• 한국가축번식학회지
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• 제21권4호
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• pp.335-343
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• 1997

The effect of thiol compounds on development and intracellular glutathione(GSH) concentrations of bovine embryos produced by in vitro maturation and in vitro fertilization(IVM/IVF) was examined in CRlaa medium with or without $\beta$-mercaptoethanol(0, 10, 25 and 50$\mu$MME) and cysteamine(0, 25, 50 and 75 $\mu$M). Numbers of cells comprising blastocysts were also counted using double fluorescence stain and the total glutathione levels(oxidized and reduced form) of morula and blastocyst embryos were than measured by an enzymatic method. Following routine IVM/IVF procedures oocytes and zygotes were cultured for 40 to 44h in CRlaa medium. Then 2 to 8-cell embyos had cumulus cell removed and were allotted randomly to the experimental medium. In Experiment 1, the proportion of embryos developing to and beyond morulae stages in 0, 10, 25 and 50 $\mu$M $\beta$-ME was 42.9%, 50.0%, 53.7% and 65.6%, respectively. Fifty $\mu$M $\beta$-ME group was significantly higher than those of any other groups (P<0.05). In Experiment 2, the percentages of embryos developed beyond morulae stages in 0, 25, 50 and 75 $\mu$M cysteamine was 42.9%, 40.4%, 60.0% and 59.2%, respectively. Fifty and 75$\mu$M cysteamine groups were significantly higher than in 0 and 25 $\mu$M cysteamine groups, but all of culture medium containing cysteamine(52.6%) was not significantly difference in control group(42.9%). In Experiment 3, the intracellular GSH concentrations of morulae and blastocyst embryos in 0 and 50 $\mu$M $\beta$-ME was 42.4 pM and 44.9 pM, 49.5 pM and 67.8 pM, respectively. Morulae embryos were not difference, but blastocyst embryos were significantly difference between treatments(P<0.05). In Experiment 4, the intracellular GSH concentrations of morulae in CRlaa with or without cysteamine were 39.8 pM and 45.6 pM, and blastocysts were 59.3 pM and 66.8 pM, respectively. Cell numbers of blastocysts were similar to in all experimental groups. These experiments indicate that thiol compounds can increase the proportion of embryos that developing to and beyond morulae stage and the intracellular GSH concentrations.

• 한국식품영양과학회지
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• 제24권4호
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• pp.563-569
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• 1995

Myrosinase from Korean cabbage(Bogdoli) was purified and its enzymatic properties were investigated. Myrosinase from the Korean cabbage was purified by DEAE Bio-Gel Sepharose, Concanavalin-A, and Mono-Q column chromatography and exhibited a 55KD molecular weight with a single band on the gel of SDS-PAGE. The enzyme was purified about 21-fold compared to its crude enzyme and a specific activity of purified enzyme was 15, 120units/mg. Optimum pH of the myrosinase was 7.0 in both phosphate and Tris-HCl buffer solutions, the enzyme was stable at pH 6.5~7.0. Optimum temperature of enzyme was 37~38$^{\circ}C$. The enzyme activity was significantly inhibited by Cu2+ and Hg2+, but enhanced by ascorbic acid, resulting in a maximum activity at 1mM ascorbic acid. Among the ascorbic acid analogues, dehydro-ascorbic acid did not affect, whereas others showed a little effect on the enzyme activity, but less than ascorbic acid itself. Reducing agents such as 2-mercaptoethanol and dithiothreitol had no effect on the enzyme activity, but the enzyme activity was enhanced when 2-mercaptoethanol was mixed with ascorbic acid.

• 생명과학회지
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• 제22권6호
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• pp.778-787
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• 2012

카드뮴에 의해 유도되는 담배의 생장, 엽록소 함량, rubisco와 rubisco activase에 미치는 SA의 영향과, 이에 대한 변성제의 효과를 연구하였다. 담배 기내생장에 대한 SA의 최적농도를 찾기 위해, $10^{-6}$ mM - $10^2$ mM SA를 처리하여 9주간 생장시킨 결과, $10^{-4}$ mM SA에서 가장 높은 생장을 보였다. SA와 카드뮴을 4개의 실험구(대조구, SA, 카드뮴, 카드뮴 + SA)로 하여 생장, 엽록소 함량 및 rubisco와 rubisco activase의 함량과 활성을 측정한 결과, 카드뮴 > 카드뮴 + SA < 대조구 카드뮴 + SA < 대조구 ${\beta}$-mercaptoethanol은 활성을 촉진시켰으며, urea, thiourea, guanidium-HCl은 억제시켰다. 이는 L-cysteine과 ${\beta}$-mercaptoethanol은 변성에 관여하지 않으며, urea, thiourea, guanidium-HCl은 변성에 관여하였음을 의미한다. Rubisco activase의 활성에 대한 변성제들의 영향을 조사한 결과, 5종 모두는 비처리구와 비교하여 현저한 영향은 나타내지 않았다.

