• Applied Biological Chemistry
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• 제36권6호
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• pp.562-566
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• 1993

제라니움(Pelargonium zenale hybrids)의 원형질체에 외래유전자를 전기충격에 의해 직접도입시키는 조건을 methylene blue 염색법을 이용하여 조사하였다. 그 결과 1.77 kV/cm의 직류전압을 $40{\mu}\;sec$ 동안 가해 주는 것이 제일 효과적이었으며 이때의 원형질체 생존율은 70% 염색율은 58%이었다. 정제한 pBin19 plasmid를 전기충격법으로 원형질체에 삽입시킨 뒤 kanamycin이 포함된 배지에서 배양하였으며 원형질체의 세포분열은 KM8P 액체배지에서 제일 높았다. 윈형질체의 최적 전기융합 조건은 교류 주파수 1 MHz를 40 V/cm에서 15 sec 동안 가한 후 직류전압 0.5 kV/cm를 $60{\mu}\;sec$ 동안 처리해 준 결과 이때의 융합율과 생존율은 각각 13%, 81%이었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제18권6호
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• pp.633-639
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• 1990

Cellulase 복합체와 xylanase를 동시에 분비하는 Pseudomonas sp. LBC 505와 CYC 10의 cellulase 유전자를 pUC19를 사용하여 E.coli에 클로닝시켰다. Congo red 염색시 노란색 환을 형성하는 대장균 형질전환에서 7.0Kb-와 4.6Kb-HindIII 단편을 함유한 재조합 플라스미드 pLC1과 pLC2를 가각 분리하였다. DNA hybridization 실험에서 pLC1 과 pLC2는 Pseudomonas sp. LBC 505와 CYC 10 유래임이 각각 밝혀졌고, Immunoassay 실험에서도 유사성이 인정되었다. pLC1을 함유하고 있는 대장균은 cellulas의 24를 세포외로 분비하였고, 효소활성은 모균주에 비해 1.4배 증가하였다. pLC1과 pLC2의 효소학적 성질도 모균주와 동일하였으며, 기질특이성과 HPLC로 유리당을 분석한 결과, 클로닝된 유전자는 endo type인 것으로 나타났다.

• Current Research on Agriculture and Life Sciences
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• 제17권
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• pp.59-63
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• 1999

벼의 엽록체 small HSP의 고온 스트레스 하에서의 기능을 밝히기 위하여 Oshsp21 cDNA를 pET 발현 vector에 도입하였다. 형질전환된 대장균 배양액에 IPTG를 첨가하여 단백질 발현을 유도시킨 다음 고온 stress 하에서의 생존율을 대조구와 비교하였다. 그 결과 대조균주의 경우 $50^{\circ}C$에서의 생존율이 크게 감소하였으나 Oshsp21이 발현된 대장균의 경우 70% 이상의 생존율을 나타내었다. 또한 대장균 단백질을 $55^{\circ}C$에서 30분간 열처리한 후, 대장균 단백질을 가용성과 비가용성 단백질로 분획한 다음, 각각의 비율을 조사한 결과, 대조균주의 경우 총 단백질의 약 60%가 비가용성 단백질로 변성되었으나, Oshsp21을 발현시킨 대장균의 경우 총 단백질의 약 35%만이 비가용성 단백질로 나타났다. 이러한 결과는 벼의 엽록체 small HSP는 세포내에서 분자 chaperone으로 기능하여 고온내성을 부여할 수 있음을 나타낸다.

• KSBB Journal
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• 제30권2호
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• pp.82-90
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• 2015

Plant cell immobilization can protect plant cells from shear forces and increase the stability of gene. An additional advantage of immobilization is the easiness for performing continuous culture with cell recycling. Therefore plant cell immobilization can overcome the limitations of plant cell applications. In addition, target protein should be selected from pharmaceutical proteins to get rid of low expression level problem. The enhanced production of human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (hGM-CSF) was investigated in immobilized Nicotiana tabacum suspension cell cultures. When the cells were immobilized in polyurethane foam, specific production of hGM-CSF was higher than that in alginate bead immobilization. Optimum continuous culture condition was the addition of 60 g/L sucrose in growth media with exchanging media every 6 day. Under the same condition, specific hGM-CSF production was 7 times higher in a 500-mL spinner flask than that in 100-mL Erlenmeyer flasks. Therefore, development of an effective immobilization process would be possible when the advantage of easy cell recycling was used. Consequently, enhanced production of target proteins could be possible in immobilized continuous cultures when the advantages of immobilization were applied.

