콜로이드 식품에서의 단백질의 구조적 안정성을 연구하기 위하여 7개의 BSA structural intermediates, succinylated ${\beta}-lactoglobulin$을 만든 후 CD, 이황화물 결합함량, hydrodynamic radius 등을 측정하여 그 구조적 특성을 규명했다. Refolding time이 길수록 BSA intermediates들은 native BSA 구조에 근접하는 것을 나타냈고 succinylation은 ${\beta}-lactoglobulin$의 순 음전하를 변화시켜 보다 aperiodic structure를 갖게하였다. Perchlorate 존재하 ${\beta}-casein$의 구조는 소수성 상호작용에 크게 영향 받는 것으로 나타났다.
생유와 시판되고 있는 저온살균유, 고온 순간살균유 및 초고온순간살균유 각 20예에 대하여 polyacrylamide 겔 전기 영동법으로 단백질의 조성을 구하였다. 생유의 Whey 단백질 중 혈청 albumin, ${\alpha}-lactalbumin,\;{\beta}-lactoglobulin$의 조성은 3.71 : 11.44 : 84.85였으며 저온 살균과 고온순간살균에 의하여 큰 변호를 주지 않았다. 그러나 초고온 순간 살균으로 조성비는 0 : 64.75 : 35.5로 변화되어 형청 albumin의 소실과 ${\beta}-lactoglobulin$의 감소를 보였다. 살균처리유의 냉장보존 3일째에 ${\alpha}-lactalumin과\;{\beta}-lactoglobulin$의 감소가 있었으나 $25^{\circ}C$ 실온보존에서는 변화가 없었다. 고온 순간 살균유는 실온보존 2일째에 혈청 albumin, 3일째에 ${\alpha}-Lactalbumin의$ 감소만 있었고 다른 Whey 단밸질은 보존온도에 관계없이 3일간 농도변화가 없었다. 초고온순간살균유는 냉장보존 2일째 혈청 albumin의 감소만 인정되었다.
The study was carried out on eight Bos indicus cattle breeds namely, Sahiwal, Tharparkar, Nimari, Khilari, Deoni, Amritmahal, Hariana and Hilly cattle; two Bos taurus cattle breeds namely, Jersey and Holstein Friesian and Indicine${\times}$Taurine crossbred cattle to find out the polymorphic pattern of beta-lactoglobulin gene. The polymorphism at beta-lactoglobulin gene was detected by conducting PCR-RFLP studies on 398 bp fragment spanning over 104 bases of exon IV and 294 bases of intron IV. Two alleles A and B and three genotypes AA, AB and BB were observed in all the cattle breeds. The frequency of B allele was comparatively higher than that of A allele. The allelic frequency of A varied from 0.20 to 0.30 in Bos indicus cattle breeds and 0.19 to 0.34 in Bos taurus breeds while in crossbred cattle the frequency was estimated as 0.21. The weighted frequency of A allele was highest in Indian cattle and lowest in crossbred cattle while the frequency in taurine cattle was found to be in between indicus and crossbred cattle. The non-significant differences of allelic frequency amongst Bos indicus, Bos taurus and crossbred cattle was observed. The effect of genotype on fat percentage was also found to be non-significant in cattle.
A total of 1033 Brown Swiss and 610 Canadienne cows were phenotyped for the genetic variants ${\alpha}_{s1}$-casein, ${\beta}$-casein, ${\kappa}$-casein, ${\beta}$-lactoglobulin and ${\alpha}$-lactalbumin. In Brown Swiss, frequency distributions were: 97.3% B and 2.7% C variant of ${\alpha}_{s1}$-casein; 31.6% $A^1$, 51.8% $A^2$, 0.5% $A^3$ and 16.1% B variant of ${\beta}$-casein; 70.4% A, 29.3% B, and 0.3% C variant of ${\kappa}$-casein; 41.7% A and 58.3% B variant of ${\beta}$-lactoglobulin; and 100% B variant of ${\alpha}$-lactalbumin. Corresponding frequencies in Canadienne for those five milk proteins were: 98.6 and 1.4%;58.5, 33.5, 0.08 and 7.9%; 78.8, 21.1 and 0.1%, 42.4 and 57.6%; and 100%. Analysis of variance by least squares showed possible association between milk protein phenotypes and some lactational production traits. There were no significant association of phenotypes of ${\alpha}_{s1}$-casein, ${\beta}$-casein and ${\beta}$-lactoglobulin with milk yield, fat yield, protein yield, fat percentage and protein percentage in both breeds during the three lactations. In the Brown Swiss, ${\kappa}$-casein phenotype was associated with 305-day fat yield and protein yield during the first lactation. ${\kappa}$-Casein AB was associated with higher milk, fat and protein yield during the second lactation. During the third lactation, ${\beta}$-lactoglobulin AA in Canadienne cows was associated with higher protein content in the milk (3.70%) when compared to phenotypes AB (3.54%) and BB (3.64%).
시유, 분유, 발효유에 존재하는 우유알레르겐인 ${\beta}$-Lactoglobulin (BLG)를 측정하기 위해 면역 blotting 및 간접결합면역 분석법(Competitive-indirect Enzyme linked Immunosorbent Assay; Ci-ELISA)으로 분석하였다. Immunoblotting 결과, 발효유에서는 우유 알레르기 환자의 IgE와의 반응이 나타나지 않았고 분유 및 시유에서는 약하지만 반응이 나타났다. 다클론 항체 및 우유 알레르기 환자의 IgE로 이들의 BLG 함량을 정량한 결과, BLG 함량은 시유가 가장 높았으며 발효유는 매우 낮았다. 이상의 결과에서 발효유에서는 가장 낮은 BLG 함량이 측정되어 우유 알레르기 환자에 대한 저알레르기원성 식품으로 사용될 수 있을 것으로 사료된다.
