• 식물조직배양학회지
• /
• 제28권3호
• /
• pp.165-171
• /
• 2001

Adenosine deaminase 유전자를 연초의 형질전환용 표지유전자로 활용할 때 형질전환체 여부를 매우 빠르고 눈으로 직접 색깔을 확인할 수 있는 새로운 방법이 개발되었다. ADA 효소는 독성인 adenosine 유도체를 비독성인 inosine 유도체와 암모니아로 변환시키는데, 이때 형성된 암모니아를 phenol-nitoprusside와 alkaline-hypochlorite 용액을 이용하여 청색으로 변환시켜 96 well plate상에서 1시간 내에 형질전환체 여부를 쉽게 확인할 수 있게 되었다. ADA효소의 substrate로서 9-D-arabinofuranosyl adenine, cordycepin, 2'-deoxyadenosine, adenosine and xylofuranosyl adenine이 모두 가능하였으며, substrate 용액의 최적조건은 adenosine 10 mM과 pH 7.5이었다. 특히 형질전환체는 ADA효소의 inhibitor인 deoxycoformycin이 함유되어 있는 용액 속에서는 adenosine을 inosine과 암모니아로 변환시키지 못해 색깔의 변화가 없었는데, 이는 형질전환체에서 색깔의 변화는 ADA효소의 작용 때문에 일어나는 것을 의미한다. 따라서 본 연구결과는 ADA 표지유전자가 도입된 형질전환체의 확인에 있어서 GUS gene system과 같이 눈으로 직접 확인할 수 있을 뿐만 아니라 매우 작은 크기의 형질전환체 절편으로 쉽고, 빠르면, 값싸게 확인할 수 있게 되었다.

• 식물조직배양학회지
• /
• 제22권4호
• /
• pp.195-200
• /
• 1995

동물유전자인 mouse adenosine deaminase (ADA)유전자가 안정적으로 연초 형질전환체에서 발현되었다. ADA cDNA 을 연초에서 강력히 발현시키기 위해서 35S/35S/AMV promoter을 부착시켰으며 식물세포에 도입을 위해서 binary vector인 pRD400을 이용하였다. 연초의 형질전환은 Tri- parental mating에 의해서 도입된 ADA 유전자 함유 binary vector와 disarmed Ti-plasmid을 함유하고 있는 Agrobacterium tmefacience MP9O을 사용하였다. 동시배양은 연초의 잎 disc을 이용해서 kanamycin이 첨가된 배지로부터 직접 shoots을 선발하여 형질전환체로 유도하였다. 형질전환 체에 ADA 유전자의 삽입여부는 PCR을 이용하였으며, 실험결과 ADA 유전자를 확인할 수 있었다. 또한 도입된 mouse ADA 유전자로부터 mRNA 및 단백질 합성여부를 각각 northern blot 및 immunoblot 분석한 결과 형질전환체 에서는 공히 확인되었다.

• 식물조직배양학회지
• /
• 제22권4호
• /
• pp.235-240
• /
• 1995

식물세포의 형질전환을 위한 새로운 표지유전자의 개발은 식물유전공학의 중요한 관건이 되고 있다. 본 실험은 독성 adenosine 유도체인 9-$\beta$-D-arabinofuranosyl adenine (Ara-A)과 cordycepin등에 저항을 나타내는 adenosine deaminase (ADA) 유전자를 새로운 식물세포의 형질전환용 표지유전자로 사용코자 수행하였다. 정상식물체에서는 치사하는 농도인 Ara-A 100 $\mu$M과 cordycepin 50 $\mu$M이 함유된 선발배지에서 ADA 유전자에 의하여 형질전환된 연초식물체는 생존이 가능하였으며 성공적으로 형질전환체를 선발할 수 있었다. 또한 형질전환된 연초식물체에서 획득한 종자도 동일한 선발배지에서 ADA 유전자가 유전된 종자와 유전되지 않은 종자를 쉽게 구별할 수 있었다. 이런 결과는 동물유전자인ADA 유전자를 연초조직의 새로운 형질전환용 표지유전자로 사용할 수 있음을 시사한다.

