• Journal of Life Science
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• 제9권1호
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• pp.26-34
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• 1999

A thermostable pullulanase has been isolated and purified from Thermus caldophilus GK-24 to a homogeneity by gel-filtration and ion-exchange chromatography. The specific activity of the purified enzyme was 431-fold increase from the crude culture broth with a recovery of 11.4%. The purified enzyme showed $M_{r}$ of 65 kDa on denaturated and natural conditions. The pI of the enzyme was 6.1 and Schiff staining was negative, suggesting that the enzyme is not a glycoprotein. The enzyme was most active at pH 5.5. The activity was maximal at $75^{\cire}C$ and stable up to $95^{\cire}C$ for 30 min at pH 5.5. The enzyme was stable to incubation from pH 3.5 to pH 8.0 at $4^{\cire}C$ for 24hr. The presence of pullulan protected the enzyme from heat inactivation, the extent depending upon the substrate concentration. The activity of the enzyme was simulated by $Mn^{2+}$ ion, }$Ni^{2+}$, $Ca^{2+}$, $Co^{2+}$ ions. The enzyme hydrolyzed the ${\alpha}$-1,6-linkages of amylopectin, glycogens, ${\alpha}$, ${\beta}$-limited dextrin, and pullulan. The enzyme caused the complete hydrolysis of pullulan to maltotriose and the activity was inhibited by $\alpha$, $\beta$, or $\gamma$-cyclodextrins. The $NH_{2}$-terminal amino acid sequence [(Ala-Pro-Gln-(Asp of Tyr)-Asn-Leu-Leu-Xaa-ILe-Gly-Ala(Ser)] was compared with known sequences of various sources and that was compared with known sequences of various sources and that was different from those of bacterial and plant enzymes, suggesting that the enzymes are structurally different.

• 한국식품영양학회지
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• 제10권3호
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• pp.309-313
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• 1997

멥쌀식혜와 찹쌀식혜의 한계덱스트린을 알코올침전, Biogel P-2의 겔 크로마토그래피, Superose 12 겔 크로마토그래피 칼럼을 사용한 FPLC로 정제하여 1H-NMR 분석을 행하였다. 멥쌀식혜의 한계덱스트린은 $\alpha$-1,4-글루코시드 결합과 $\alpha$-1,6-글루코시드 결합의 비율이 1:4.5, 찹쌀식혜의 한계덱스트린은 1:5.9를 나타냈다. Pullulanase 소화로 멥쌀식혜 및 찹쌀식혜의 한계덱스트린은 말토오스, 말토트리오스, 말토테트라오스, 말토펜타오스, 말토헥사오스까지 나타내 이들이 서로 조합하여 한계덱스트린을 만들고 있는 것으로 분석되었다.

• 한국식품영양학회지
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• 제10권1호
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• pp.82-86
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• 1997

쌀 20%, 엿기름 4%를 가하여 7시간 동안 당화시켜 제조한 식혜는 말토오스 11.01%, 이소말토올리고당 5.31%, 말토트리오스 1.75%, 글루코오스 0.28%를 나타냈다. 알코올침전, Toyopearl HW-40S의 겔 크로마토그래피로 식혜의 이소말토올리고당, 말통스, 말토트리오스를 분리 정제하였다. NMR 분석 결과 말토오스와 말토트리오스는 $\alpha$-1, 4-글루코시드 결합만으로 이루어져Tr, 이소말토올리고당은 $\alpha$-1, 4-글루코시드 결합과 $\alpha$-1, 6-글루코시드 결합이 5:1로 이루어진 것으로 나타났다. 이소말토올리고당은 pullulanase 처리한 결과 말토오스와 말토헥사오스까지의 분포를 나타냈다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제26권11호
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• pp.1933-1942
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• 2016

