In order to prevent pollution from animal waste, P, N and pharmacological level minerals should be properly managed. Microbial phytase has been used successfully to control P excretion. Activity of natural phytase in certain plant feedstuffs is high enough to be considered in feed formulation. Nitrogen control can be achieved through amino acid supplementation and protein restriction in the diet. Supplementation with carbohydrases reduces output of excreta as well as N. Ammonia release from the manure could be reduced by using a low crude protein diet along with the supplementation with probiotics products. Excretion of minerals used at pharmacological level can be reduced by using chelated forms. Cu and Zn in the form of methionine chelate have been successfully used in the broiler and pig diets.
Phytase of rat intestine had a large amount of oilgosacchanrides ; The enzyme consisted of two different subunits with the molecular weights of 90 KDa and 70 KDa in its intack form, whereas the apparent molecular weights tumed to 72 KDa and 52 KDa, respectively, after deglycosylation. The treatment with glycopeptidase F reduced the molecular weights from 90 KDa and 70 KDa to 83 KDa and 52 KDa, respectively, While endoglycosidase H caused no change in their molecular weights. These results indicate that the 70KDa subunit contains only the N-linked oilgosaccharide chains, while the 90KDa subunit ocntains O-linked oilgosaccharides as well as N-linked ones. Enzyme-linked lectin assays suggeted that bisecting N-acetyl-D-glucosamine and galactose 1-4 N-acetyl-D-glucosamine structures were present and that fucose was included in these oilgosaccharide moieties. Sialic acid was not found in either subunit.
Byung Sam Son;So Hyeong Kim;Hye-Young Sagong;Su Rin Lee;Eun Jung Choi
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.34
no.5
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pp.1119-1125
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2024
Phytase increases the availability of phosphate and trace elements by hydrolyzing the phosphomonoester bond in phytate present in animal feed. It is also an important enzyme from an environmental perspective because it not only promotes the growth of livestocks but also prevents phosphorus contamination released into the environment. Here we present a novel phytase derived from Turicimonas muris, TmPhy, which has distinctive structure and properties compared to other previously known phytases. TmPhy gene expressed in the Pichia system was confirmed to be 41 kDa in size and was used in purified form to evaluate optimal conditions for maximum activity. TmPhy has a dual optimum pH at pH3 and pH6.8 and exhibited the highest activity at 70℃. However, the heat tolerance of the wildtype was not satisfactory for feed application. Therefore, random mutation, disulfide bond introduction, and N-terminal mutation were performed to improve the thermostability of the TmPhy. Random mutation resulted in TmPhyM with about 45% improvement in stability at 60℃. Through further improvements, a total of three mutants were screened and their heat tolerance was evaluated. As a result, we obtained TmPhyMD1 with 46.5% residual activity, TmPhyMD2 with 74.1%, and TmPhyMD3 with 66.8% at 80℃ heat treatment without significant loss of or with increased activity.
de P. Naves, L.;Rodrigues, P.B.;Bertechini, A.G.;Correa, A.D.;de Oliveira, D.H.;de Oliveira, E.C.;Duarte, W.F.;da Cunha, M.R.R.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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v.27
no.7
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pp.1003-1012
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2014
The use of a suitable methodology to quantify the phytate phosphorus ($P_{phy}$) content in both the feed and the excreta from broilers is required to enable accurate calculation of the catalytic efficiency of the phytase supplemented in the feed. This study was conducted to compare 2 analytical methodologies (colorimetry and also high-performance liquid chromatography with a refractive index detector) in order to calculate the phytase efficiency by utilizing the results from the methodology that was shown to be the most appropriate. One hundred and twenty broilers were distributed in a $(4+1){\times}2$ factorial arrangement, corresponding to 4 diets that were equally deficient in P supplemented with increasing levels of phytase (0, 750, 1,500, and 2,250 units of phytase activity - FTU - per kg of feed) plus 1 positive control diet without phytase, supplied to male and female birds. The result indicated that the colorimetric methodology with an extraction ratio of 1:20 (mass of sample in g:volume of the solvent extractor in mL) was shown to be the most adequate. There was no interaction between the phytase level and the sex of the broilers (p>0.05). Males consumed 12% more $P_{phy}$ than did females (p<0.01), but the sex of the broilers did not affect (p>0.05) the excretion and retention coefficient of $P_{phy}$. The increase in the phytase level of the diet reduced (linear, p<0.01) the $P_{phy}$ excretion. The greatest $P_{phy}$ retention was estimated at 87.85% when the diet contained 1,950 FTU/kg (p<0.01), indicating that it is possible to reduce the inorganic P in the formulation at an amount equivalent to 87.85% of the $P_{phy}$ content present in the feed, which, in this research, corresponds to a decrease in 2.86 g of P/kg of the feed.
