The aim of the present study was to investigate the ovulation rate and its relationship to fertilization ability in Landrace, Durock and Crossbred pigs. Gilts were natural mated at a body weight of at least 120 kg under the same hormone treatment. Embryos were surgically collected 1 day after natural mating (Day 0). Embryos derived from in vivo-fertilized oocytes were cultured in medium PZM-3. The ovaries were examined and the pathological findings were recorded. The number of corpus hemorrhagicum was counted, and was assumed to equal the ovulation rate. There was no difference in the number of corpus hemorrhagicum (20.4, 28.8 and 23.2) and ovulation (13.5, 26.8 and 17.2) in the Landrace, Durock and Crossbred pigs. The two pronucleus formation was 76.0, 80.0 and 86.9%. The Day-7 embryos had blastocyst rates of 68.0, 75.0 and 73.9%. There was no difference in the number of total cells and apoptotic cells. In the future, more studies require determining relationships between ovulation and fertilization rate in different species of pigs.
In the last few years, methods for in vitro culture of early embryo stages from oocytes matured and fertilized in vitro using suitable cell culture systems have been established. But the factors affecting pregnancy rates following transfer of bovine embryos produced in vitro were not evaluated enough. So this study was performed to investigate the effects of quality and stage of embryos, parity and Corpus Luteum quality of recipients on pregnancy rates following non-surgical transfer of bovine embryos produced in vitro. Oocytes aspirated from small antral follicles of ovaries obtained at a local slaughter house were matured, fertilized with frozen-thawed semen and co-cultured for 6-7 days by utilizing co-culture system with bovine oviduct epithelial cell in vitro. After co-culture, embryos were transfered to recipients on day 7 (estrus=day 0). Recipients were monitored by ultrasonic scanning method or observation for estrus and rectal palpation after 50 days from transfer. The results of this study are follows. 1. Of the 70 recipients, 70%(49 of 70) had not showed estrus sign between day 0 and day 50, but 22.9%(16 of 70) was diagnosed not pregnant. Therefore the overall pregnancy rate of this study was 47.1%(33 of 70). 2. The pregnancy rate of recipients transfered with excellent(66.7%) and good(54.5%) embryos were higher than that of recipients transfered with fair embryos(15.8%) (p<0.05). 3. The pregnancy rate of recipients transfered with morula, compacted morula, blastocyst and expanded blastocysts were 46.2, 55.0, 62.5 and 50.0%, respectively. 4. The pregnancy rates of recipients transfered to heifer and cow were 54.5 and 55.2%, respectively. 5. The pregnancy rates of recipients with CL score I, II(66.7, 63.6%) were higher than those of recipients with CL score III (10%), (p<0.05). Success of transfer of embryos produced in vitro depends on many variables. The important factors identified in this study were the quality of embryos and the CL score of recipient animals after non-surgical transfer of embryos matured, fertilized and cultured in vitro.
본 연구는 체내, 체외 및 복제를 통하여 각각 생산된 배반포를 이식하여, 수란우의 수태율, 임신기간 및 유산율과 더불어 송아지의 생시 체중과 이후 생존율을 조사하였다. 그 결과, 수태 을은 체내수정란이 56.3%로서 복제 수정란의 19.4%에 비하여 유의하게 높았으나 (p<0.05), 체외수정란의 30.0%와는 유의성이 인정되지 않았다 유산율과 임신기간은 처리군 간에 유사한 경향이었다(유산을 0, 22.2 및 16.7%; 임신기간 278.8, 289.4 및 281.4일). 한편 송아지의 체중은 복제수정란에서 유래된 송아지의 평균 39.9kg은 체내수정란에서 유래된 송아지의 평균 25.5kg에 비하여 유의하게 높았다.(p<0.05). 체내수정란이 수태된 수란우(n=9)는 모두 정상 분만하였으며, 그 송아지 는 생후 60일령까지 모두 생존하였다. 한편 체외수정란이 수태된 수란우(n=7)도 모두 정상 분만하였으나, 그 송아지 가운데 1두는 생후 48일에 사망하였다. 복제 수정란이 수태된 수란우(n=5)는 정상 분만 3두 및 제왕절개 2두를 하였다. 정상 분만된 복제송아지(n=3) 중에서 2두는 분만 직후 사망하였으나, 제왕절개로 태어난 송아지는 생후 60일까지 모두 생존하였다.
