• 한국동물학회지
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• 제23권1호
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• pp.1-12
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• 1980

큐티클 形成 및 硬化過程中 血蛋白質의 變化와 起源을 규명하고자 acrylamide gel electrophoresis와 immunodiffusion 方法을 使用하였다. Acrylamide gel electrophoresis에서 적어도 19개의 protein band가 혈림프에서 發見되었으며 脂肪體에서는 13개의 band가 確認되었는데 이들은 대체적으로 일정한 pattern을 유지하였다. 또한 혈림프와 脂肪體의 一般的인 protein band의 pattern은 $3\\sim4$개의 강하게 染色된 band와 몇 개의 가는 band가 gel의 상단에 存在하는 것이 특징이었고 적어도 5개 이상의 haemolymph protein band가 　期初에 걸쳐 일정하게 나타났다. Immunodiffusion test에서는 $8\\sim9$개의 血蛋白質에 　期初에서 나타났는데 그중 2개의 血蛋白質은 　期前에 나타났으며 다른 두 血蛋白質도 　化직 후 脂肪體에서 나타남으로써 脂肪體가 이들 血蛋白質의 起源임을 암시하였다.

• 한국식품과학회지
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• 제5권2호
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• pp.78-83
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• 1973

선별된 Aspergillus 속의 한 균주인 S-1의 조(粗) naringin 분해효소의 정제에 관하여 검토한 결과 정제도의 관점에서 Sephadex G-200, starch gel electrophoresis, DEAE-Cellulose column chromatogram, 황산암모늄분획의 순위로 좋았으며 각 정제법에 따른 결과는 다음과 같다. 1) 조효소(粗酵素)를 starch gel electrophoresis 한 결과 단백 mg 당 naringinase 활성이 1,000 unit 로 정제되었다. 2. 단백 mg 당 0.37 unit, naringinase 활성인 조효소(粗酵素)를 황산암모늄분획한 결과 0.25포화 이하에서는 protein per mg 3 unit, 0.75포화 이하에서는 12 unit, 075포화 이상 완전포화 fraction 에서는 34 unit 로 정제되었으며 회수율로 볼때는 황산암모늄 0.75포화 이하에서 가장 좋았다. 3. Sephadex G-200에 의해 정제한 결과 protein per mg 1,337 unit 였으며 DEAE-Cellulose column chromatography 한 결과는 430 unit per protein mg 으로 정제되었다. 4. DEAE-Cellulose column chromatography 후 sephadex G-200에 의해 정제한 결과는 여지전기영동에 의해 단일 단백으로 나타났으며 이 단일 단백은 naringin 을 purunin 까지만 분해하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제27권4호
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• pp.298-303
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• 1999

An $\alpha$-D-galactosidase ($\alpha$-D-galactoside galactohydrolase, EC 3. 2. 1. 22) from earthworm was purified by affinity chromatography using N-$\varepsilon$-aminocaproyl-$\alpha$-D-galactopyranosylamine coupled to sepharose and its properties were examined. The specific activity of the purified enzyme, tested with p-nitrophenyl-$\alpha$-D-galactopyranoside as substrate, was 314 units/mg protein, representing an 122-fold purification of the original crude extract. The final preparation obtained from by Sephadex G-25 chromatography showed a single band on SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The molecular weight was determined to be 48,000 by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The purified galactosidase was showed maximum activity at pH 4.5 and 4$0^{\circ}C$, and was stable in the pH and temperature ranges from 4.0 to 5.5 and 30 to 5$0^{\circ}C$, respectively. The enzyme activity was inhibited by Zn2+, Hg2+ and Co2+. When the purified $\alpha$-galactosidase treated to guar gum for 6 hour, gel-promoting property was increased. It was clear that enzymatic elimination of galactose from guar gum by purified $\alpha$-galactosidase would lead to a significant increase in gelation ability.