Yang, Y.Y.;Fan, Y.F.;Cao, Y.H.;Guo, P.P.;Dong, B.;Ma, Y. X.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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v.30
no.1
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pp.57-63
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2017
Objective: Two experiments were conducted to determine the effects of adding exogenous phytase and xylanase, individually or in combination, as well as pelleting on nutrient digestibility, available energy content of wheat and the performance of growing pigs fed wheat-based diets. Methods: In Experiment 1, forty-eight barrows with an initial body weight of $35.9{\pm}0.6kg$ were randomly assigned to a $2{\times}4$ factorial experiment with the main effects being feed form (pellet vs meal) and enzyme supplementation (none, 10,000 U/kg phytase, 4,000 U/kg xylanase or 10,000 U/kg phytase plus 4,000 U/kg xylanase). The basal diet contained 97.8% wheat. Pigs were placed in metabolic cages for a 7-d adaptation period followed by a 5-d total collection of feces and urine. Nutrient digestibility and available energy content were determined. Experiment 2 was conducted to evaluate the effects of pelleting and enzymes on performance of wheat for growing pigs. In this experiment, 180 growing pigs ($35.2{\pm}9.0kg\;BW$) were allocated to 1 of 6 treatments according to a $2{\times}3$ factorial treatment arrangement with the main effects being feed form (meal vs pellet) and enzyme supplementation (0, 2,500 or 5,000 U/kg xylanase). Results: In Experiment 1, there were no interactions between feed form and enzyme supplementation. Pelleting reduced the digestibility of acid detergent fiber (ADF) by 6.4 percentage units (p<0.01), increased the digestibility of energy by 0.6 percentage units (p<0.05), and tended to improve the digestibility of crude protein by 0.5 percentage units (p = 0.07) compared with diets in mash form. The addition of phytase improved the digestibility of phosphorus (p<0.01) and calcium (p<0.01) by 6.9 and 7.6 percentage units respectively compared with control group. Adding xylanase tended to increase the digestibility of crude protein by 1.0 percentage units (p = 0.09) and increased the digestibility of neutral detergent fiber (NDF) (p<0.01) compared with control group. Supplementation of the xylanase-phytase combination improved the digestibility of phosphorus (p<0.01) but impaired NDF digestibility (p<0.05) compared with adding xylanase alone. In Experiment 2, adding xylanase increased average daily gain (p<0.01) and linearly improved the feed:gain ratio (p<0.01) compared with control group. Conclusion: Pelleting improved energy digestibility but decreased ADF digestibility. Adding xylanase increased crude protein digestibility and pig performance. Phytase increased the apparent total tract digestibility of phosphorus and calcium. The combination of phytase-xylanase supplementation impaired the effects of xylanase on NDF digestibility.
