Hyoscyamus species is sources of the hypnotic and sedative drugs hyoscyamine and scopolamine. Single cells of Hyoscyamus niger were dissociated from suspension cultures and adventitious roots obtained from single-cell clones which were cultured on B5 medium containing 3% (w/v) sucrose, 0.1 mg/L IBA and 0.4% (w/v) gelrite. H. niger adventitious root lines showed wide variation in tropane alkaloids production and growth. An effective selection of 200 root lines was made possible by the application of the 'Dragendorff's reagent' for qualitative detection of the alkaloids from root. A high correlation coefficient (r=0.9390) was observed between the values obtained with the two methods based on HPLC and Dragendorff's reagent analysis. Among the selected roots, the highest scopolamine content was 16.64 mg/g DW (Hn-59), which was 8.82-fold more productive than the lowest alkaloid producing line (Hn-25). Here, we established an efficient selection method on tropane alkaloids production and suggest that the Dragendorff's reagent is of great practical value in selection of invisible compounds.
Sikhae is a Korean traditional beverage of saccharified rice. Its factory waste(SFW) is usually thrown away instead of being used. We developed a cheap substrate of SFW for use in liquid spawn that is known for its higher fruit body yields than grain spawn in sawdust cultivation. Mycelia of Lentinula edodes ASI 3046, which is regarded as the most suitable strain for sawdust cultivation, were cultured on six kinds of previous known media and SFW. As the seven kinds of media were applied, a Sikhae Factory Waste(SFW) was most excellent in growth. The dried mycelial weight in SFW was almost four times as much as that in the other media. In the flask culture, optimum culture conditions for the mycelial growth were obtained after 13 days of cultivation at media volume of 100 ml, 100 rpm, initial pH 4.5, and $25^{\circ}C$. The best mycelial growth was observed when $MgSO_4{\cdot}7H_2O$ and D-sucrose were added as a supplement in SFW. SWM must be a remarkable medium for L. edodes because of its simple preparation and low cost.
The optimal conditions for mycelial growth of P. linteus ASI 26011 were 25-30$^{\circ}C$ and pH 6.0, respectively. The mycelial growth of P. linteus was excellent on MCM medium. In case of carbon sources, the mycelial growth of P. linteus was best on the culture media that were contained with sucrose, mannose and glucose. Potassium nitrate and sodium nitrate were good for the mycelial growth of P. linteus as a nitrogen source. For comparison of the mycelial colonization of P. linteus on logs, several techniques of inoculation were tested; the sterilized short log inoculation, drilling inoculation and log-end sandwich inoculation. The mycelial colonization of P. linteus on logs was good in the treatment of sterilized short log inoculation, but poor in the traditional methods such as drilling inoculation and log-end sandwich. The initial mycelial growth and the full mycelial colonization of P. linteus were the best on 20 cm logs under the condition of 42% of moisture content in log. Also the initial mycelial growth of P. linteus was accelerated over 12 hours of sterilization. Burying method of logs after 5-6 months of incubation was the best for formation of basidiocarp of P. linteus. The formation of fruiting body of P. linteus was quite good in the cultivation house at the 31-35$^{\circ}C$ and over 96% of relative humidity.
