Phytase(myo-inositol hexakisphosphate phosphohydro-lase;EC 3.1.3.8)는 흰주 소장 점막으로 부터 분리${\cdot}$정제 하였다. 이 정제된 효소를 Sephacryl S-200 gel filtration방법으로 측정한 분자량으니 160kDa이고, 순도 및 이 효소의 서브유니트를 SDS-polycrylamide gel전기영동법(SDS-PAGE)으로 조사한 결과 서브유니트 구조는 분자량이 10kDa와 90kDa으로 구성된 hetrodimer(이종이량체)임을 알 수 있었다. 그리고 $ MgCl_{2}$ 존재 하에서는 효소 활성이 증가하나 $ZnCl_{2}$, $MnCl_{2}$, 및 EDTA존재 하에서는 효소 활성이 저해되었다. 기질 트이성과 pH범위에서 기질인 phytic acid(inositol-hexakispho-sphate)에 대해 높은 친화력을 보였다. Phytic acid에 대한 Km값은 pH 7.4에서 0.31mM이다. 따라서 흰쥐의 소장 점막 phytase는 주로 inositol의 대사계에서 중요한 역할을 하는 것으로 생각된다.
본 연구에서는 돈지육 및 돈육 조직 내에 열안정성 수용성 단백질의 존재 여부를 확인하고 항체 생산에 있어 항원으로의 사용 가능 여부를 확인하고자 하였다. 이를 위해 돈지육 및 돈육을 생(raw) 시료와 조리된(cooked) 시료로 구분하여 비열처리 및 열처리법으로 단백질을 추출한 후 단백질 존재여부를 단백질 정량과 SDS-PAGE로 확인하였다. 그 결과 돈지육과 돈육 모두 생 시료를 비열처리법으로 추출한 시료의 경우 25~100 kDa 사이의 다양한 단백질이 확인된 반면 시료를 가열하거나 추출 시 열처리를 한 경우 돈지육에는 100 kDa 이상의 단백질과 30 kDa 및 15 kDa 이하의 일부 단백질이, 돈육에는 100 kDa 이상과 30 kDa 이하의 단백질이 확인되어 돈지육과 돈육에 열안정성 수용성 단백질이 존재하는 것으로 확인되었다. 이들 열안정성 수용성 단백질을 마우스에 면역 후 항혈청 역가를 측정한 결과 면역한 모든 마우스에서 높은 역가를 나타내었고, 생산된 혈청은 돈지육과 돈육에 각각 특이적인 반응성을 보인 반면 다른 축육과 지방육에 대해서는 반응성이 상대적으로 낮았다. 이러한 연구결과를 볼 때 돈지육 및 돈육에 존재하는 열안정성 수용성 단백질이 돈지육과 돈육에 특이적으로 반응하는 항체를 개발하는데 유용한 마커로서 활용이 가능하며, 열안정성 수용성 단백질에 대한 항체개발은 열처리된 축육 가공품 중 돈지육 및 돈육의 분석에도 매우 유용하게 활용할 수 있을 것으로 판단된다.
이 논문에서는 디지털 필터의 저전력 구현을 위한 새로운 DA(Distributed Arithmetic) 필터 구조를 제안한다. 제안된 구조는 입력샘플 비트 포맷에서 수직 방향으로 연산하는 기존의 DA 구조와는 달리 입력샘플 비트를 수평 방향으로 연산하여 ROM이 필요 없으며 Modified booth 알고리즘의 작용이 가능한 저전력 필터 구조이다 이와 더불어 제안된 필터 구조는 ROM이 필요 없게 되므로 고정된 필터 계수용 필터 뿐 아니라 변하는 필터계수를 갖는 필터 구현에 적용이 가능하다. 제안된 DA 구조와 기존의 DA 구조를 사용하여 20 탭 필터를 Verilog-HDL을 사용하여 구현하였으며, Synopsis로 논리합성한 결과 기존 구조에 비하여 41.6%의 구현 면적 감소효과를 얻을 수 있었다.
