• Journal of Dairy Science and Biotechnology
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• 제14권2호
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• pp.135-146
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• 1996

본 연구는 UF에 의한 cheese base제조과정 중 calf rennet 과 대용효소인 porcine pepsin을 각각 단독, 또는 1:1로 혼합첨가하여 cheese base를 제조한 후, HPLC와 전기영동을 이 용하여 casein의 변화를 관찰하기 위여 실시하였으며 얻어진 결과는 다음과 같다. HPLC를 이용, Superose 12 column에 의하여cheese casein을 gel filtration한 결과, Cheddar cheese는 제조직후 5개의 분획이었던 것이 6개월 숙성후 8개의 분획으로 분별되었으며, 효소처리하지 않은 대조구 cheese base는 8주 숙성중 4개의 분획으로 분별되어 분획수의 큰 변동은 없었고, calf rennet 단독처리구는 4개에서 5개로, 1:1혼합효소처리구(calf rennet : porcine pepsin)는 4개에서 7개로, porcine pepsin 단독처리구는 4개에서 8개로 각각 분별되어 porcine pepsin이 혼합됨에 따라 casein의 분해 정도가 높았다. 효소처리하여 8주간 숙성시킨 cheese base의 casein을 전기영동한 결과, ${\alpha}$$_{s1}$-casein의 경우, calf rennet 단독처리구는 3개의 band로 분리되었고, 1:1혼합효소처리구(calf rennet :porcine pepsin)와 Porcine pepsin 단독처리구는 5개의 band로 분리되었으며, 대조구는 1개의 major band와 2개의 minor band를 나타내었다. ${\beta}$-casein은 porcine pepsin의 첨가비율이 증가할수록 그 농도는 감소하였고, ${\gamma}_1$ ${\gamma}_2$-casein으로 추정되는 band는 상대적으로 증가함을 나타내었다. 또한 para-${\kappa}$-casein은 대조구를 제외하고 calf rennet, porcine pepsin단독처리구, 1:1혼합효소처리구에서 분리되었다.

• 한국동물위생학회지
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• 제41권3호
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• pp.171-177
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• 2018

Purified bee venom was collected from colonies of honeybees (Apis mellifera L.) using a bee venom collector under sterile conditions and then purified under strict laboratory conditions. Purified bee venom contained $63.9{\pm}5.4%$ melittin, $10.9{\pm}1.6%$ phospholipase A2, and $2.3{\pm}0.3%$ apamin. Purified bee venom has various anti-bacterial, anti-inflammatory and immunostimulating effects. In this study, we evaluated purified bee venom which are mammary gland cells, MAC-T cells are used to increase the synthesis of milk protein. Purified bee venom promoted the proliferation of MAC-T cells at concentrations below $1{\mu}g/mL$, but cytotoxicity at $10{\mu}g/mL$ and above. As a result of the increase in the synthesis of ${\beta}-casein$, a milk protein after treatment with MAC-T cells at a concentration of the bee venom without cytotoxicity, the ${\beta}-casein$ content in the cell culture was increased when treated at a concentration of 1 ng/mL or more. In addition, it was confirmed that purified bee venom significantly increased the expression of bovine ${\beta}-casein$ (bCSNB) mRNA, a ${\beta}-casein$ synthesis gene, at a concentration of 1 ng/mL or more. These results suggest that purified bee venom can be used to increase the production of livestock by ultimately increasing the expression of milk protein.

• 농업과학연구
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• 제28권2호
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• pp.92-98
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• 2001

락토페리신은 다양한 생리활성을 나타내는 락토페린(약 80kD)에서 유래된 항균성펩타이드 분획물(5kD)이다. 마우스HC11유선상피세포에서 인체 락토페리신의 발현은 bovine beta-casein을 promotor로 하고 인체 락토페리신 cDNA를 삽입하여 제작한 pBL1-cin발현벡타를 이용하였다. 이 발현벡타를 이용하여 인체 락토페리신 발현여부를 RT-PCR, northern blot, dot blot분석을 통하여 확인하였다. pBL1-cin 발현백타를 HC11세포에 transfection 하여 얻은 RNA를 이용하여 RT-PCR를 한 결과 150bp의 크기로 확인되었고 Northern blot 분석결과는 약 2.3 kb의 크기로 확인되었다. 인체 락토페린 polyclonal항체를 이용하여 dot blot한 결과 인체 락토페리신이 분비됨을 확인하였다.

