• 한국미생물·생명공학회지
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• 제26권6호
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• pp.507-514
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• 1998

국내 전통식품인 청국장으로부터 강력한 fibrinolytic activity를 갖는 K-54주를 분리, 동정한 결과 B. subtilis로 확인되었으며 이 균으로부터 강력한 갖는 효소를 정제하였다. 정제도는 약 66.9배 증가하였으며 약 10.1%의 수율을 보였다. B. subtilis K-54에서 분리한 fibrinolytic enzyme의 최적 활성 pH가 8-12사이였으며 50-75$^{\circ}C$사이에서 최적 활성을 보였다. 정제된 효소의 분자량은 약 29 kDa이었고, 등전점은 8.67로 나타났으며 Vmax값은 47.16%, Km값은 0.31(3.1 mg/$m\ell$)였다. N-말단 아미노산 서열 분석 결과 B. subtilis K-54주에서 정제한 fibrinolytic enzyme는 Ala-Gly-Ser-Val-Pro-Try-Gly-Ser이었으며 serine protease저해제인 PMSF에 강력한 활성 저해를 보여 serine protease계열의 효소임을 확인할 수 있었다.

• 생명과학회지
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• 제17권4호
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• pp.581-586
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• 2007

본 연구에서는 피부상재균이며 기회병원균이기도 한 Staphylococcus epidermidis ATCC12228로부터 urease효소를 4단계 크로마토그라피 방법을 사용하여 1,127배 정제하고 그 생화학적인 특성을 규명하였다. 정제된 urease 효소는 SDS-PACE 전기영동분석 및 gel-filtration 크로마토그라피를 이용한 천연분자량 분석결과, 67, 16.1 및 12.7 kDa의 3개 subunit가 3량체로 회합되어 존재하는 것으로 나타났으며 catalytic unit 당 2.2개의 니켈 원소를 함유하는 것으로 측정되었다. 정제된 효소의 비활성은 993.8 U/mg, $K_m$값은 8.5mM로 각각 산출되었다.

• Journal of Forest and Environmental Science
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• 제26권2호
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• pp.83-94
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• 2010

Chinese fir (Latin name: Cunninghaimia lanceolata) is one of the major commercial coniferous trees. Most of Chinese fir forests are managed in successive rotation sites, which lead productivity to decline. Autotoxicity is the important reason for soil degradation of Chinese fir plantation, especially, phenolic acids are considered as the major allelopathic toxins which induce autotoxicity in Chinese fir rotation stands. We performed here proteomic approach to investigate the response of proteins in Chinese fir leaves to salicylic acid. The tube plantlets of Chinese fir clone were treated with 120 mg/L salicylic acid for 1, 3 and 5th day. 2-DE, coupled with MALDI-TOF-TOF/MS, was used to separate and identify the responsive proteins. We found 12, 7, and 12 candidate protein spots that were up- or down-regulated by at least 2.5 fold after 1, 3, and 5th day of the stress, respectively. Of these protein spots, 16 spots were identified successfully. According to the putative physiological functions, these proteins were categorized into five classes (1) the proteins involved in protein stability and folding, including 26S proteome, Grp78, Hsp70, Hsp90 and PPIase; (2) the protein involved in photosynthesis and respiration, including OEC 33 kDa subunit, GAPDH; (3) the protein related to cell endurance to acid, F-ATPase; (4) the protein related to cytoskeleton, tubulin; (5) the protein related to protein translation: prolyl-tRNA synthetase. These results give new insights into autotoxic substance stress response in Chinese fir leaves and provide preliminary footprints for further studies on the molecular signal mechanisms induced by the stress.