30마리의 암양에게 surgical embryo collection과정을 통해 oviduct와 uterine horn에 trauma를 생성시켰다. 수술시 절개부위를 봉합하기 직전 노출된 abdominal tissue에 irrigigant로 10% dexamethasone을 사용하였다. 처리군에게는 17mg의 colchicine(1ml/ewe)를 투여했으며, 대조군에게는 1.0ml의 placebo를 처리하였다. 처음 17mg/im의 colchicine를 처리한 15마리 양은 colchicine독성증세를 2∼5일 내에 보였기 때문에 본 연구에서 제외되었다. 17mg에서의 colchicine독성 때문에 colchicine수준은 8, 4 그리고 2mg으로 낮추어졌다. 8mg group에 있던 또 하나의 양은 5일째에 독성증세를 보였기 때문에 나머지 양들은 4와 2mg의 수준으로 이틀에 한번씩 처리되었다. 두 번째 laparotomy는 첫 번째 처리로부터 9주후에 실시되었다. 두 번째 laparotomy후 처리군은 4mg의 colchicine을 이틀에 한번씩 14일 동안 처리되었는데 아무런 독성증세를 나타내지 않았다. 세 번째 laparotomy는 마지막 처리 5주후에 실시되었고 adhesion score로 계산하였다. Adhesion grading은 0∼4의 분포에 근거하여, 4는 가장 심한 adhesion을 나타낸다. 두 번째 laparotomy 결과 adhesion grading( 3)은 두 group 사이에 큰 차리가 없었다(P>0.05). 세 번째 laparotomy결과는 처리군에서 약간 낮은 수치를 보였지만, 통계적으로 두 grouprks에는 큰 차이는 없었다(P>0.05). 10마리의 양(5마리는 대조구, 5마리는 처리구)들은 처리후 5일경에 bone marrow analysis를 통해 cytogenetically분석되었다. 두 grouprks 염색체수와 구조에 있어서 차이가 없었다(p>0.05).
본 연구는 고능력 유우 공란우의 이용 효율을 극대화하기 위하여 체내 수정란 생산을 위한 다배란 처리의 결과에 미치는 요인을 분석하여 안정적이고 효율적인 다배란 처리 방법을 제시하기 위한 목적으로 실시하였다. 공란우의 다배란 처리는 발정 주기 $10{\sim}13$일째 POLLTROPIN-V(Vetrepharm, Canada) 400mg NIH-FSH-P를 4일간 12시간 간격으로 감량법에 따라서 주사를 하였다. 호르몬 주사 6, 7회 째 황체 융해 및 발정 유도를 위하여 $PGF_2{\alpha}$(Estron, Czech Republic)를 근육 주사하였으며, 승가 허용 발정을 보인 공란우는 발정으로부터 12h, 24h에 2회 인공수정을 실시하였다. 수정란 회수는 발정으로부터 7.5일에 실시하여 전체 회수 수정란 중에서 이식가능 수정란을 구별하였다. 실험의 결과를 요약하면 다음과 같다. 1 유생 산량에 따른 회수 수정란 수와 이식 가능 수정란 수는 각 군간의 유의적인 차이는 없었다(p>0.05). 2. 분만 후 경과 일수에 따른 회수 수정란 수와 이식 가능 수정란 수는 분만 후 $61{\sim}90$일이나 $121{\sim}150$일 사이에 채란을 실시한 경우가 분만 후 $91{\sim}120$일 혹은 151일 이상에서 채란한 경우보다 낮았으나 군간의 유의적인 차이는 없었다(p>0.05). 3. 계절에 따른 회수 수정란 수와 이식 가능 수정란 수는 다른 계절과 비교하여 여름철에 가장 낮았으나 계절에 따른 유의적인 차이는 없었다(p>0.05). 이상의 결과로 보아 고능력 유우 공란우를 다배란 처리 할 때는 유생산량이나 분만 후 경과 일수 혹은 계절에 관계없이 채란을 실시할 수 있는 것으로 판단된다.
During the ovary preservation in low temperature, the cumulus oocyte complexes(COCs) lose their developmental competences after in vitro fertilization. We used phosphate-buffered saline (PBS) as a basic solutions of at various temperatures (25, 15 or $5^{\circ}C$) and supplemented them with 1mM glucose and 0.5mM glutamine as a source of carbohydrate metabolites. After recovery of COCs and in vitro fertilization, a significantly higher number of oocytes developed into blastocysts. The developmental competence of embryos that were originated from ovaries preserved at $15^{\circ}C$ was increased compared to those of 25 or $5^{\circ}C$. The maturation rate of oocytes was not differed between 24 and 36 h at $15^{\circ}C$ but showed lower than control group (71% versus 78%). In vitro-fertilized oocytes from ovaries stored at $25^{\circ}C$ for 24 h or at $5^{\circ}C$ for 24 h had a significantly decreased developmental potentials, but at $15^{\circ}C$ did not (27% versus 29% of blastocysts to develop into day 8). With these results, bovine ovaries can be preserved at $15^{\circ}C$ for 36 h without decreasing developmental capacity of in vitro-fertilized oocyte at least to the blastocyst stage. This information provides valuable information of preserving ovaries for embryo transfer or in vitro embryo production.