A novel ${\alpha}-glucoside$ hydrolase (named PspAG97A) from glycoside hydrolase family 97 (GH97) was cloned from the deep-sea bacterium Pseudoalteromonas sp. K8, which was screened from the sediment of Kongsfjorden. Sequence analysis showed that PspAG97A belonged to GH97, and shared 41% sequence identity with the characterized ${\alpha}-glucoside$ BtGH97a. PspAG97A possessed three key catalytically related glutamate residues. Mutation of the glutamate residues indicated that PspAG97A belonged to the inverting subfamily of GH97. PspAG97A showed significant reversibility against changes in salt concentration. It exhibited halophilic ability and improved thermostability in NaCl solution, with maximal activity at 1.0 M NaCl/KCl, and retained more than 80% activity at NaCl concentrations ranging from 0.8 to 2.0 M for over 50 h. Furthermore, PspAG97A hydrolyzed not only ${\alpha}-1,4-glucosidic$ linkage, but also ${\alpha}-1,6-$ and ${\alpha}-1,2-glucosidic$ linkages. Interestingly, PspAG97A possessed high catalytic efficiency for long-chain substrates with ${\alpha}-1,6-linkage$. These characteristics are clearly different from other known ${\alpha}-glucoside$ hydrolases in GH97, implying that PspAG97A is a unique ${\alpha}-glucoside$ hydrolase of GH97.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권1호
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• pp.1-7
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• 1989

Transformant TSD-14의 starch 발효능을 향상시키기 위해, 52$^{\circ}C$에서 60분간의 열처리로써 regeneration능을 제거한 TSD-14의 protoplast와 C, tropicalis RCT-40 (lys-)의 protoplast를 20 mM CaC1$_2$를 함유한 30% PEG를 fusogenlc agent로 하여 융합시키고 최소배지상에서 fusant를 선별한 결과 4.4$\times$$10^{-5}$ 빈도로 fusant를 얻었다. Fusant들의 탄소원 자화능을 조사한 결과 parental strains의 성질이 동시에 존재함을 알 수 있었으며 cell volume은 Parental Strains에 비해 약 1.5배정도 크게 나타났다. 또한 fusant는 유전적으로 매우 안정하였으며, parent인 TSD-14와는 달리 $\alpha$-1, 6-glucosidic linkage를 가수분해할 수 있었다. Fusant중 가장 우수 한 FSC-14-75 균주는 15%의 liquefied potato starch로부터 8.7%(v/v)의 ethanol을 생성하였고 또한 이때의 fermentation broth에 0.3%의 peptone을 첨가한 경우, ethanol 생성은 9.3%(v/v) 수준으로 증가하여 총당에 대해 86.0%의 발효율을 나타냈으며 산업적 이용가능성을 시사하였다.

• 한국식품영양학회지
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• 제10권3호
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• pp.370-374
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• 1997

시판 식혜에 Saccharomyces cerevisiae를 가해 29$^{\circ}C$에서 10일간 발효시켜서 식혜주를 제조하였다. TLC 및 HPLC 분석 결과 발효에 따라 수크로오스는 2일째부터 글루코오스와 프룩토오스로 가수분해되어 발효되었다. 수크로오스는 6일째에 완전히 없어지고, 8일째에는 글루코오스, 프룩토오스 모두 없어졌다. 에탄올은 6.6%를 나타냈다. 시판 식혜주의 아미노산 함량은 0.32$\mu$mol/ml, 단백질 함량은 226$\mu\textrm{g}$/ml을 나타냈다. pH는 3.21, 산도는 2.5ml를 나타냈다. 한계덱스트린은 1H-NMR로 분석 결과 시판 식혜와 구조상 차이가 없었다. $\alpha$-1,4- 결합에 대한 $\alpha$-1,6- 결합의 비율은 25:1을 나타냈다. 관능검사 결과, 맛은 와인과 비슷하였다.

• 한국식품영양학회지
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• 제10권3호
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• pp.360-364
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• 1997

멥쌀식혜에 Saccharomyces cerevisae를 가해 28$^{\circ}C$에서 10일간 발효시켜서 식혜주를 제조하였다. TLC 및 HPLC 분석 결과 발효에 따라 글루코오스는 하루, 말토오스는 4일, 말토트리오스는 6일까지만 존재하였다. 그러나, 분자량이 큰 말토올리고당과 한계덱스트린은 발효되지 않았다. 에탄올은 6.5%를 나타냈다. 식혜주의 아미노산 함량은 2.9$\mu$mol/ml, 단백질 함량은 457$\mu\textrm{g}$/ml를 나타냈다. pH는 3.67, 산도는 3.1ml를 나타냈다. 한계덱스트린은 1H-NMR로 분석 결과 식혜에 존재하는 것과 구조상 변화가 없었다. $\alpha$-1,4-결합에 대한 $\alpha$-1,6-결합의 비율도 5.6:1을 나타냈다. 관능검사 결과, 맛은 와인과 비슷하였다.