본 연구는 육성돈에 있어 인분해효소인 phytase의 첨가가 환경친화성사료개발을 위한 기초자료로 사용하기 위해 영양소 이용률을 측정하였다. 대조구는 옥수수-대두박의 육성돈 사료이고, 처리구는 대조구 사료에 Phytase의 첨가 수준을 500 unit 및 1,000 unit을 첨가한 구로 3×3 Latin Square 방법으로 실시하였다. 건물과 질소에 대한 소화율에서는 각 처리구간에 유의적인 차이가 없었다(P>0.05). 회분, 칼슘 및 인의 소화율의 경우 phytase 첨가구가 대조구에 비해 높은 수준을 보였다(P<0.05). 돼지가 섭취한 인의 양은 phytase 첨가구가 대조구에 비해 증가하였다. 또한 인의 흡수량에서 phytase 첨가구가 대조구에 비해 높았다(P<0.05) 분과 뇨의 총 인 배설량은 유의적인 차이를 나타내지 않았다. 칼슘의 섭취량은 처리구가 대조구에 비해 높았다. 칼슘의 분 배설량은 각 처리구간에 별 다른 차이를 보이지 않았으나(P>0.05), 뇨의 배설량은 처리구가 대조구보다 적은 양이 배설되었다. 소화된 아미노산 중 cystine, isoleucine, tyrosine, phenylalanine은 처리구가 대조구에 비해 소화율이 현저히 증가된 것을 알 수 있었다(P<0.05). Asparagine, threonine, serine, methionine, leucine의 경우 phytase를 500 unit 첨가한 구가 높은 소화율을 나타내었다(P<0.05). 한편 lysine, histidine, arginine 등의 다른 아미노산은 처리구가 대조구보다 약간의 소화율 증가를 보였으나 통계적 유의차는 나타나지 않았다(P>0.05). 결론적으로 인분해효소 phytase를 사료내 첨가하므로서 분중 영양소를 줄일 수 있는 환경친화성 사료를 개발 가능하다고 사료된다. 체결홈이 형성된 체결부를 갖는 안경집과 이것에 결합되는 체결구가 마련되어 개폐되는 커버가 형성된 케이스로 구성된다.로 금형설계 및 제작기간을 단축하고자 한다.ere demonstrated in rats after i.c.v., intraperitoneally and orally administration, respectively. The antiepileptical effects by the combination of compounds from ginseng; were compared with the iuluence of Rg1, Rb1, Rc and with the well known antiepileptical drugs such as carbamazepine, valproic acid. The base for the research is obtained by using the WAG/Rij strain (Luijtelaar, Coenen, Kuznetcova), an excellent genetic model for human generalized absence epilepsy. The improving action of gensinosides was effectively demonstrated on the model of electrical kindling of amygdala of WAG/Rij rats with genetically determined absences, and the influences of ginsenosides on the slow wave discharges have also been being investigated. The different characteristics of a kindling process exerted in the sex-dif
Isolation of BacilLus sp. producing multi-enzyme and optimization of medium conditions for its production using feedstuffs for probiotics were carried out in this study. A bacterium isolated from natural resources, namely Bacillus subtilis 4-3, has multi-enzyme activity (phytase. cellulase, xylanasc, protease, and amylase. In the culture of B. subtilis 4-3 using soybean meal and rice bran. relatively low phytate degradation was noted using whereas high phytate degradability was observed with wheat bran (80.63%). The optimal composition of medium using feedstuffs was 1.0% (w/v) soybean meal and 2% (w/v) molasses to yield high cell growth.
In order to improve the availability of phytase and probiotics together, a phytase gene from Aspergillus ficuum has been expressed in Lactobacillus. In this study, the transformed Lactobacillus with phytase gene was fed to pigs to determine its effect on pig production, feed conversion and gut microbes. Forty eight, 60-day-old, castrated pigs (Duroc${\times}$Landrace${\times}$Pietrain) were assigned to 6 groups, 8 pigs for each group. Group 1 was the control, group 2 was added with chlortetracycline (500 mg/kg), group 3 was added with the transformed Lactobacillus (500 mg/kg) with 20% (w/w) of calcium monohydrogen phosphate (CMP, $CaHPO_{4}$) removed, group 4 was added with the natural Lactobacillus (500 mg/kg) with 20% (w/w) of CMP removed, group 5 was added with the transformed Lactobacillus (500 mg/kg) with 40% (w/w) of CMP removed, group 6 was added with phytase (500 mg/kg) with 40% (w/w) of CMP removed. The results showed: i) the average daily gain (ADG) was improved in groups 2, 3 and 4 (p<0.05); ii) the diarrhea rates in the groups added with Lactobacillus were lower than in the other groups (p<0.05), in which the transformed Lactobacillus had more effect on reducing digestive disease; iii) the transformed Lactobacillus was most effective in improving the digestibilities of crude protein (CP), calcium (Ca), phosphorus (P), compared with the other groups (p<0.05); iv) Lactobacillus could increase lactic acid bacterium number and ammonia concentrations, and decrease pH values and E. coli number in pig feces (p<0.05); v) the phytase activity in the feces of pigs fed with the transformed Lactobacillus was 133.32 U/g, which was higher than in group 4 (9.58 U/g, p<0.05), and was almost the same as group 6 (135.94 U/g); vi) the transformed Lactobacillus could increase serum concentrations of IgA, triglyceride, and glutamic oxaloacetic transaminase activity (p<0.05), and had no significant effect on other serum indexes (p>0.05).
