended limit ($15{\mu}g/kg$). The mean concentrations of OTA in the peppers from Chile (mean $355{\mu}g/kg$, range < $5-1,059{\mu}g/kg$) and Bolivia (mean $207{\mu}g/kg$, range $0.8-628{\mu}g/kg$), which has a high incidence of GBC, were higher than that in Peru ($14{\mu}g/kg$, range < $5-47{\mu}g/kg$), which has an intermediate GBC incidence. The OTA contamination in the red chili peppers from Chile, Bolivia, and Peru was stronger than that of aflatoxins. Our data suggest that OTA in red chili peppers may be associated with the development of GBC.
Aflatoxin의 각종 액성에 대한 변화와 위액, 담즙산, 각종 산과 알칼리 및 식염 농도에 따른 열처리시의 그 안정성 및 변화 양상을 관찰하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 1) Aflatoxin은 액성의 pH가 산성에서보다 알칼리성에서 더욱 감소하였다. 한편 $100^{\circ}C$에서 30분 열처리한 것은 $37^{\circ}C$에서 30분 처리한 것보다 더욱 aflatoxin이 감소하였다. 2) Aflatoxin에 대한 초산(醋酸), 염산, 황산을 각기 1%, 5% 및 10% 액으로 $20^{\circ}C$ 30분 처리할 때에, 초산은 $40{\sim}50%$, 염산은 $48{\sim}73%$ 및 황산은 $68{\sim}84%$의 감소율을 나타내었다. 한편, 수산화나트륨 및 암모니아의 1%, 5% 및 10%액으로 처리하면 완전히 aflatoxin이 파괴되었다. 3) 인공위액에 대한 aflatoxin은 $37^{\circ}C$ 60분에 약 75%의 감소를 나타내었으며 담즙산에 대하여는 대부분 파괴되었다. 이때 파괴된 물질은 TLC 상에서 Rf치가 0.96이었으며 $220{\sim}420m{\mu}$ 까지의 UV spectrum에서 최대 흡수 파장대는 관찰할 수 없었다. 4) Aflatoxin에 식염을 가하여 $100^{\circ}C$ 30분 열처리하면 그 $39{\sim}55%$의 aflatoxin이 감소되는 것을 관찰할 수 있었고, 식염의 농도에 따라 그 변성도의 차는 발견할 수 없었다.
This study was performed to investigate the inhibitory effect of Aloe vera on the growth and aflatoxin production of Aspergillus parasiticus. Spore suspension of A. parasiticus ATCC 15517 was inoculated on the yeast-extract sucrose broth containing 0.1%, 0.5%, 1.0% and 10.0% of chloroform extract of Aloe vera and then incubated at 30$\circ$C for 7 days. Mycelial weight was 160.7 mg/5ml in control group and decreased by the addition of the extract with no significance. The mold caused decrease in pH of the media with and without the extract. pH in the group contained 10.0% of the extract showed significantly higher value of 5.10 than that of 4.90 in control group (p<0.05). Fluorescence spots of four aflatoxins were observed under the 365 nm of UV light after extraction of the media and TLC. In the result of separation and determination by HPLC, the aflatoxins were produced in the order of $B_1, G_1, B_2$ and $G_2$ in all groups. Production of aflatoxins $B_1, B_2$ and $G_1$ was reduced by the addition of the extract and decreased as amount of the extract increased. The production of aflatoxins $B_1$ and $B_2$ significantly reduced when the media contained more than 1.0% of the extract, and $G_1$ more than 0.5%, respectively(p<0.05). No reduction and no significant difference among groups were observed in case of aflatoxin $G_2$. With the above result, the extract of Aloe vera reduced the production of aflatoxin by A. parasiticus though it did not inhibit mycelial growth.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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