• 식물병연구
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• 제16권3호
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• pp.238-246
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• 2010

2006년 9월 충청북도 농업기술원 내 백미속 약용작물, 큰조롱과 넓은잎 큰조롱 시험포장에서 바이러스병 조사를 수행하였다. 각 시험구별 바이러스 발병률은 20-80%의 범위였으며, 뿌리로 번식한 경우가 종자로 번식한 경우보다 발병률이 두 배 정도로 높았다. 두 약용식물에서는 모자이크, 얼룩, 괴저, 황화, 퇴록반점, 기형 등 매우다양한 바이러스 병징이 관찰되었다. 전자현미경 분석결과 대부분의 시료에서 390-730 nm 길이의 사상형 입자가 관찰되었으며, 바이러스 병징을 보인 시료 중 일부에서는 바이러스 입자가 관찰되지 않은 것도 있었다. 전형적인 모자이크 증상을 보이는 큰조롱 잎을 순화하여 약 430-845 nm 길이의 사상형 입자를 얻을 수 있었다. 순화한 바이러스로부터 분리된 RNA를 이용하여 염기서열 분석을 실시한 결과 포티바이러스속 P3과 외피단백질 유전자의염기서열을 얻을 수 있었으며, BLAST 분석결과 포티바이러스속 바이러스들과 각각 약 26-38%와 62-72% 상동성을 나타내었다. 순화한 바이러스의 SDS-PAGE 분석에서 염기서열 분석으로 예상되는 약 30kDa의 외피단백질을 확인하였다. 7과 21종의 지표식물을 사용한 생물검정에서 Chenopodium quinoa에서 접종엽의 국부병반과 함께 전신적 황화반점 증상을 나타냈으며, 나머지 지표식물에서는 감염되지 않았다. 채집된 큰조롱과 넓은잎 큰조롱시료를 특이 프라이머를 이용한 RT-PCR 방법으로 진단한 결과 병징을 보인 모든 시료에서 양성반응이 나타났으며, 병징을 보이지 않는 7점 중 5점의 시료에서 양성반응을 나타내었다. 이러한 결과들을 종합해 볼 때 본 바이러스는 포티바이러스속의 새로운 종으로 확인되었으며, 우리나라가 원산지인 큰조롱에서 최초로 발견된 바이러스인 점에서 Keunjorong mosaic virus(KjMV)로 명명하고자 한다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제27권11호
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• pp.1971-1982
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• 2017

Piliated Lactobacillus rhamnosus (pLR) strains possess higher adherent capacity than non-piliated strains. The objective of this study was to isolate and characterize probiotic pLR strains in human fecal samples. To this end, mouse polyclonal antiserum (anti-SpaA) against the recombinant pilus protein (SpaA) of L. rhamnosus strain GG (LGG) was prepared and tested for its reactivity and specificity. With the anti-SpaA, a method combining the de Man, Rogosa, and Sharpe (MRS) agar plating separation and colony immunoblotting (CIB) was developed to isolate pLR from 124 human fecal samples. The genetic and phenotypic characteristics of the resultant pLR isolates were compared by randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) fingerprinting, and examination of adhesion to Caco-2 cells, hydrophobicity, autoaggregation, and in vitro gastrointestinal tolerance. Anti-SpaA specifically reacted with three pLR strains of 25 test strains, as assessed by western blotting, immunofluorescence flow cytometry, and immunoelectron microscopy (IEM) assays. The optimized MRS agar separation plus anti-SpaA-based CIB procedure could quantitatively detect $2.5{\times}10^3CFU/ml$ of pLR colonies spiked in $10^6CFU/ml$ of background bacteria. Eight pLR strains were identified in 124 human fecal samples, and were confirmed by 16S RNA gene sequencing and IEM identification. RAPD fingerprinting of the pLR strains revealed seven different patterns, of which only two isolates from infants showed the same RAPD profiles with LGG. Strain PLR06 was obtained with high adhesion and autoaggregation activities, hydrophobicity, and gastrointestinal tolerance. Anti-SpaA-based CIB is a rapid and inexpensive method for the preliminary screening of novel adherent L. rhamnosus strains for commercial purposes.