• 한국축산식품학회지
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• 제28권3호
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• pp.306-311
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• 2008

본 연구는 안전성 확보차원에서 식품분야에 활용성이 증가하고 있는 감마선 조사처리가 유제품의 항원성 저감에도 효과가 있음을 보이기 위해 수행되었다. 모세관전기영동 결과 ${\alpha}_{S1}$-케이신과 ${\beta}_{A1}$-케이신이 ${\alpha}_{S0}$-케이신과 ${\beta}_{A2}$-케이신보다 상대적으로 많이 분해되었음을 확인하였다. cELISA를 이용한 in vitro 시험 결과와 기니픽을 이용한 수동피부아나필랙시스(Passive cutaneous anaphylaxis) 반응을 통해 10 kGy의 감마선 조사에서 뚜렷한 항원성 저감을 확인하였다. 이상의 결과는 감마선 조사가 우유 단백질의 항원, 특히 ${\alpha}_{S1}$-케이신과 ${\beta}_{A1}$-케이신의 구조를 변화시켜 항원성을 감소시키는 것으로 판단되며, 따라서 감마선 조사는 알레르기 유발 식품의 항원성 감소에 유용한 기술로 생각된다.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제30권4호
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• pp.293-299
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• 2006

In order to generate transgenic goats expressing human growth hormone (hGH) in their mammary glands, goat ${\beta}-Casein/hGH$ hybrid gene was introduced into goat zygotes by pronuclear microinjection. DNA-injected embryos were transferred to the oviduct of recipients at 2-cell stage or to the uterus at morula/blastocyst stage after cultivation in glutathione-supplemented mSOF medium in vitro. Pregnancy and survival rate were not significantly different between 2-cell embryos and morula/blastocysts transferred to oviduct and uterus, respectively. One transgenic female goat was generated from 153 embryos survived from DNA injection. Southern blot analysis revealed that the transgenic goat harbored single-copy transgene with a partial deletion in its sequences. Despite of the partial sequence deletion, the transgene was successfully expressed hGH at the level of $72.1{\pm}15.1{\mu}g/ml$ in milk throughout lactation period, suggesting that the sequence deletion had occurred in non-essential part of the transgene for the transgene expression. Unfortunately, however, the transgene was not transmitted to her offspring during three successive breeding seasons. These results demonstrated that goat ${\beta}-casein/hGH$ gene was integrated into the transgenic goat genome in a mosaic fashion with a partial sequence deletion, which could result in a low level expression of hGH and a failure of transgene transmission.

• 농업과학연구
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• 제36권1호
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• pp.111-122
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• 2009

부들 화분(포항(蒲黃))의 혈전 용해능을 검토하기 위하여 부들 화분을 물 추출하여 혈전 분해능이 있음을 확인하였다. 부들 화분의 혈전용해효소를 DEAE-cellulose, Sephadex G-150을 이용한 gel filteration, HPLC로 정제하여 acrylamide gel electrophoresi로 정제를 하였다. 정제효소는 HPLC와 전기영동에 의하여 순수하게 정제되었음을 확인하였고 비활성은 38U/mg로서 정제도는 86.4배이었고 분자량은 75kDa이었다. 정제효소의 최적 pH는 4.0이었고 pH 4.0-6.0에서 안정하였으며 정제효소의 최적온도는 $55^{\circ}C$이었고 $30-60^{\circ}C$에서는 안정하였으나 $70^{\circ}C$ 부터 활성이 현저히 저하하여 $80^{\circ}C$ 이상에서는 완전히 실활하였다. 기질특이성은 fibrin을 가장 잘 분해하였고 fibrin, whole casein, ${\kappa}$-casein, ${\alpha}$-casein, ${\beta}$-casein, BSA순으로 나타났다. Casein을 기질로 하였을 때 Km value는 0.44 mM 이었으며 casein에 대한 친화력이 높은 것으로 나타났다. 효소활성에 미치는 금속이온의 영향은 $K^+$, $Na^+$, $Mg^{2+}$ 등은 효소반응에 영향을 미치지 않았으나 $Zn^{2+}$, $Fe^{2+}$는 심하게 저해작용을 나타내었고 정제효소는 PMSF, iodoacetic acid 및 SDS에 의하여 심하게 저해되는 것으로 보아 serine protease로 추정되었다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제32권2호
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• pp.257-264
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• 2019

Objective: Dairy cattle nutrient requirement systems acknowledge amino acid (AAs) requirements in aggregate as metabolizable protein (MP) and assume fixed efficiencies of MP used for milk protein. Regulation of mammary protein synthesis may be associated with AA input and milk protein output. The aim of this study was to evaluate the effect of nanoemulsified methionine and cysteine on the in-vitro expression of milk protein (casein) in bovine mammary epithelial cells (MAC-T cells). Methods: Methionine and cysteine were nonionized using Lipoid S 75 by high-speed homogenizer. The nanoemulsified AA particle size and polydispersity index were determined by dynamic light scattering correlation spectroscopy using a high-performance particle sizer instrument. 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay was performed to determine the cytotoxicity effect of AAs with and without nanoionization at various concentrations (100 to $500{\mu}g/mL$) in mammary epithelial cells. MAC-T cells were subjected to 100% of free AA and nanoemulsified AA concentration in Dulbecco's modified Eagle medium/nutrient mixture F-12 (DMEM/F12) for the analysis of milk protein (casein) expression by the quantitative reverse transcription polymerase chain reaction method. Results: The AA-treated cells showed that cell viability tended to decrease (80%) in proportion to the concentration before nanogenesis, but cell viability increased as much as 90% after nanogenesis. The analysis of the expression of genetic markers related to milk protein indicated that; ${\alpha}_{s2}$-casein increased 2-fold, ${\kappa}$-casein increased 5-fold, and the amount of unchanged ${\beta}$-casein expression was nearly doubled in the nanoemulsified methionine-treated group when compared with the free-nanoemulsified methionine-supplemented group. On the contrary, the non-emulsified cysteine-administered group showed higher expression of genetic markers related to milk protein ${\alpha}_{s2}$-casein, ${\kappa}$-casein, and ${\beta}$-casein, but all the genetic markers related to milk protein decreased significantly after nanoemulsification. Conclusion: Detailed knowledge of factors, such nanogenesis of methionine, associated with increasing cysteine and decreasing production of genetic markers related to milk protein (casein) will help guide future recommendations to producers for maximizing milk yield with a high level of milk protein casein.