폐흡충 성충 표피의 구성 단백질의 분자량을 측정하고. 항원성을 갖는 표피 단백질을 규명하였다. 10개월 성충을 0.1% digitonin용액에 담궈 표피하 기저 막까지 박리하여 회수한 표피층을 초음파 분쇄하여 표피 단백질을 추출하였다. 표피 단백 질 추출액을 SDS-PAGE와 immunoblot으로 분석하였다 폐흡충 표피의 구성 단백질은 분자량이 각각 94. 74 (76-66). 62. 54. 44. 42. 38, 28, 26, 25 24. 17. 15.5. 13.5 IEDa으로 측정되었고. 94 kDa 단백질이 가장 주된 표피단백질이었다. 폐흡충 감염자 혈청을 사용한 immunoblot에서 항원성이 확인된 표피단백질의 분자량은 각각 94. 90. 78. 76. 74. 68. 65. 62. 60, 59. 54 kDa 이었다. 이 표피항원 단백질은 폐흡충증 혈청 10개중 7개에서 immunoblot 양성반응을 나타내었고. 7개 양성반응 혈청 각각에서 표피항원 단백질의 특이 항원성이 모두 관찰되었다. 그러나. 이들 폐홉충 표피항원은 간흡충란 양성자혈청과는 전혀 반응하지 않았다. 이상의 결과로. 폐흡충 표피 단백질중에서 분자량 94-54 kDa 사이의 것들이 폐흡충 특이 항원임을 알 수 있었고. 특히 94 kDa 단백질은 가장 양이 많은 대표적인 표피단백질이면서 아울러 특이항원성도 갖고 있었고. 양이 적은 표피단백질이었던 76. 66 kDa 단백질도 상대적으로 높은 특이 항원성을 보여주고 있음을 확인할 수 있었다.
스파르가눔증의 항체검사에서 항원으로 사용하는 스파르가눔 충체추출액의 구성 단백질 중, 환자혈청과 반응 시켜 관찰한 바, 분자량 36 및 31 kDa인 단백질이 항원성이 높았다. 또한 이 두가지 단백질은 스파르가눔 충체의 표피와 표피세포에 분포하여 충체 외부로 분비되는 항원일 것으로 추정하였다. 이 연구단보에서는 이들 두가지 단백질이 분비배설항원에 나타남을 증명하고자 스파르가눔을 $4^{\circ}C{\;}및{\;}37^{\circ}C$ 생리식염수에 30분~100시간 동안 배양하여 분비배설항원을 만들고, 분비배설항원내 단백질 분비량, 단백질의 조성 미치 단백질분해효소의 활성을 각각 관찰하였다. 충체 g당 분비배설항원의 단백질량은 관찰 범위안에서 배양온도에 관계없이 평균 7.7 mg이었다. SDS-폴리아크릴아미드 젤 전기영동상 분비배설항원의 단백질 구성은 분자량 66 kDa 이상인 단백질에서 차이가 있을 뿐 충체추출액의 것과 거의 유사하였다. 물론 분자량 36 및 31 kDa인 단백질도 분비배설항원의 주 구성성분이었다. 분비배설항원의 단백질분해효소 비활성도(比活性度)는 2.9~5.3 units/mg으로 충체추출액의 것과 차이가 없었다. 이미 보고된 스파르가눔의 cysteine protease가 체외로 분비되는 효소라는 것이 사실이라고 추정하게 하는 결과로 생각하였다.
Antigenic components in the crude extracts of Spirometra mansoni plerocercoid were analyzed in early experimental infections and in IgG subclass observed in clinical sparganosis. By IgG immunoblot, sera obtained serially from experimental mice, fed 5 spargana each, were reacted with the crude extracts. Protein bands at 36-26 kDa and 103 kDa showed positive reactions since two weeks after infection. In a differential immunoblot, in which a monospecific antibody against sparganum chymase at 36 kDa was pre-treated, the reactions at 36-26 kDa disappeared, indicating that the sparganum chymase and its degradation products invoked IgG antibody reactions. When 69 patients sera of human sparganosis were examined for their IgG subclass responses, IgG4 levels showed the highest reaction which was followed by IgG 1 The IgG4 antibody also reacted mainly with 36-31 kDa protease. These results indicate that 36 kDa chymase of 5. nansoni plerocercoid is the main antigenic component inducing Ige antibody response in early stage of experimental sparganosis and for specific IgG subclass reactions in human sparganosis.
To classify Glycyrrhiza species, samples of different species were analyzed by $^1H$ NMR-based metabolomics technique. Partial least squares discriminant analysis (PLS-DA) was used as the multivariate statistical analysis of the 1H NMR data sets. There was a clear separation between various Glycyrrhiza species in the PLS-DA derived score plots. The PLS-DA model was validated, and the key metabolites contributing to the separation in the score plots of various Glycyrrhiza species were lactic acid, alanine, arginine, proline, malic acid, asparagine, choline, glycine, glucose, sucrose, 4-hydroxy-phenylacetic acid, and formic acid. The compounds present at relatively high levels were glucose, and 4-hydroxyphenylacetic acid in G. glabra; lactic acid, alanine, and proline in G. inflata; and arginine, malic acid, and sucrose in G. uralensis. This is the first study to perform the global metabolomic profiling and differentiation of Glycyrrhiza species using $^1H$ NMR and multivariate statistical analysis.