The present experiments were focussed to modify a short slow-cooling protocol used for freezing of early stage embryo(Testart et al., 1986) and also to apply the modified method for the cryopreservation of hamster oocytes with Zona or without. The protocol was modified by changing the 4-step equilibration into 1-step and the 1-step thawing into 2-step. The oocytes were added in 1.5M PROH and 0.1M Sucrose, seeded at $-7^{\circ}C$, slow cooled($0.3^{\circ}C$/min) to $-30^{\circ}C$ before plunging to $-196^{\circ}C$. The oocytes were thawed at $23-25^{\circ}C$ air(20sec/150sec) and/or 33-35 water(10sec). The survival of the frozen-thawed oocytes was determined by morphologic criteria and their fertilizing ability was also estimated by Sperm Penetration Assay(SPA) system(Chang et al, 1990) using fertile men semen sample. One-step equilibration showed slightly higher survival rate(83.9% vs. 71.0%) and fertilization rate(83.9% vs. 71.0%) compared with four-step(p>0.05). And two-step thawing(air & water exposing) of oocytes frozen after 1-step equilibration showed significantly higher survival rate(96.3%) than one-step thawing at air(85.2%) or water(65.0%) only(p<0.05). Therefore, by the modified method(l-step equilibration & 2-step thawing), Zona-intact(ZI) and Zona-free(ZF) oocytes were frozen and thawed. ZI-oocytes showed significantly higher survival rate(95.4%, 308/323 vs. 67.6%, 240/355) than ZF-oocytes(P<0.01). But the survival of ZF-oocytes was as high as ZI-oocytes in fourteen of twenty-four replicates. ZI-oocytes was also significantly higher fertilization rate($92.4{\pm}8.9%$ vs. $63.7{\pm}18.5%$) and higher mean number of penetrated sperm($6.2{\pm}4.2$ vs. $3.9{\\pm}3.3$) than ZF-oocytes, but not higher than control(fresh oocytes;$99.3{\pm}2.4%$, $8.4{\pm}4.2$)(P<0.001). Conclusively, this modified method will contribute to freeze effectively the hamster oocytes for simplifing of the logical consideration of performing SPA and also to freeze the human and other animal oocytes.
고추의 나출 소포자로부터 배를 유기하는데 최적인 조건을 확립하기 위하여 micro-blender를 사용하여 소포자들을 나출한 후 NLN 배지에 배양하였으며 $32^{\circ}C$의 고온처리 기간, 전처리 배지내 2-hydroxynicotinic acid의 첨가, 그리고 약과 소포자의 공동전처리가 소포자배의 발생에 미치는 영향을 조사하였다. 나출 소포자들을 기아배지에서 고온처리 한 후 NLN 배지에 배양하였을 때 다수의 배가 발생하였다. 배양 3주 후부터 구형 및 어뢰형배가 관찰되었는데 이때 배의 발생은 비동조적으로 일어났다. 배양4주가 되면 구형과 어뢰형배 이외에 자엽배들이 발생하였다. 발생한 배들 중자엽배늘은 $2\%$ sucrose가 첨가되고 생장조절물질은 첨가되지 않은 B5 고체배지로 옮겼을 때 정상인 유식물들로 발달하였다. 