총29점의 국내시판 십자화과 채소종자에 대하여 검은빛썩음병(흑부병) 감염여부를 종자세척액의 농축, 선택배지에 도말방법에 의해 조사한 결과 1점의 수입 양배추종자에서 검은빛썩음병균이 검출되었다. 몇가지 종자소독방법을 검토한 결과 옥시풀($3\3%$ 과한사수소수)에 30분간 침지함으로써 자연감염종자의 검은빛썩음병균을 소독할 수 있었다. 십자화과 채소재배포장에서 발병조사 결과 검은빛썩음병이 양배추에서는 매우 중요한 병해인 것으로 나타났다.
십자화과 작물에 발생하는 검은썩음병(Black rot or Black vein of crucifer)의 병원성 세균인 Xanthomonas campestris pv. crucifer)의 병원성 세균인 Xanthomonas campestris pv. campestris를 분리, 동정하고 병원성을 검정하였다. 이 X. c. pv. campestris 는 3가지 종의 Chinese cabbage에 병원성을 나타내었고, 병원성과 관련된 특성을 결정하기 위하여 Tn5 mutagenesis를 실시 cellulase negative mutant를 선발하여 병원성 검정하였다. 선발된 cellulase negative mutant를 배추에 분무 접종하여 광학 현미경과 전자현미경으로 관찰한 결과 cellulase negative mutant는 wild type와 함께 기공표면과 기공하부조직에서 정착하였지만 그 밀도는 낮았다. 반면 접종 24시간 이후 wild type은 기공표면과 기공하부조직이 lysis되기 시작하여 48시간 이후에는 병원성의 진전으로 보다 많이 lysis되었다. 6일 후, wild type은 cellulase활성에 의해 식물체 조직에서 높은 증식력을 보이며 조직을 lysis 시키고 또한 조직 깊숙이 침입, 정착하는 것을 관찰하였다. 이 결과로 X. c. pv.c campestris의 cellulase는 병원성에 관여하는 중요한 요인으로 생각된다.
Yeo-Hyeon Kim;Sopheap Mao;Nihar Sahu;Uzzal Somaddar;Hoy-Taek Kim;Masao Watanabe;Jong-In Park
The Plant Pathology Journal
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제39권5호
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pp.494-503
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2023
Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc) is a plant pathogen of Brassica crops that causes black rot disease throughout the world. At present, 11 physiological races of Xcc (races 1-11) have been reported. The conventional method of using differential cultivars for Xcc race detection is not accurate and it is laborious and time-consuming. Therefore, the development of specific molecular markers has been used as a substitute tool because it offers an accurate and reliable result, particularly a quick diagnosis of Xcc races. Previously, our laboratory has successfully developed race-specific molecular markers for Xcc races 1-6. In this study, specific molecular markers to identify Xcc race 7 have been developed. In the course of study, whole genome sequences of several Xcc races, X. campestris pv. incanae, X. campestris pv. raphani, and X. campestris pv. vesicatoria were aligned to identify variable regions like sequence-characterized amplified regions and insertions and deletions specific to race 7. Primer pairs were designed targeting these regions and validated against 22 samples. The polymerase chain reaction analysis revealed that three primer pairs specifically amplified the DNA fragment corresponding to race 7. The obtained finding clearly demonstrates the efficiency of the newly developed markers in accurately detecting Xcc race 7 among the other races. These results indicated that the newly developed marker can successfully and rapidly detect Xcc race 7 from other races. This study represents the first report on the successful development of specific molecular markers for Xcc race 7.
Xanthomonas campestris pv. glycines causes bacterial pustule disease on susceptible soybean leaves and produces a bacteriocin, named glycinecinA, against most xanthomonads including Xanthomonas campestris pv. vesicatoria. One of the 5 isolated DNA regions responsible for bacteriocin production, a 1.7 kb DNA region for the glycinecinA gene, was used as a probe to detect the presence of the homolog DNA in other bacterial strains. Among 55 bacterial strains tested, only X. campestris pv. glycines showed the positive signal with glycinecinA DNA. Two oligomers, heu2 and heu4, derived from a glycinecinA DNA were used to carry out the polymerase chain reaction (PCR) analysis with chromosomal DNA from 55 different bacterial strains including 24 different strains of X. campestris pv. glycines, 9 different pathovars of xanthomonads, and other 22 bacterial strains of different genus and species. By separation of the PCR products on agarose gel, a 0.86 kb DNA fragment was specifically detected when X. campestris pv. glycines was present in the amplification assay. The 0.86 kb fragment was not amplified when DNA from other bacteria was used for the assay. Southern analysis with glycinecinA DNA showed that the PCR signal was obtained with X. campestris pv. glycines isolates from various geographic regions and soybean cultivars. Therefore, the 1.7 kb DNA region for the glycinecinA gene can be used for the pathovar-specific probe for the DNA hybridization and the primers heu2 and heu4 can be used for the pathovar-specific primers for the PCR analysis to detect X. campestris pv. glycines.
2003년부터 2004년 평창 지역의 브로콜리 포장에서 새로운 병해가 발견되었다. 유묘 감염이 되었을 때 떡잎의 주위로부터 검게 변색되기 시작하여 결국 떡잎이 떨어지고 유묘는 죽었다. 성체에서는 잎 가장자리로부터 엽맥을 타고 진전되어 V 자 또는 U 자형의 노란색 병반을 형성하였다. YDC 배지에서 병원세균을 순수 분리하였을 때 Xanthomonas 속 세균의 전형적인 특정인 노란색 색소를 띤 세균이 형성되었다. 분리된 세균을 $10^8 cfu/ml$로 현탁 한후 3 주 동안 자란 브로콜리, 양배추, 배추, 케일, 무에 가위 접종하여 병원성을 확인하였다. 지방산 조성 및 함량, 다양한 탄소원 이용정도 및 16S rDNA 염기서열를 이용하여 분리세균 SL4797 과 SL4800 을 대조균주 X. campestris pv. campestris NCPPB528 과 비교하였을 때 매우 유사하였다. 이 논문은 국내에서 브로콜리의 검은썩음병 최초 보고이다.