• BMB Reports
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• 제31권4호
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• pp.413-417
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• 1998

Transgenic mice containing a bovine ${\beta}-Casein/Human$ lysozyme fusion gene (pBZ) were generated in order to produce human lysozyme in their milk. The expression vector was a quadripartite fusion consisting of a 2 kb upstream DNA of the bovine ${\beta}-casein$ gene, human lysozyme gene, intron II of the rabbit ${\beta}-globin$ gene, and the polyadenylation/termination signals of SV40 DNA. Fertilized mouse zygotes were microinjected with pBZ, then transferred into the oviduct of foster mothers. Out of 20 mice born, 11 survived until postweaning and three were identified as positivetransgenic by Southern blot analysis (one male and two females). The founder mice were mated to BCFl mice to produce transgenic progeny. It was confirmed by RT-PCR and Northern blot analyses that the transgene was specifically expressed in the mammary gland of the founder mice. Furthermore, the artificial introns within the transgenic RNA was proven to be correctly spliced out as judged by RT-PCR analysis. These results indicated that transgenic mice generated in this study properly expressed the human lysozyme RNA in their mammary gland.

• 농업과학연구
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• 제16권2호
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• pp.201-211
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• 1989

Mucor rennet의 이용(利用) 가능성(可能性)을 타진(打診)하기 위하여 Blue cheese를 제조(製造)하고 그 각종(各種) 질소화합물(窒素化合物)의 특성(特性)을 조사(調査)한 결과(結果)를 요약(要約)하면 다음과 같다. 1. Blue cheese의 수율(收率)은 calf rennet과 Mucor rennet간(間)에는 큰 차이(差異)가 없었다. 2. 숙성과정중(熟成過程中) cheese의 고형분(固形分) 함량(含量)은 증가(增加)하였고 첨가비율(添加比率)에 따른 차이(差異)는 인정(認定)되지 않았다. 3. water soluble nitrogen은 숙성(熟成)이 진행(進行)됨에 따라 증가(增加)하였으며 숙성초일(熟成初日)부터 calf rennet에 비(比)하여 Mucor rennet 편이 높았고 숙성(熟成) 40일(日)부터는 혼합(混合)rennet이 calf rennet보다 낮았다. 4. non protein nitrogen, peptone amino nitrogen, water soluble protein nitrogen, proteose nitrogen, peptone nitrogen 및 숙성율등(熟成率等)도 water soluble nitrogen과 동등(同等)한 변화(變化)를 보였다. 5. Mucor rennet으로 제조(製造)한 Blue cheese casein을 전기영동(電氣泳動)한 결과(結果) as-casein과 ${\beta}$-casein의 분해도(分解度)가 높았으나 calf rennet로 제조(製造)한 Blue cheese의 as-casein과 ${\beta}$-casein의 분해도(分解度)는 비교적 낮았고 숙성(熟成) 60일(日)에는 Mucor rennet 처리구(處理區)의 casein은 다소 잔존(殘存)함을 알 수 있었다. 6. Blue cheese를 60일간(日間) 숙성(熟成)시켰을때 유리(遊離)아미노산(酸) 함량(含量)은 Mucor rennet으로 제조(製造)한 cheese보다 전(全) 숙성기간(熟成期間)동안 많았다.

• 한국식품과학회지
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• 제25권5호
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• pp.521-525
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• 1993

계면에서의 단백질 흡착 기작을 연구하기 위하여 여러 단백질의 A/W 계면에서의 흡착이 조사되었다. BSA intermediates들의 흡착결과는 단백질 2차, 3차 구조가 계면에서의 흡착기작에 영향끼친 것을 나타냈으며, succinylated ${\beta}-lactoglobulin$의 흡착에서는 순 음전하의 증가가 정전기적 상호작용에 영향끼침을 보여 주었다. 또한 ${\beta}-casein$의 흡착은 물 구조를 파괴하는 chaotropic 염 존재하에서 흡착속도가 떨어지는 것을 시사했다.