고온처리 기간이 $1\~2$일로 짧은 경우 소포자배의 발생은 높았으나 대부분이 발달초기의 구형 또는 심장형배이었으며 자엽배의 발생은 매우 드물었다. 고온처리 3일 이상에서는 배의 발생은 크게 감소하였으나 자엽배가 다수 발생하였다. Inducer chemical로 알려진 2-hydroxynicotinic acid를 약전처리배지에 첨가하였을 때 배의 발생은 다소 높았으나 발달은 오히려 억제되어 대부분이 구형 또는 심장형이었다. 소포자 전처리시 약을 첨가한 경우 배의 발생이나 발달 모두 억제되었다. 본 연구결과 고추의 나출 소포자로부터 다수의 배를 획득하였고 식물체를 재분화 시키는데 처음으로 성공하였다. 이와 같은 소포자 배양시스템은 앞으로 더 많은 배를 생산할 수 있는 배양조건이 확립되어야 하지만 homozygous한 배가 반수체의 생산 뿐만아니라 형질 전환과 열성 또는 우성의 돌연변이체 선발에 매우 유용하게 이용될 수 있을 것이다. 비해 $ 0.27\~0.79\;\cal{mg/g}$ F.W.가 높았으며 환기횟수 $0.1 h^{-1}$ 처리구는 광도의 증가에 따른 효과가 나타나지 않았으나 환기횟수 $0.1 h^{-1}$ 처리구는 높은 광도에서 감소하였다. 환기횟수 $4.9 h^{-1}$는 $0.1 h^{-1}$에 비해 잎의 공변세포가 크고 주변 부세포가 잘 발달되어 있었다. 특히 PPF $99\;{\mu}mol\;m^{-2}s^{-1}$에서 환기횟수 $0.1 h^{-1}$는 부세포의 발달이 미흡하고 기공이 많이 열려 있는 상태인 반면 환기횟수 $4.9 h^{-1}$는 부세포가 잘 발달된 잎을 지니고 있었다.:PR30, KB50:PR50, PR100:KB0 처리구의 $1m^2$ 당 개체 수는 각각 16,600개, 6,700개, 4,900개, 3,300개, 12,400개였으며 총직립경 수는 각각 33,200개, 22,800개, 18,000개, 15,000개, 62,000개였다. 개체 수는 KB100:PR0처리구가 가장 높았고, 다음은 PR100:KB0처리구였으며 혼합처리구의 경우는 Kentucky bluegrass 혼합비 율이 높을수록 높았다. 총직립경 수는 PR100:KB0 처리구가 KB100:PR0 처리구보다 오히려 높았으며 혼합 처리구의 경우는 개체수와 비슷한 경향을 보였다. 혼합처리구의 경우 초종별 개체수의 비율은 KB80:PR20는 87:13, KB70:PR30는 78:22, KB50:PR50은 48:52의 비율로 나타났다. 조성시기의 기상과 피복율과의 상관관계 2001년 가을과 2002년 봄의 일일평균기온을 비교하여 보면 가을(9월, 10월, 11월) 3개월간의 일일평균기온은
Rhizobium jaonicum S118로부터 변이주(變異株)를 선발(選拔)하고 생리적(生理的)인 특성(特性) 및 식물체(植物體)와의 상호관계(相互關係)등을 조사(調査)한 결과(結果)는 아래와 같다. N. T. G를 처리(處理)한 S118로부터 근류(根瘤)를 형성(形成)하지 않는 SM255, 근류착생(根瘤着生)이 아주 좋고 acetylene환원력(還元力)도 높은 HP277, 근류착생(根瘤着生)이 S118보다 떨어진 LP268 그리고 근류(根瘤)가 아주 드물게 형성(形成)되는 SM303을 선별(選別)하였다. SM255를 접종(接種)한 식물체(植物體)는 생육(生育)이 저조(低調)하였고, 뿌리털의 curling 현상(現象)도 관찰(觀察)되지 않았다. 반면 HP277은 SM255와 서로 다른 결과(結果)를 나타내었다. Litmus milk 반응(反應)에서 HP277이 alkali성(性), serume zone을 형성(形成)하였고, congo red를 약(弱)하게 흡수(吸收)하였다. YEM배지(培地)에서 SM255는 생육(生育)이 S118과 비슷한 slow-growing형(型)이지만 HP277은 fast-growing형(型)이었다. 질산(窒酸) 및 아질산(亞窒酸) 환원(還元)은 LP268이 음성(陰性), 음성(陰性), SM255는 양성(陽性), 양성(陽性), 그 외(外) 균주(菌株)는 양성(陽性), 음성(陰性)으로 나타났다. SM255는 무기태(無機態)와 유기태(有機態) 질소원(窒素源)의 영향(影響)을 받아 생육(生育)이 저조(低調)하였다. 그러나 HP277은 $Ca(NO_3)_2{\cdot}4H_2O$의 10mM, 25mM 농도(濃度)에서 생육(生育)이 가능하였고, 유기태(有機態) 질소원(窒素源)의 이용(利用)이 높은 것으로 나타났다. 모든 균주(菌株)가 starch를 이용(利用)하지 못하였고 arabinose의 경우 SM255와 SM303은 타균주(他菌株)에 비해 이용성(利用性)이 낮음을 알 수 있었다. 그러나 sucrose는 모든 균주(菌株)가 이용(利用)할 수 있었다. HP277과 S118은 균체(菌體) 단백질(蛋白質)의 조성(組成)에 차이(差異)가 없었고, SM255는 Rm 0.62의 band가 결여(缺如)되어 있었다.