• KSBB Journal
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• 제30권3호
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• pp.103-108
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• 2015

Production of foreign proteins by transgenic plant cell cultures has several advantages such as post-translational modification, low risk of product contamination and low-cost production and purification. However, target proteins are degraded by extracellular proteases existing in the media. A solution to this problem is the use of perfusion culture and ion exchange chromatography for the application of integrated bioprocess using in situ recovery. With this method, production of human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (hGM-CSF) was investigated in this study. First, optimization of cell concentration during the induction phase for the production of hGM-CSF was examined. As cell concentration increased, the level of hGM-CSF was decreased due to the presence of extracellular proteases. Induction using sugarfree media produced 33% more hGM-CSF. The effects of pH on the binding of hGM-CSF to cationic and anionic exchange resins were also investigated. In terms of stability, optimal pH was found to be 5~7. In the case of using buffer exchange when CM-Sepharose was used as a cationic exchange resin, optimal pH for binding was 4.8 and adsorption yield was 77%. When DEAE-Sepharose was used as an anionic exchange resin, it was 5.5 (74%). Without buffer exchange, optimal pH was 4.6 (84%). From these results, an integrated bioprocess using in situ recovery with simultaneous production and separation of foreign protein in transgenic plant cell suspension cultures was found to be feasible.

• KSBB Journal
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• 제31권4호
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• pp.284-290
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• 2016

In this research, recombinant human cytotoxic T-lymphocyte antigen 4-immunoglobulin (hCTLA4Ig) was produced by transgenic rice cells. RAmy3D promoter was used for overcome the limitation of low expression level in transgenic plant cells, and the secretion of target protein was accomplished by signal peptide. However, the RAmy3D promoter system which can be induced only by sugar starvation causes the decrease of cell viability. As a result, cell death promotes the release of protease which degrades the target proteins. The protein stability and productivity can be significantly influenced by proteolysis activity. Therefore, development of new strategies are necessary for the in situ recovery of target proteins from cell culture media. In this study, in situ recovery was performed by various strategies. Direct addition of Protein A resin with nylon bag leads to cell death by increased shear stress and decrease in production of hCTLA4Ig by protease. Medium exchange through modified flask could recover hCTLA4Ig with high cell viability and low protease activity, on the other hand, the productivity was lower than that of control. When in situ recovery was conducted at day 7 after induction in air-lift bioreactor, 1.94-fold of hCTLA4Ig could be recovered compared to control culture without in situ recovery. Consequently, in situ recovery of hCTLA4Ig from transgenic rice cell culture could enhance productivity significantly and prevent degradation of target proteins effectively.

• 한국양식학회지
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• 제20권3호
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• pp.190-193
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• 2007

대농갱이, Leiocassis ussuriensis의 유도된 자성발생성 이배체의 초기 생존율, 초기 성장 및 성비를 분석하였다. 대농갱이 자성발생성 이배체는 일반 대농갱이 이배체 대조군과 비교 시 부화 180일까지 생존 및 성장 형질에서 모두 차이를 나타내지 않았다(P>0.05). 자성발생성 이배체는 부화 10주째 암수 판별이 용이한 수준의 난모세포 발달 정도를 보였고 일반 대농갱이 암컷과 난소 발달에 있어 유사하였다. 부화 10주째 생식소 조직학적 분석 결과 일반 대농갱이 이배체 자손들은 1:1의 암수 비율을 나타낸 반면, 자성발생성 이배체 자손들은 모두 암컷으로 판별됨으로써 본 어종의 성 결정 기구는 XX-XY를 기본으로 하는 암컷 동형접합형인 것으로 나타났다.