This study was conducted to investigate host and non-host disease resistances of kimchi cabbage plants to bacterial infection. Kimchi cabbage leaves responded differently to infections with a virulent strain of Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc) 8004 and two strains (85-10 and Bv5-4a.1) of non-host bacteria X. campestris pv. vesicatoria (Xcv). Non-host bacteria triggered a rapid tissue collapse of the leaves showing as brown coloration at the infected sites, highly increased ion leakage, lipid peroxidation and accumulation of UV-stimulated autofluorescence materials at the inoculated sites. During the observed interactions, bacterial proliferations within the leaf tissues were significantly different. Bacterial number of Xcc 8004 progressively increased within the inoculated leaf tissues over time, while growths of two non-host bacteria Xcv strains were distinctly limited. Expressions of pathogenesis-related genes, such as GST1, PR1, BGL2, VSP2, PR4 and LOX2, were differentially induced by host and non-host bacterial infections of X. campestris pathovars. These results indicated that rapid host cellular responses to the non-host bacterial infections may contribute to an array of defense reactions to the non-host bacterial invasion.
Nonpathogenic mutants of Xanthomonas campestris pv. glycines were generated with Omegon-Kim to isolate genes essential for pathogenicity and inducing hypersensitive response (HR). Three nonpathogenic multants and two mutants showing slow symptom development were isolated among 1,000 colonies tested. From two nonpathogenic mutants, 8-13 and 26-13, genes homologous to hrcC and hrpF of X. campestris pv. vesicatoria were identified. The nonpathogenic mutant 8-13 had a mutation in a gene homologous to hrpF of X. campestris pv. vesicatoria and failed to cause HR on pepper plants but still induced HR on tomato leaves. The nonpathogenic mutant 26-13 had an insertional mutation in a gene homologous to hrcC of X. campestris pv. vesicatoria and lost the ability to induce HR on pepper leaves but still caused HR on tomato plants. Unlike other phytopathogenic bacteria, the parent strain and these two mutants of X. campestris pv. glycines did not cause HR on tobacco plants. a cosmid clone, pBL1, that complemented the phenotypes of 8-13 was isolated. From the analysis of restriction enzyme mapping and deletion analyses of pBL1, a 9.0-kb Eco RI fragment restored the phenotypes of 8-13. pBL1 failed to complement the phenotypes of 26-13, indicating that the hrcC gene resides outside of the insert DNA of pBL1. One nonpathogenic mutant, 13-33, had a mutation in a gene homologous to a miaA gene encoding tRNA delta (2)-isopentenylpyrophosphate transferase of Escherichia coli. This indicated that tRNA modifications in X. campestris pv. glycines may be required for expression of genes necessary for pathogenicity. The mutant 13-33 multiplied as well as the parent strain did in the culture medium and in planta, indicating that loss of pathogenicity is not due to the inability of multiplication in vivo.
An insecticidal crystal protein gene, cryIA(c), from Bacillus thuringiensis HD-73 was integrated into the chromosome of a xanthan-producing bacterium, Xanthomonas campestris XP92. The cryIA(c) gene expression cassette was constructed that placed the gene between the trc promoter and rrnB transcriptional terminator. The $lacl^q$ gene was also included to prevent the expression of cryIA(c) gene in X campestris cells. Southem blot analysis confirmed the integration of the cryIA(c) gene expression cassette in chromosome of X campestris XP92 transconjugant. Expression of the insecticidal crystal protein was confirmed by Western blot analysis and bioassay against the larvae of Hyphantria cunea (Lepidoptera: Arctiidae) and Plutella xylostella (Lepidoptera:Plutellidae).
Effects of the special media on the mycelium growth in Agaricus campestris were studied. The results might be summarized as follows: 1. The mycelium growth fo Agaricus campestris were scarecely stimulated on the Peptone basal medium which was added 0.5gr. of Peptone and Dextrose basal medium which was added 1.5gr. of dextrose during the culture for 144 hours. 2. The mycelium of Agaricus campestris on the media which was added the several kinds of vegetable extracts showed a considerable growth for 144 hours. The order is as follows; Carrot-basal medium(4ml./100ml.)>Tomato-basal medium(2ml./100ml.)>Spinach-basal medium(3ml./100ml.). However, the spinach-basal medium among these three media were no significant difference.
1998년 나주와 밀양에서 재배중인 복숭아와 자두에서 세균성 구멍병이 발생하였다. 복숭아와 자두의 병반으루부터 분리한 균주의 세균학적 특성을 조사한 결과, 병원세균 중 2균주는 Xanthomonas campestris pv. pruni로, 3균주는 Erwinia nigrifluens로 동정되었다. E. nigrifluens는 국내에서는 복숭아와 자두의 세균성 구멍병으루 처음 분리되었다. 이 균주는 X. campestris pv. pruni에 의한 병징과 구분하기가 곤란하고, 2종류의 병워세균이 동시에 침입하여 발병하는 것으루 관찰되었다. 이와 같은 이유로, E. nigrifluens와 X. compestris pv. pruni에 의한 복숭아와 자두의 세균병을 각각 \"복숭아, 자두의 세균성구멍병\"로 명명할 것을 제안한다.할 것을 제안한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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