Objective: The aim of the study was to find a possible association between the ${\beta}-$ and ${\kappa}-casein$ and ${\beta}-lactoglobulin$ genotypes and important milk physiochemical and technological characteristics such as acidity, alcohol stability, the contents of some minerals and the parameters of acid fermentation ability (FEA) in Czech Fleckvieh Cattle. Methods: Milk and blood samples were collected from 338 primiparous Czech Fleckvieh cows at the same stage of lactation. The genotypes of individual cows for ${\kappa}-casein$ (alleles A, B, and E) and ${\beta}-lactoglobulin$ (alleles A and B) were ascertained by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, while their ${\beta}-casein$ (alleles $A^1$, $A^2$, $A^3$, and B) genotype was determined using melting curve genotyping analysis. The data collected were i) milk traits including active acidity (pH), titratable acidity (TA), alcohol stability (AS); calcium (Ca), phosphorus (P), sodium (Na), magnesium (Mg), and potassium (K) contents; and ii) yoghurt traits including active acidity (Y-pH), titratable acidity (Y-TA), and the counts of both Lactobacilli and Streptococci in 1 mL of yoghurt. A linear model was assumed with fixed effects of herd, year, and season of calving, an effect of the age of the cow at first calving and effects of the casein and lactoglobulin genotypes of ${\beta}-CN$ (${\beta}-casein$, CSN2), ${\kappa}-CN$ (${\kappa}-casein$, CSN3), and ${\beta}-LG$ (${\beta}-lactoglobulin$, LGB), or the three-way interaction between those genes. Results: The genetic polymorphisms were related to the milk TA, AS, content of P and Ca, Y-pH and Lactobacilli number in the fresh yoghurt. The CSN3 genotype was significantly associated with milk AS (p<0.05). The effect of the composite CSN2-CSN3-LGB genotype on the investigated traits mostly reflected the effects of the individual genes. It significantly influenced TA (p<0.01), Y-pH (p<0.05) and the log of the Lactobacilli count (p<0.05). Conclusion: Our findings indicate that the yoghurt fermentation test together with milk proteins genotyping could contribute to milk quality control and highlight new perspectives in dairy cattle selection.
The ${\beta}$-Lactoglobulin (BLG) gene expression is differentially regulated during development of the mammary tissues. Such differential regulation of the BLG gene expression can be reiterated in the cultured mammary HC11 cells. In the growing non-confluent HC11 cells, the BLG promoter activity was shown to be partially repressed by the upstream regulatory sequence. The repression was gradually diminished and switched to activation as the cells grew confluent. The differential regulation of the BLG promoter was controlled by the 5'-regulatory sequence located at the upstream of 205 bp. Electromobility shift assay showed that nuclear extract from HC11 cells differentially bound on the regulatory sequence, depending on the cell confluency, which was in accordance with the differential transcriptional activity. DNase I foot-print assay, however, revealed that all nuclear extracts presented the same foot-prints, regardless of confluency of HC11 cells. These results suggest that differential regulation BLG gene expression by the 5'-regulatory sequence may be accomplished by competitive and/or cooperative binding of differential regulatory factors on the same regulatory element.
To elucidate the effect of oxygen radicals on the molecular properties of proteins, the secondary and tertiary structure and molecular weight size of BSA and ${\beta}$-lactoglobulin were examined after irradiation of proteins at various doses. Gamma-irradiation of protein solutions caused the disruption of the ordered structure of protein molecules as well as degradation, cross-linking, and aggregation of the polypeptide chains. As a model system, BSA and ${\beta}$-lactoglobulin were used as a typical ${\alpha}$-helical and a ${\beta}$-sheet structure protein, respectively. A circular dichroism study showed that the increase of radiation decreased the ordered structure of proteins with a concurrent increase of aperiodic structure content. Fluorescence spectroscopy indicated that irradiation quenched the emission intensity excited at 280 nm. SDS-PAGE and a gel permeation chromatography study indicated that radiation caused initial fragmentation of proteins resulting in a subsequent aggregation due to cross-linking of protein molecules.
A population of exotic Holstein Friesian, Jersey, their crossbreds and the indigenous Murrah breed of buffalo bulls (n=486), used in artificial insemination breeding program were screened for the allelic distribution of the ${\kappa}$-casein and ${\beta}$-lactoglobulin genotypes. The preferred "B" allele frequency was highest in Murrah buffalo bulls followed by Jersey and Holstein Friesian. The increase in this particular allele frequency in the Holstein Friesian crossbred bulls was more when compared to their Jersey counterparts. Hardy-Weinberg's equilibrium was maintained albeit with some deviations, which was higher in crossbreds than in purebreds. The feasibility of using such large-scale molecular diagnostic tools in the field and their significance with regards to the dairy economy is discussed.
계면에서의 단백질 흡착 기작을 연구하기 위하여 여러 단백질의 A/W 계면에서의 흡착이 조사되었다. BSA intermediates들의 흡착결과는 단백질 2차, 3차 구조가 계면에서의 흡착기작에 영향끼친 것을 나타냈으며, succinylated ${\beta}-lactoglobulin$의 흡착에서는 순 음전하의 증가가 정전기적 상호작용에 영향끼침을 보여 주었다. 또한 ${\beta}-casein$의 흡착은 물 구조를 파괴하는 chaotropic 염 존재하에서 흡착속도가 떨어지는 것을 시사했다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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