• Journal of Yeungnam Medical Science
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• 제10권2호
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• pp.485-492
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• 1993

저자들은 최근 약 6년간 영남대학교 의과대학 부속병원에서 림프절 조직생검을 통해 진단된 괴사성 림프절염의 임상적, 병리학적 소견을 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1) 발생 연령은 20대에 가장 많았으며 평균 27세였고 남녀비는 1 : 2였다. 2) 증상은 단순 림프절 종대가 가장 많았고 동통과 발열이 동반된 예도 있었다. 3) 림프절 종대는 대부분 측부 경부에 국한되어 있었다. 4) 조직학적으로 괴사성 병변이 나타났는데 그 중 8예에서 국소적 혹은 융합성으로 완전한 조직 괴사가 나타났다. 여기에 핵 붕괴물질이 풍부하게 산재하였고 괴사 주변부에 조직 구성, 림프구성의 다양한 종류의 큰 단핵구들이 소림프구와 같이 증식하여 정상 림프절 구조가 부분적으로 소실되었으며 흔히 빈번한 유사분열을 보였고 형질세포나 중성 백혈구는 관찰되지 않았다. 이상의 소견으로 괴사성 림프절염은 특정적인 조직학적 소견을 보이는 특이한 종류의 림프절염으로 그 원인은 불확실하지만 여러가지 원인에 의해 생기는 과면역성 림프절염으로 생각된다. 이에 대해서는 이 후 광범위한 임상적 검사와 자세한 면역조직학적 검사가 필요할 것으로 사료된다.

• 한국자원식물학회지
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• 제33권4호
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• pp.398-403
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• 2020

둥근대이끼(P. platyphyllum)는 산주목이끼과 산주목이끼 속에 속하는 선류 식물이다. 중국, 일본, 유럽, 북한에 분포하고 있다. 특히, 북한 지역에는 관모봉, 금강산, 묘향산, 차일봉에 분포하는 것으로 알려져 있었으나, 남한 지역에는 2017년 전라북도 완주군 운주면 산북리 대둔산 수락계곡에 자생하고 있음이 처음 확인되었다. 식물체의 색깔은 녹색에서 암녹색이고 윤기가 난다. 줄기에는 중심속이 발달해 있다. 가지는 불규칙하고, 가지잎은 편평하게 붙는다. 잎은 난상 피침형으로 2.0~2.5 × 1.0~1.4 mm이며, 비대칭하는 것이 특징이다. 잎 중앙세포는 80~127 × 10~16 ㎛로서 형태는 장사방형이다. 본 연구에서 둥근대이끼의 형태학적 기재와 동정을 위한 주요 형태 형질의 사진, 도해 및 검색표를 제시하였다.

• 식물조직배양학회지
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• 제25권6호
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• pp.525-530
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• 1998

인삼의 뿌리절편, 줄기, 엽병에 Agrobacterium을 접종하여 고생장 모상근을 선발하고자 수행하였다. 인삼 뿌리 절편에서 A. rhizogenes R1000과 A. rhizogenes $A_4$에 의하여 모상근이 유도되었으며, 인삼의 줄기 및 엽병에서도 모상근이 유도되었다. 유도된 모상근은 rolC및 virC DNA절편의 확인으로 형질전환체임을 확인하였으며, 균이 제거된 모상근을 선발하였다. 선발된 모상근 300 세포주중 성장과 형태적 특징이 뚜렷한 11 모상근을 선발하였다. 이들 모상근은 주근이 비후된 것, 주근이 가는 것, 측근의 돌기가 많은 것, 측근의 생장이 높은 것 등의 특징을 나타내었다. 이들 11 모상근중 주근이 가늘고 측근의 생장이 왕성한 형태가 모상근의 생장이 좋았으며, 주근이 비후되고 측근의 돌기가 많은 형태는 생장이 낮았다. 본 연구에서 인삼 뿌리절편으로부터 고생장 모상근인 KGHR-1, KGHR-5, KGHR-8을 선발하였다.