• 약학회지
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• 제32권1호
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• pp.86-94
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• 1988

Some rheological properties of subfractions for dextran in the molecular weights range from $3{\times}10^4$ to $2{\times}10^6$ was investigated at room temperature. The dependence of the viscosity on concentration, shear rate, pH & ionic strength, temperature and solvent effect was observed. From the experimental data the Mark-Houwink viscosity equation in water at $25^{\circ}C$ was determined for samples having the molecular weight ranging from $3{\times}10^4$ to $2{\times}10^6$ as$[{\eta}]=3.1{\times}10^{-3}\;Mw^{0.39}(in\;dl/g)$. The intrinsic stiffness of the dextran backbone was estimated by evaluating the 'characteristic ratio' $C_{\infty}$, which is below the 0.082. In the concentrated region, the viscosity was decreased with increasing shear rate and was exponentially decreased with raising temperature, the viscosity showed the maximum value at neutral condition. From the experimental data, it was concluded that dextran chain, linked by the ${\alpha}-1$, 6-glucosidic linkage, behaves like a flexible random coil chain in aqueous solution, dextran solutions were pseudoplastic power law fluids among the empirical models of non-Newtonian behavior. Urea was an active reagent which increases the viscosity and swells dextran while pyrididine and glycerol were inactive reagents. Also, it could be estimated that the formation of gel structure is promote to the neutral state, the molecular weight larger than $2{\times}10^5$, when electrolytic concentration is IN and Ureas is use to solvent.

• 한국식품영양학회지
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• 제10권4호
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• pp.453-457
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• 1997

한국산 호박과 일본산 호박을 주서로 갈아서 30분간 끓인 다음 착즙, 원심분리하여 당을 분석하였다. 한국산 호박의 수크로오스 함량은 0.41%, 프룩토오스는 0.54%, 글루코오스는 0.61%, 전분은 0.68%를 나타냈다. 일본산 호박은 수크로오스 2.60%, 프룩토오스 2.76%, 글루코오스 1.91%, 전분 1.22%를 나타냈다. 다른 소당은 검출되지 않았다. 일본산 호박 전분을 NMR로 분석한 결과 $\alpha$-1,4-글루코시드 결합만 나타냈으며, 요오드 반응의 흡광도는 아밀로오스(DP 117)의 86%를 나타내 아밀로오스만으로 구성된 것으로 나타났다. 카르바졸법으로 펙틴 함량을 분석한 결과 한국산 호박은 6.29%, 일본산 호박은 2.67%fmf 나타냈다.

• 한국균학회지
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• 제27권1호통권88호
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• pp.76-81
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• 1999

영지 균사체의 액체 배양에 의하여 생산된 세포의 다당시료 분획 중 우수한 항암활성을 나타내었던 산성분획인 BWS-DA-GI의 구조를 균사체 유래의 산성 다당 분획(MWS-DA-GI)과 비교하면서 조사하였다. BWS-DA-GI의 구성성분을 검토한 결과, 다량의 glucose, mannose 및 galactose와 미량의 xylose 및 fucose를 함유하였으며, glucose, galactose 및 mannose의 몰비는 2.5:2.1:2.5이었다. 반면, 균사체 유래의 산성 다당 분획인 MWS-DA-GI는 다량의 galactose, fucose, mannose 및 glucose와 미량의 xylose를 함유하였다. 또 BWS-DA-GI의 구조를 균사체 유래의 다당 분획인 MWS-DA-GI와 비교하면서 과요오드 산화, Smith분해, affinity chromatography 및 메칠화 분석으로 조사한 결과, 두 시료 모두 ${\beta}-1,3-glucan$이었고, BWS-DA-GI는 1,6분지를 보유하고 있는 반면, MWS-DA-GI는 1,4 및 1,6분지를 함께 보유하는 것으로 추정되었으며, 분자량은 각각 1,200,000 및 1,000,000 dalton이었다.