• 미생물학회지
• /
• 제31권1호
• /
• pp.54-62
• /
• 1993

Intracellular adenosine deaminase (ADA) from Aspergillus oryzae was purified using ammonium sulfate fractionation, a DEAE-Sephadex A-50 anion exchange chromatography, an ultrafiltration using a PM 10 membrane and two times of Sephadex G-100 gel filtration chromatography. The enzyme was purified 151 fold with a 9% recovery. Purified enzyme gave a single protein band with a molecular weight of 105,000 delton. The enzyme was reasonably stable. The enzyme activity was kept even after 1 hr incubation at 55.deg.C, but decreased significantly at 60.deg.C. The pH optimum was found to be from 6.5 to 7.5. Among tested compounds, the substrate activity was found with adenosine, adenine arainofuranoside, formymcin A, 2'-deoxyadenosine, 3'-deoxyadenosine, 2', 3'-isopropylidene adenosine, 2,6-diaminopurine deoxyriboside, .betha.-nicotinamide adenine dinucleotide (reduced form), 6-chloropurine riboside, 2'-adenine monophosphate (AMP), 3'-AMP and 5'-AMP. The values of Km of adenosine and 2'-deoxyadenosine were calculated to be 500 and .$710\mu$m, respectively. ADA was sensitivite to $Zn^{2+}$, $^Cu{2+}$ and $Fe^{3+}$, p-chloromercuribenzoate and mersalyl acid inactivated the enzyme. The activity of enzyme was not changed when ADA was incubated with dithiothreititol, 2-mercaptoethanol, N-ethylmaleimide, iodoacetic acid and iodoacetamide.

• 미생물학회지
• /
• 제32권1호
• /
• pp.84-90
• /
• 1994

Adenosine deaminase (ADA)의 여러 기질과 억제물질의 반응 속도론적 상수가 Aspergillusoryzae의 세포내 효소인 ADA의 활성자리에 어떻게 부착하고 어떤 요인을 필요로 하는지를 알기위해 측적되어졌다. kcat/$K_m$값에 의하면 조사된 기질로 작용하는 화합물 중에 3'-deoxyadenosine이 가장 좋은 기질로 작용하는 것으로 밝혀졌다. 몇 개의 유사체가 억제물질로 조사되었는데 purine riboside가 $3.7{\times}10^{-5}$M의 값 $K_i$값을 가지고 가장 강한 억베물질로 나타났다. Adenine은 기질로도 억제물질로도 작용을 못하므로 adenine의 N-9 위치의 ribose가 효소에 부착하는데 중요하다는 것을 시사하고 있다. 또 ADA는 6-chloropurine riboside(6-CPR)의 dechlorination을 촉매화하여 inosine과 Cl이온을 생성한다. 6-CPR의 ADA에 대한 기질 특이성은 정상 기질인 adenine의 0.86%로 측정되었다. ADA의 경쟁적 억제물질인 purine riboside는 비슷한 $K_i$값을 가지고 dechlorination도 억제하므로 deamination과 dechlorination 반응은 효소의 부착자리를 공유하고 있다고 생각되어진다. SH기에 작용하는 화합물중 수은제인 p-chloromercuribenzoate(PCMB), mersalyl acid, $HgCl_2$는 효소의 deamination 반응을 억제했다. Mersalyl acid에 의해 활성이 억제된 ADA는 thiol reagent인 dithiothreitol이나 2-mercaptoethanol에 의해 활성이 회복되지만 PCMB에 의해 억제된 효소는 회복되지 않았다. 각 수은제들이 억제물질로 작용할 때 $K_i$값과 억제양상이 측정되었는데 모두 경쟁적 방해를 보였다. $K_i$값은 10mM 인산완충용액에서 측정한 것이 100 mM 인산완충용액에서 측정한 것보다 훨씬 낮아 인산기가 기질이 아니어도 효소의 부착에 큰 영향을 미치는 것을 보여주고 있다.

• BMB Reports
• /
• 제40권3호
• /
• pp.295-301
• /
• 2007

Swiss Albino (Rat rattus norvegicus) rats were intraperitoneally injected with a 100 mg $kg^{-1}$ dosage of benzene, a toxic and carcinogenic agent widely used for industrial purposes. Changes in the adenosine deaminase (ADA) activity in the liver, kidney and serum of rats were investigated at 0, 2, 4, 8, 16, 32 and 64 h following injection. Serum physiological was administered to each control group. Enzyme activities were measured spectrophotometrically. Our purpose was to further investigations of some diseases caused by benzene, and present evidence of variations in the activity of ADA enzyme effected by benzene. While benzene caused significant inhibitions in ADA activity in the liver at 16 and 32 h and at 0.05 probability level, no significant inhibition or activation occurred at other test periods (hours). ADA activity did not present any significant variation in the kidneys. It was observed that ADA activity displayed similar patterns in the control groups. Comparisons of ADA activities in the two groups showed a statistically significant decrease between $4^{th}$ and $64^{th}$ hours (p< 0.05), demonstrating a direct correlation between benzene and its effects on ADA enzymes.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
• /
• 제87권1호
• /
• pp.91-99
• /
• 2024