• 한국식품과학회지
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• 제18권4호
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• pp.288-293
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• 1986

유안염석과 column chromatography 및 gel여과 등으로 비활성이 45.2U/mg가 되는 정제된 Rhizopus oryzae의 생전분 분해효소를 16.2%의 수율로 얻었다. 정제효소는 전기영동상에서 그 순도가 인정되었고 분자량은 67000, Km값은 4.082mg/ml이었다. 정제효소는 $50^{\circ}C$, pH $4.0{\sim}5.0$에서 잘 작용하였으며 옥수수amylose가 가장 적합한 전분이었고 옥수수 생전분에 작용한 분해산물은 거의 glucose였다.

• 미생물학회지
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• 제26권3호
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• pp.223-229
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• 1988

토양에서 분리 동정한 Bacillus subtilis K-4-3를 $\beta$-glucanase생산을 위하여 발효조를 사용한 결과 flask내 배양보다 배양 시간을 단축하였고 높은 역가의 조효소액을 얻을 수 있었다. 배양여액으로부터 균체의 $\beta$-glucanase는 색소에 접합된 변형기질을 이용하여 ammonium sulfate, fractionation Sephadex G-100 gel filtration, DEAE-Sphacel ion exchange chromotography의 순으로 정제하였으며, 정제효소는 15배로 정제되어 비활성이 25.7 unit/mg이였으며, 수율은 4.2%이였다. 본 효소의 일반적 특성을 검토한 결과 정제효소는 $50^{\circ}C$에서 최적반응을 나타내었고 그 활성은 $50^{\circ}C$에서 30분간 열처리에도 안정하였다. 효소의 최적 pH는 7.0 부근이었고 금속이온의 영향으로는 $Fe^{3+}$에 의해 강하게 저해받았고 $Li^{+1}$에 의해 약간 활성화 되였다. 분자량은 SDS 전기영동에 의해 17,000.으로 추정되었으며 monomer였다. 또한 본 효소에 의한 분해산불을 TLC로 관찰한 결과 2탄당, 3탄당 빛 4탄당으로 추정되는 분해산물을 얻을 수 았었으나 최종산물인 glucose는 얻을 수 없었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제10권3호
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• pp.405-409
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• 2000

We have studied the genome of an obligately commensal thermophile, Symbiobacterium toebii. The chromosome was extracted from pure cultures of S. toebii recently established. Total DNA of S. toebii was resolved by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) into discrete numbers of fragments by digenstion with the endonuclease SspI, SpeI, XbaI, and HpaI. Estimated sizes of fragments produced by the four enzymes and their sum consistently yielded a total genome size of 2.8 Mb. Because restriction endonucleases NotI and SwaI, recognizing 8 bp, released too many fragments, these enzymes could not be used for the estimation of the genome size. Considering no mobility of undigested genome under PFGE, the genome of S. toebii appears to be circular. The presence of extrachromosomal DNA in S. toebii was excluded by the results of the conventional 1% agarose gel electrophoresis and the field inversion gel electrophoresis of undigested S. toebii DNA.

• 한국환경성돌연변이발암원학회지
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• 제21권2호
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• pp.89-94
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• 2001

Recently, single cell gel electrophoresis, also known as comet assay, is widely used for the detection and measurement of DNA strand breaks in vitro and in vivo in many toxicological fields such as radiation exposure, human monitoring and toxicity evaluation. As well defined, comet assay is a sensitive, rapid and visual method for the detection of DNA strand breaks in individual cells. Briefly, a small number of damaged cells suspended in a thin agarose gel on a microscope slide were lysed, unwinded, electrophoresed, and stained with a fluorescent DNA binding dye. The electric current pulled the charged DNA from the nucleus such that relaxed and broken DNA fragments migrated further. The resulting images which were subsequently named for their appearance as comets, were measured to determine the extent of DNA damages. However, some variations could be occurred in procedures, laboratories's conditions and kind of cells used. Hence, to overcome and to harmonize these matters in comet assay, International Workshop on Genotoxicity Test Procedure (IWGTP) was held with several topics including comet assay at Washington D.C. on March, 1999. In spite of some consensus in procedures and conditions in IWGTP, there are some problems still remained to be solved. In this respect, we attempted to set the practical optimal conditions in the experimental procedures such as lysis, unwinding, electrophoresis and neutralization conditions and so on. First of all, we determined optimal lysis and unwinding time by using 150 $\mu$M methyl methanesulfonate (MMS) which is usually used concentration. And then, we determined optimal positive control concentrations of benzo(a)pyrene (BaP) and MMS in the presence and absence of S9 metabolic activation system, respectively.