Background: In northern Thailand, the longan flower is the principal nectar source for honey production. Microorganisms play a critical function in the agricultural ecology. The morphological characteristics of fungal species found in longan pollen were studied. Aspergillus spp. were found to be invertase-producing strains and were employed in the longan syrup production process. The purpose of this study was to evaluate the effects of invertase-added longan syrup on the adult honey bee population numbers that were fed by this syrup for 16 weeks. Results: Different fungal species were found in longan pollen samples. Aspergillus was the main genus, with three predominant sections: Nigri, Flavi, and Terrei. Other isolated species were Trichoderma spp., Rhizopus spp., Neurospora spp., Chaetomium spp., Fusarium spp. and Penicillium spp. However, Aspergillus spp. is the only fungal species that produces the enzyme invertase. The invertase-producing strains belonging to the Aspergillus section Nigri were found to be A. niger LP5 with an optimum activity at pH 6.0 and 60℃. When A. niger LP5 invertase was used for longan syrup processing, the highest levels of glucose (3.45%) and fructose (2.08%) were found in invertase added longan syrup (C), while fresh (A) and boiled longan syrup (B) had lower contents of both sugars. The sucrose content was detected in (A) at 4.25%, while (B) and (C) were at 4.02% and 3.08%, respectively. An appropriate amount of sugar to feed and maintain the honey bee population was considered. The data showed no statistically significant differences between the two selected forms of longan syrup compared to the sugar syrup examined by the adult honey bee population. Conclusions: The main species of isolated fungi from longan pollen were Aspergillus spp. The discovery of an invertase-producing strain of A. niger LP5 has enabled its application for enzyme utilization in the invert sugar preparation process. The adult worker bee populations fed by longan syrup from both boiled and invertase-added sources showed an increasing trend. Artificial syrup made from longan fruit to feed honey bees when natural food sources are limited can be applied.
열대거세미나방(Spodoptera frugiperda)(밤나방과) 유충을 사육하기 위해 강낭콩과 맥아, 콩, 전지분유, 설탕을 주 영양분으로 구성한 두 종류(N4와 N6)의 반합성 인공사료를 개발하였다. 25℃와 광주기 15:9 h(명:암) 조건으로 페트리접시(지름 50 × 10 mm, 19.6 ㎤) 안에서 1령 유충을 각 사료로 개체별로 사육하였을 때, 6령 유충까지 관찰되었다. 용화율은 N4에서 평균 97.8%로 N6의 85.6%에 비해 유의하게 높았다. 번데기의 우화율은 각각 92.0과 93.5%로 유의한 차이는 없었다. 암컷 유충의 발육기간은 N4에서 17.9일, N6에서 17.7일이었고 수컷은 N4에서 18.7일, N6에서 18.5일이었는데, 사료 및 암수 사이에 차이는 없었다. 번데기 기간은 암컷이 11.1일, 수컷은 12.8일로 각 사료에서 동일하였는데, 암수 사이에는 유의한 차이가 있었다. 번데기 무게는 N4에서 257 mg로 암수가 동일하였고 N6 사료에서는 암컷이 256 mg, 수컷이 263 mg이었는데, 사료 및 암수 사이에 차이는 없었다. 각 사료로 자란 암컷 성충의 수명은 N4에서 8.6일에 비해 N6가 13.8일로 길었다. 산란전 기간은 N4에서 5.0일, N6에서 4.2일로 차이는 없었다. 산란기간은 N6사료에서 6.5일로 N4의 3.9일 보다 유의하게 길었다. 암컷당 유효 산란수는 N6에서 1,392개(최대 1,776개)로 N4사료에서의 942개(최대 1,694개)보다 많았으나, 사료 사이에 유의한 차이는 나타나지 않았다. N4와 N6 각각에서 알의 부화율은 79.2%와 79.8%이었고, 알 기간은 3.0일과 2.9일이었는데, 사료 사이에 유의한 차이는 없었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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