• 한국가축번식학회지
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• 제22권4호
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• pp.375-383
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• 1998

본 연구는 돼지 미성숙 난포란을 체외에서 성숙시킬 때, $\beta$-mercaptoethanol ($\beta$-ME) 및 Cysteamine 의 첨가 배양이 난핵포붕괴 및 핵성숙율에 미치는 영향을 조사하기 위하여 실시하였다. 본 연구에서 얻은 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 체외성숙 배양액인 TCM-199 에 $\beta$-ME 를 0, 10, 50, 100 및 200 $\mu$M 을 첨가하여 36 시간 동안 성숙을 유기 시킬 때 난핵포붕괴율은 각각 91.6, 92.5, 91.8, 91.9 및 92.7%로서 처리구간 유의성이 없는 높은 결과를 보였고, 핵성숙율은 각각 49.6, 41. 7, 32.5, 34.1 및 35.4%로서 대조구에 비하여 비교적 낮은 성숙율을 보였으며, 특히 50, 100 및 200 $\mu$M 첨가시 유의적으로 낮은 핵성숙율을 나타냈다 (P＜0.05). 또한, 44시간 동안 체외성숙을 유기시켰을 때 난핵포 붕괴율은 각각 91.8, 90.4, 92.5, 91.2 및 93.9%로서 처리구간 유의성 없이 높은 결과를 나타냈으며, 핵성숙율은 71.9, 58.8, 56.7, 62.2 및 56.5%로서 대조구에 비하여 모든 처리구에서 유의적으로 낮은 성숙율을 나타냈다 (P＜0.05). 2. 체외성숙 배양액인 TCM-199 에 cysteamine을 0, 10, 50, 100 및 200 $\mu$M 을 첨가하여 36 시간 동안 성숙을 유기시켰을 때 난핵포붕괴율은 각각 90.6, 86.3, 88.2, 87.2 및 90.0%로서 각 처리구간 높은 결과를 나타냈고, 핵성숙율은 53.8, 45.1, 54.4, 57.5 및 63.3%로서 대조구와 비슷한 결과를 나타냈으며, 특히, 200 $\mu$M 의 첨가구에서 유의적으로 높은 성숙율을 나타냈다 (P＜0.05). 또한, 44 시간 동안 체외성숙을 유기시켰을 때 난핵포붕괴율은 각각 89.5, 93.1, 85.1, 89.8 및 3%로서 모든 처리구에서 높은 결과를 나타냈으며, 핵성숙율은 각각 84.2, 77.6, 66.0, 67.8 및 78.3%로서 대조구에 비하여 전 처리구에서 다소 낮은 결과를 보였으며, 특히 50 및 100 $\mu$M 처리구에서 유의적으로 낮은 핵성숙율을 나타냈다 (P＜0.05).

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제13권2호
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• pp.137-144
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• 1985

전분자원의 효율적 이용을 위한 방법의 일환으로 분리동정된 H. anomala var. anomala FRI YO-32와 S. cerevisiae와의 세포융합가능성을 검토하기 위하여 원형질체형성을 위한 기본적인 제반조건에 대하여 실험하였다. 세포벽분해효소로서 달팽이 (Helix pomatia) 추출 효소를 사용하여 원형질체의 형성시수율에 영향을 미치는 중요한 인자로서, 함유황화합물에 의한 전처리유무 및 이러한 화합물의 처리농도 및 처리방법, 세포벽분해효소의 농도 및 처리시간, 공시효모의 성장시기 및 효모세포의 수와 삼투압안정제 (KCI)의 농도 등이 고려되었으며, 원형질체형성을 위한 이러한 인자들의 최적처리조건이 검토되었다.

• 한국동물학회:학술대회논문집
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• 한국동물학회 1996년도 한국생물과학협회 국제학술대회
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• pp.183.2-183
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• 1996

No Abstract, See Full Text

• BMB Reports
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• 제29권4호
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• pp.335-342
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• 1996

Porcine liver cysteinesulfinic acid decarboxylase was purified approximately 460-fold by means of ammonium sulfate fractionation and sequential column chromatographic separation with Sephadex G-100, DEAE-cellulose and hydroxylapatite. The enzyme has a flat pH profile with maximum activity occurring between pH 6.0 and 7.6. Pyridoxal 5'-phosphate must be present in all buffers used for purification procedures in order to stabilize the enzyme. Addition of sulfhydryl reagents such as 2-mercaptoethanol are also necessary to maintain maximum enzyme activity throughout purification. The absorption spectrum shows that cysteinesulfinic acid decarboxylase is a pyridoxal 5' -phosphate-containing protein. The major absorption is at 280 nm with two smaller absorption regions, one at 425 nm which is ascribed to a Schiffs base between pyridoxal phosphate and protein, and another at 325 nm which is thought to be due to the interaction of 2-mercaptoethanol with the Schiffs base. A number of divalent cations tested did not affect enzyme activity with the exception of mercury, copper, and zinc which are inhibitory. The partially purified enzyme has an apparent $K_m$ of 0.94 mM for cysteinesulfinate. Cysteic acid is a competitive inhibitor of the enzyme with a $K_i$ of 1.32 mM. The molecular weight of the enzyme was estimated to be about 79,600 by using Sephadex G-200 column chromatography.