Background: Tuberculous pleural effusion (TPE) and parapneumonic effusion (PPE) are often difficult to differentiate owing to the overlapping clinical features. Observational studies demonstrate that the ratio of lactate dehydrogenase to adenosine deaminase (LDH/ADA) is lower in TPE compared to PPE, but integrated analysis is warranted. Methods: We conducted a systematic review to evaluate the diagnostic accuracy of the LDH/ADA ratio in differentiating TPE and PPE. We explored the PubMed and Scopus databases for studies evaluating the LDH/ADA ratio in differentiating TPE and PPE. Results: From a yield of 110 studies, five were included for systematic review. The cutoff value for the LDH/ADA ratio in TPE ranged from <14.2 to <25. The studies demonstrated high heterogeneity, precluding meta-analysis. Quality Assessment of Diagnostic Accuracy Studies Tool 2 assessment revealed a high risk of bias in terms of patient selection and index test. Conclusion: LDH/ADA ratio is a potentially useful parameter to differentiate between TPE and PPE. Based on the limited data, we recommend an LDH/ADA ratio cutoff value of <15 in differentiating TPE and PPE. However, more rigorous studies are needed to further validate this recommendation.

• Journal of Life Science
• /
• 제9권2호
• /
• pp.9-14
• /
• 1999

Pseudomonas iodinum IFO 3558 adenosine deaminase(ADA) gene was cloned by the polymerase chain reaction and deduced the amino acid sequence of the enzyme. DNA sequence homology of Pseudomonas iodinum IFO 3558 ADA gene was compared to those of E. coli, human and mouse ADA genes. Unambiguous sequence from both strands of pM21 was obtained for the region believed to encode ADA. The sequence included a 804-nucleotide open reading frame, bounded on one end by sense primer and on the other end by two antisense primer. This open reading frame encodes a protein of 268 amino acids having a molecular weight of 29,448. The deduced amino acid sequence shows considerable similarity to those of E. coli, mouse and human ADA. Pseudomonas iodinum IFO 3558 nucleotide sequence shows 98.5% homology with that of the E. coli ADA sequence and 51.7% homology with that of the mouse ADA sequence and 52.5% homology with that of the human ADA sequence. The ADA protein sequence of Pseudomonas iodinum IFO 3558 shows 96.9% homology with that of the E. coli and 40.7% homology with that of the mouse and 41.8% homology with that of the human. The distance between two of the conserved elements, TVHAGE and SL(1)NTDDP has veen exactly conserved at 76 amino acids for all four ADAs. Two of the four conserved sequence elements shared among the four ADAs are also present in the yeast, rat, human (M), and Human(L) AMP deaminase. The SLSTDDP sequence differs only in the conservative substitution of a serine for an asparagine. A conserved cysteine with conserved spacing between these two regions is also found. Thus, sequence analysis of four ADAs and four AMP deaminases revealed the presence of a highly conserved sequence motif, SLN(S)TDDP, a conserved dipeptide, HA, and a conserved cysteine residue.

• 생명과학회지
• /
• 제20권3호
• /
• pp.453-456
• /
• 2010

백혈병은 조혈모세포의 비정상적인 증식에 의해 일어나서 질환이고, adenosine deaminase (ADA) 유전자는 백혈병의 약물 작용점으로 중요하다. 이러한 연구의 일환으로 한국인 백혈병 환자 20명의 ADA 유전자의 변이를 조사하기 위해 혈액 genomice DNA를 추출하여 염기서열을 결정하였다. 그 결과 nonsense 변이인 F101F 하나, missense 변이 E260K, D8Y 각각 하나, 그리고 외국에서는 보고되지 않은 것으로 정상인에서 IVS6-52 에 GC가 도입된 것을 확인하였다. 백혈병 환자와 유전자 변이간에 통계학적인 차이점은 없지만 이러한 연구는 앞으로 백혈병의 진단 마크 개발에 도움이 될 것으로 사료된다.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
• /
• 제17권4호
• /
• pp.1865-1868
• /
• 2016

Background: The number of patients with oral cancer in India is increasing gradually (especially in younger people). Although the diagnostic modalities and therapeutic management of oral cancer are improving, the treatment outcome and prognosis of oral cancer remain poor. The absence of definite early warning symptoms for most head and neck cancers suggests that sensitive and specific biomarkers are likely to be important in screening for high-risk patients. Aims: To analyze serum adenosine deaminase (ADA) levels in oral squamous cell carcinoma (OSCC) cases who reported to our institute. Materials and Methods: A prospective study was performed on 100 histopathologically proven cases of OSCC (study group) and 100 normal healthy individuals (control group). Independent sample and one sample t-tests and one way ANOVA followed by Tuckey's POST HOC test were conducted for analysis. Results: Statistically significant increase in serum ADA levels was observed in OSCC cases compared to the control group. Also serum ADA level increased significantly with the histopathological grade. Conclusions: Serum ADA levels in OSCC may be a useful diagnostic and prognostic biomarkers in clinical practice and our findings suggest that a large-scale study is warranted to confirm clinical utility as a prognostic and diagnostic biomarker.