• Applied Biological Chemistry
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• 제42권1호
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• pp.39-44
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• 1999

각각 다른 성장기의 한우 등심에서 추출한 단백질을 이차원 전기영동법으로 분리하여 젤 상의 단백질 전개 양상을 비교하였다. 성장 0, 6, 12, 24 개월령의 한우 등심 단백질들을 길이 16 cm 튜브젤에서 등전점에 따라 분리하고, 이차원적으로 $18{\times}20$ cm, 12% SDS-polyacrylamide gel 전기영동 하여 단백질을 분리하였다. 등전점 3.0에서 9.0 그리고 분자량 15,000에서 100,000 Da 사이의 단백질들이 분리되어 Silver 염색법으로 명확히 구분할 수 있었다. 흥미롭게, 성장과정에서 단백질 발현이 증가했거나 감소한 단백질들은 저분자 단백질들 이었다. 성장 과정 중 증가된 단백질들을 분리하기 위해 수용성 단백질들을 조직으로부터 1% Triton X-100 으로 추출하였다. 그리고 이를 30%와 50% 황산암모니아로 분획하였다. 이와 같이하여 각 단백질들의 분리조건을 결정하였다. 이들 조건을 이용하여 발현이 증가된 단백질들을 분리하고 PVDF membrane에 옮겨서 아미노산 서열을 결정하여 단백질을 규명하였다.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제56권2호
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• pp.95-100
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• 2013

현재 토양 생태에서 토양미생물은 유기물 분해, 질소 순환, 식물의 질소 이용 등 중요한 역할을 하고 있어, 토양 내 미생물 다양성을 분석하기 위한 연구는 지속적으로 진행되어 오고 있다. 본 연구에서는 논 토양의 미생물 생태 다양성을 조사하기 위한 효과적인 방법으로 denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE)를 적용하고자 본 연구를 수행하였다. 논 토양 미생물의 DNA를 분리하기 위하여 lysis buffer method, skim milk bead method, sodium phosphate buffer method, Epicentre SoilMaster DNA extraction kit (Epicentre, USA), Mo Bio PowerSoil kit (Mo Bio, USA)를 이용하여 토양 내 gDNA 최적 추출방법을 확인하였다. 그 결과 Mo Bio PowerSoil kit를 사용하였을 때 Shannon 다양성지수가 세균 3.3870, 진균 3.6254으로 미생물 다양성 분석시에 가장 효과적이었다. DGGE 분석을 위한 조건은 세균의 경우 6% polyacylamide gel, 45-60% denaturing gradient였고, 진균의 경우 6% polyacrylamide gel, 45-80% denaturing gradient에서 최적 분석조건을 보였다. 위의 분석법을 적용하여 논 토양내의 미생물 군집의 변화를 살펴보면 시간의 변화 요인에 의해 미생물 변화가 일어나는 것을 알 수 있었다. 본 연구에서 사용된 DGGE 분석법을 통해 논토양 미생물의 분석 가능성을 제시 할 수 있었다.

• 대한수의학회지
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• 제39권2호
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• pp.338-342
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• 1999

Twenty three strains of Escherichia (E) coli O157 : H7 isolated from Korea, Japan, USA were analyzed by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) of XbaI-digested chromosomal DNA and multiplex polymerase chain reaction. Various PFGE patterns of E. coli O157 : H7 were found on the same farm. Most of the E, coli O157 : H7 strains had shiga-like toxin (slt) II gene only (43.5%) or both slt I and slt II genes(30.4%). eaeA gene was highly conserved in the E. coli O157 : H7. There was no correlation between PFGE and slt gene patterns. The results indicate that various genotypes of E. coli O157 : H7 have spread throughout the country and genomic DNA patterns generated by PFGE are highly specific for different strains and have significant value in epidemiologic investigations of infectious disease outbreaks.