• 한국가축번식학회지
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• 제27권2호
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• pp.125-133
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• 2003

본 연구는 돼지 난포란의 체외배양액에 황화합물인 $\beta$-mercaptoethanol($\beta$-ME)을 첨가배양함으로서 돼지난포란의 체외성숙과 체외배발달에 미치는 향을 구명하고자 실시하였다. 본 연구에서 얻어진 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 돼지난포란을 체외성숙배양액인 NCSU-23 배양액에 $\beta$-ME를 각각 0, 25, 50 및 100$\mu$M 첨가배양하여 성숙을 유기한 다음, 체외수정을 실시한 결과, 모든 처리구에서 핵성숙률, 정자침투율, 웅성전핵형성률, 다정자침입률 및 평균침입정 수에서 유의적인 차이가 인정되지 않았다 P>0.05). 2. 체외성숙 및 수정을 실시한 후, 배발달 배양액인 NCSU-23에 7일간 배양한 결과, 배반포 형성률은 25$\mu$M의 $\beta$-ME 처리구가 유의적(P<0.05)으로 높은 결과를 나타냈고, 총세포수에 있어서는 대조구와 처리구간 유의적인 차이가 인정되지 않았다. 3. 배발달배양액인 NCSU-23에 $\beta$-ME를 각각 0, 12.5, 25 및 5$\mu$M 첨가하고 5 및 20%산소조건 하에서 7일간 배양한 결과, 처리구별 산소농도에 따른 배발달률 및 총세포수에 있어서는 유의 적 인 차이가 없었으나, 25$\mu$M $\beta$-ME 처리구에서 유의적으로 높은 결과를 나타냈다(P<0.05). 그러나 총세포수에서는 처리구 및 대조구간 유의성이 인정되지 않았다. 결론적으로 돼지난포란의 체외성숙 및 배발달시 황화합물인 $\beta$-ME의 첨가는 25$\mu$M이 가장 적합하며, 산소농도에 따라서는 영향을 미치지 않는 것으로 조사되었다.

• BMB Reports
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• 제30권2호
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• pp.144-149
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• 1997

An expression vector was constructed containing the gene encoding diphtheria toxin A (DTA) which was placed after a T7 promoter. Cytoplasmic expression of the DTA gene resulted in the formation of an insoluble inclusion body. The inclusion body was collected after the complete lysis of the cell, and subsequent washing with 0.1% Triton X-100 released 16~30% of DTA protein from the inclusion body along with other contaminating proteins. The released DTA protein was purified by dialysis. The remaining pellet was dissolved in 8 M urea containing 5% ${\beta}-mercaptoethanol$, and the denatured DTA was renatured by the dilution-dialysis method. The total yield was 35%, and about 5 mg DTA was obtained from 1 L culture. The DTA protein has a free sulfhydryl group exposed to the protein surface, and was shown to have a tendency to dimerize through disulfide formation in the absence of ${\beta}-mercaptoethanol$. The utility of the sulfhydryl group was tested for the construction of recombinant toxins.

• KSBB Journal
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• 제14권3호
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• pp.322-327
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• 1999

토양에서 분리된 Streptomyces sp으로부터 cholesterol oxidase의 정제 및 효소학적 특성을 조사하였다. 본 효소의 정제는 50~80% 포화의 황산암모늄 침전 및 cholesterol affinity column chromatography를 통하여 28.3%의 수율로 정제 되었다. 정제된 효소는 SDS-PAGE에서 단일한 밴드를 보였으며 분저량은 약 60,000 dalton으로 추정되었으며, HPLC분석 결과 단일의 peak로 검출되었다. 본 효소의 특성을 검토한 결과, 금속 이온으로 Hg와 Cu의 존재시 크게 저해를 받았고, dithiothreitol 과 mercaptoethanol과 같은 저해제에 의해서 상당히 실활되었다. 본 cholesterol oxidase의 Michaelis 상수는 cholesterol을 기질로하여 Lineweaver-Burk plot분석에서 1.38mM로 추산되었다. 정제효소의 아미노산 조정은 약 416개의 잔기로 추정되며 glycine, alanine, threonine의 함량이 높은 반면, methionine, isoleucine의 함량은 극히 낮았다.