Objective: This study was conducted to determine catalytic properties of wheat phytase with exopolyphosphatase activity toward medium-chain and long-chain inorganic polyphosphate (polyP) substrates for comparative purpose. Methods: Exopolyphosphatase assay of wheat phytase toward polyP75 (medium-chain polyP with average 75 phosphate residues) and polyP1150 (long-chain polyP with average 1150 phosphate residues) was performed at pH 5.2 and pH 7.5. Its activity toward these substrates was investigated in the presence of Mg2+, Ni2+, Co2+, Mn2+, or ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA). Michaelis constant (Km) and maximum reaction velocity (Vmax) were determined from Lineweaver-Burk plot with polyP75 or polyP1150. Monophosphate esterase activity toward p-nitrophenyl phosphate (pNPP) was assayed in the presence of polyP75 or polyP1150. Results: Wheat phytase dephosphorylated polyP75 and polyP1150 at pH 7.5 more effectively than that at pH 5.2. Its exopolyphosphatase activity toward polyP75 at pH 5.2 was 1.4-fold higher than that toward polyP1150 whereas its activity toward polyP75 at pH 7.5 was 1.4-fold lower than that toward polyP1150. Regarding enzyme kinetics, Km for polyP75 was 1.4-fold lower than that for polyP1150 while Vmax for polyP1150 was 2-fold higher than that for polyP75. The presence of Mg2+, Ni2+, Co2+, Mn2+, or EDTA (1 or 5 mM) exhibited no inhibitory effect on its activity toward polyP75. Its activity toward polyP1150 was inhibited by 1 mM of Ni2+ or Co2+ and 5 mM of Ni2+, Co2+, or Mg2+. Ni2+ inhibited its activity toward polyP1150 the most strongly among tested additives. Both polyP75 and polyP1150 inhibited the monophosphate esterase activity of wheat phytase toward pNPP in a dose-dependent manner. Conclusion: Wheat phytase with an unexpected exopolyphosphatase activity has potential as a therapeutic tool and a next-generational feed additive for controlling long-chain polyP-induced inappropriate inflammation from Campylobacter jejuni and Salmonella typhimurium infection in public health and animal husbandry.
Ilyas, A.;Hirabayasi, M.;Matsui, T.;Yano, H.;Yano, F.;Kikishima, T.;Takebe, M.;Hayakawa, K.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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v.8
no.2
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pp.135-138
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1995
Soybean meal was fermented by Aspergillus usami in order to reduce phytate content. Aflatoxin B1 was not detected in the fermented soybean meal. The contents of crude protein, crude fiber, ether extract and crude ash were slightly increased following fermentation with a concomitant reduction in nitrogen free extract. Though the fermentation partly degraded proteins in the soybean meal, there was small difference in amino acid composition between the soybean meal and the fermented soybean meal. The results showed that the fermentation did not affect nutritional value of protein in soybean meal. Approximately 55% of phosphorus extracted by trichloroacetic acid was inositol hexaphosphate (phytate) in the soybean meal. The content of inositol tetra to hexaphosphates was not detected in the fermented soybean meal. These results indicated that the fermentation almost completely eliminated phytate in soybean meal. Phytase activity was not detected in the unfermented soybean meal. However, the enzyme activity in the fermented soybean meal was 167.7 U/g. When the fermented soybean meal in supplemented in formula feeds, phytase in the fermented soybean meal might partly degrade the phytate in other ingredients in the digestive tract. The fermented soybean meal is possibly used as a phytate-free protein source of feed, which contains high available phosphorus.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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