To enhance the embryo preservation technology and better application of embryo transfer technique to the field (dairy science or animal reproduction. etc.), we examined the viabilities of bovine embryos produced in vitro and in vivo after cryopreservation according to their developmental stage and thawing temperature. Bovine embryos from in vivo/vitro fertilization (Hanwoo) were examined at day 7, 8, and 9. Survival rates and total cell numbers of in vivo fertilized embryos were as follows: morulae 68.8% and $67\;{\pm}\;6.0$; blastocysts 80.5% and $120\;{\pm}\;10$; expanded blastocysts 77.4% and $138\;{\pm}\;9.7$, respectively. Rates of embryo development for blastocysts and expanded blastocysts after thawing were significantly higher than that of morula stage embryos (p<0.05). While survival rates of in vitro fertilized embryos according to developmental stage showed no significant difference among groups (morula 67.9%; blastocyst 74.3%; and expanded blastocyst 79.4%), total cell numbers were significantly lower than those of other groups (morula $64\;{\pm}\;5.9$; blastocyst $116\;{\pm}\;8.7$; and expanded blastocyst $135\;{\pm}\;9.1$) For the viability according to thawing temperature, survival rate was higher in $37^{\circ}C$.
This study was carried out to increase the viability of bovine frozen4hawed in vitro produced (IVP) embryos and pregnancy rate by direct transfer method. Cumulus-oocyte complexes were aspirated from excised Hanwoo ovaries and matured in TGM 199 for 20~22 hours at 38.5$^{\circ}C$ in 2% $CO_2$ in air. Matured oocytes were fertilized with capacitated sperm for 6 hours and then co-cultured with cumulus cells for 9 days. 63% of the oocytes cultured was deaved and 29% out of them developed into blastocysts. Good or excellent grade of blastocysts on D 7 or 8 were frozen with 1.8M ethylene glycol as a cryoprotectant for direct transfer. Frozen embryos were thawed at 2$0^{\circ}C$ water for 10 sec following 4~5 second in air. For the survival assay of frozen4hawed lVP blastocysts, they were cultured in TCM 199 supplemented with 100$\mu$M $\beta$-mercaptoethanol and 20% FCS for 72 hours. The percentage of embryos developed to re-expanded or hatched after 72 hours culture was 95. 5 and 77.3%, respectively. When frozen-thawed Ivp embryos were transferred to 43 synchronized recipients by direct transfer method, eighteen recipients (41.8%) was pregnant. The highest pregnant was in naturafly synchronized recipients (71.4%), but induced estrus by using PRID(29.2%) and PGF$_2$$\alpha$(20.0%) was showed lower pregnancy rate. The pregnancy rate was higher in day 7 blastocysts(56.0%) than day 8 blastocysts(22.2%). (Key words: in vitro produced, blastocyst, frozen-thawed, direct transfer)
This study was performed in order to simplify the operation and minimize stress of donor and be readily available in the field with low cost and high quality embryos using the Direct Embryo Collection (DEC). Donors, at random stages of the estrous cycle, received a CIDR. 7 days later, 200 mg FSH was treated with 40, 30, 20, 10 mg FSH levels in declining doses twice daily by intramuscular injection for 4 days. On the 3rd day administration of FSH, 25 mg $PGF_2{\alpha}$ was administered and CIDR was withdrawn. After FSH injections were complete, donors were artificially inseminated twice at 12 hr intervals. The donor cattle received 250 ${\mu}g$ GnRH at time of 1 st insemination and embryos were recovered 8 days after the 1st insemination. Embryo collection from superovulated donors was performed to flushing by non-surgical methods of 3-way, 2-way and DEC (l-way). The average number of recovered embryos were 11.25${\pm}$0.63, 12.5${\pm}$0.65 and 11.75${\pm}$0.48 from operations of 3-way, 2-way and DEC methods, respectively. There were no significant differences among the embryo collection methods. Also, The average number of transferable embryos were 6.25${\pm}$0.48, 7.25${\pm}$0.48 and 7.25${\pm}$0.63 from each embryo collection procedures. The number of transferable embryos was no differences among the 3-way, 2-way and DEC methods, respectively. Meanwhile, the ratio of transferable embryos for all recovered embryos from DEC methods was higher as 61.7 % than 55.6 %, 58 % from methods of 3-way, 2-way. And the flushing solution required for recovering embryos by DEC method was significantly lower as 0.28${\pm}$0.32 1 than 1.8${\pm}$0.12 1, 1.75${\pm}$0.10 1 from 3-way, 2-way methods (p<0.05). Also, the time required for recovering embryos by DEC methods was significantly lower as 27${\pm}$2 min than 51${\pm}$3, 45${\pm}$2 min, respectively (p<0.05). In conclusion, these results suggest that DEC method for embryo collection may be effectively used for production of in vivo embryos using less flushing solution and, it might be effectively available in the field compared to conventional embryo recovery methods using 3-way or 2-way balloon catheter.
Wholesale beef price is the critical factor for determining Korean native cattle, Hanwoo, farm's income in short-term. Wholesale beef price has seasonality due to high demand in Korean traditional holidays such as Korean thanksgiving day and lunar new year's day. Therefore, it is important to make reproduction and marketing plans for Korean Hanwoo farmers, in order to increase their farm income. However, there is no study available on changes in the expected farm income depending on reproduction and marketing schedules. This study analyzed the expected farm income per head depending on the monthly-based marketing schedules. The analysis was conducted based on the seasonality of wholesale beef price, reproduction efficiency, operating costs, relationship between carcass grade and slaughter age. The result shows that slaughter Hanwoo at the age of 29 months-old in August and January generating the highest expected farm income per head.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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