Dopamine (DA) acts on swimming motor neurons (SMNs) of Polyorchis penicillatus as an inhibitory neurotransmitter by hyperpolarizing their membrane potentials, which results from the activation of voltagesensitive potassium channels mediated through a $D_2-type$ receptor. In addition, DA, and not the hyperpolarized membrane potential, directly decreased the input resistance of SMNs by ca. 50% from 1.42 to 0.68 $G{\Omega}$. It strongly indicates that DA can shunt other excitatory synaptic signals onto SMNs where DA usually elicited much greater responses in their neurites than soma. All these evidences suggest that DA may operate in this primitive nervous system in dual modes as an inhibitory neurotransmitter and neuromodulator as well.
밀원을 달리한 다양한 꿀의 특성을 조사하기 위하여 아카시아꿀 7개, 잡화꿀 9개, 밤꿀 5개, 토종꿀 5개의 시료를 이용하여, 회분 함량, 무기물 조성과 HMF(hydroxy methyl furfural)함량 및 꿀 단백질의 SDS-PAGE에 의한 단백질 분자량을 조사한 결과는 다음과 같다. 회분 함량은 아카시아꿀이 0.046-0.119%이었으며, 밤꿀은 0.565-1.318%, 잡화꿀 0.06-0.582%, 토종꿀 0.237-0.893% 이었다. 무기물 분석에서 K함량은 밤꿀>토종꿀>잡화꿀>아카시아꿀 순으로 높았으며, Ca함량은 아카시아꿀과 잡화꿀에서 가장 높았다. 아카시아꿀의 Na/K ratio는 0.92-1.97, 밤꿀은 0.02-1.59, 잡화꿀은 0.02-5.30, 토종꿀은 0.22-0.51이었다. 또한 HMF 함량은 밀원의 종류에 관계없이 다양하게 나타나, 아카시아꿀이 9.60-12.85 mg/kg, 밤꿀은 10.15-25.75 mg/kg, 토종꿀은 9.7-33.5 mg/kg, 잡화꿀은 6.25-21.5 mg/kg 이었으며, 토종꿀에서 가장 높았다. SDS-PAGE에 의한 단백질 band의 분자량 분석에서 양봉꿀의 특이적인 59 kDa 단백질이 모든 시료에서 나타났다. 밤꿀과 토종꿀에서 양봉꿀의 특이성을 나타내는 59.0 kDa의 단백질 band 이외에 31.9-33.5 kDa 단백질의 존재가 확인되었다. 72 kDa의 단백질 band도 몇 종의 밤꿀(71.8, 71.9 kDa)에서 확인되었다.
현재 라임병을 진단을 위해 국내에서 이루어지고 있는 연구 방법은 원인균인 B. burgdoferi 항원에 대한 항체를 검출하는 혈청학적인 방법이다. 하지만 대부분의 경우 항원으로 사용되는 균주가 다른 나라에서 분양받은 균주이므로 이때 얻어진 결과를 유추 해석하는데 어려움이 수반되고 있다. 본 실험에서는 국내 분리균주에 대한 항체를 검출하는 조건을 확립하고, 이를 토대로 하여 불명열 환자의 항체가 항원에 반응하는 양상을 파악함으로써 국내 분리균주를 이용한 혈청학적인 분석방법으로 국내 라임병 진단에 보다 적합한 조건을 제시하고자 하였다. 본 실험 결과 병원에 의뢰된 불명열 환자의 혈청이 B. burgdoferi sensu lato 중 3가지 균종의 항원에 대해 평균 약 8% 정도의 양성 반응을 보이는 것으로 미루어 볼 때 이 들 중 B. burgdorferi에 의한 열성 질환 감염증이 존재할 것으로 사료된다. 특히 국내 분리균주 중 가장 많이 분리된 바 있는 B. afzelii에 대한 양성반응이 14.3%나 나타난 것으로 미루어 아직 밝혀지지 않은 국내 발생 라임병의 원인균은 주로 B. afzelii일 가능성이 가장 크다고 할 수 있을 것이다. 또한 효소결합면역 측정법 (ELISA)을 이용하여 양성으로 판별된 혈청에 대해 immunoblotting법을 실시한 결과 주로 41kDa (ftagellin), 27kDa, 31kDa (OspA), 34kDa (OspB)에서 band가 나타났다. 본 실험의 결과 국내 열성질환 환자들 중 라임병균에 의한 감염증이 있을 것으로 사료되므로 국내 분리균주를 항원으로 사용한 효소결합면역 측정법 (ELISA), immunoblotting법과 같은 혈청 학적 진단이 이루어져야 한다고 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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