PARK, Young Doo;RONIS D.H.;DUYSEN M.E.;CHENG Z.M.;LORENZEN J.H.
식물조직배양학회지
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제24권5호
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pp.313-317
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1997
ND860-2, Norchip, Russet Norkotah, Goldrush 및 Norgueen Russet 등 5개 품종의 감자 잎 조직을 감자 바이러스 Y(PVY)의 외피단백질 (CP) 유전자를 운반하는 Agrobacterium tumefaciens을 이용하여 형질전환시켰다. ND860-2와 Norchip품종과 같은 흰색 감자에서 재분화율과 형질전환율이 높게 나타났다. 형질전환체를 선발한 후 CP의 생성을 western blot으로 확인한 결과 30 kD의 밴드가 나타났다. 온실에서 재배된 형질전환체는 한 개체를 제외하고는 표현형에 있어서는 기존의 품종과 다르지 않았다. 인위적으로 감자 바이러스 Y를 감염시킨 15일 후의 검사결과 control구는 80%의 감염율을 보인 반면 형질전환체들은 38-58%의 감염율을 보였다. 30일 후의 검사 결과는 모든 5품종의 control구에서 100%의 감염을 보였으나 형질전환체는 7개체가 저항성을 보였다. 마지막 85일 후의 검사 결과 4개의 저항개체를 발견하였으며 이 개체들은 현재 계속 연구가 진행 중에 있다.
야생종 토마토의 자가불화합성에 관여하는 S RNase 유전자를 자가화합성인 재배종 토마토에 도입하여 형질전환 식물체를 만들었다. 재조합 Ti-plasmid pBI-S$_{11}$을 제작하여 Agrobacteria를 이용한 leaf disc transformation방법으로 재배종 토마토에 형질전환시켰으며, Southern분석을 통해 형질전환 식물체의 염색체 내에 자가불화합성 유전자가 안정된 구조로 도입되었는지 확인하였다. 형질전환 식물체의 화주 단백질을 이용하여 RNase활성 염색을 하여 화주 내 5단백질의 활성을 확인하였다. 또한 형질전환 식물체의 화주 단백질을 이용하여 western분석을 수행한 결과, 야생종 토마토 유래의 자가불화합성 유전자에 의해 5단백질을 정확하게 발현하는 식물체를 확인, 선발하였다. 선발된 형질전환 식물체의 화분, 화주, 화변, 잎, 줄기 등 5개의 조직을 western분석하여 5 RNase 유전자가 야생종 토마토에서와 유사한 형태로 화주조직에서만 높게 발현되며 형질전환된 재배종 토마토에서도 조직 특이적으로 발현한다는 것을 확인하였다. 위의 결과로 야생종 토마토에서 자가불화합성에 결정적인 영향을 미치는 S RNase를 재배종 토마토에 발현시켰을 때 자가불화합성을 나타내는 재배종 토마토의 표현형은 변화가 없다는 것과 어떠한 형태적인 변화도 없다는 사실을 확인하였다. 그리고 배우자체 자가불화합성 기작에는 화주쪽의 S RNase 이외에 화분쪽의 또 다른 기구가 있다는 것을 추측할 수 있었다.
중부지방에 있어서 과맥의 유용형질에 대한 유전율, 유전상관, 경로계수, 선발지수 및 유전적 진보의 선발효과를 구명코자 백동외 8품종을 공시하여 단국대학교 농과대학의 전작포장에서 실험을 실시하였던 바 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 과맥 품종군의 유전율은 간장, m$^2$당 수수는 높은 유전력을 보였으며 기타 형질은 비교적 낮았고 천립중은 매우 낮았다. 2. 일반적으로 유전상관은 표현형상관보다 높았으며 수량과 타형질과의 유전상관은 총생체중, 수중, 수중대고중비는 고도의 정상관이 있었고 간장, 수장, 1수립수, 수당불임입수와는 높은 부상관을 나타냈다. 3. 수량에 관하여는 형질을 보다 정확히 알기 위하여 경로계수를 분석한 바 총생체중, 수중대고중비 및 천립중 등이 수량에 직접적으로 영향하였다. 4. 선발효율을 높이기 위한 각 형질의 선발지수 및 수량에 대한 유전적 진보를 계산한 결과 2~3 개 형질을 대상으로 하여 Selection score가 큰 계통부터 선발해 가는 것이 시간과 노력 그리고 선발효과면에서 유리할 것으로 보였다.
본 연구는 배추에서의 저온 저항성 유전자를 개발하는데 목적이 있으며 이를 위해 먼저 저온($4^{\circ}C$) 스트레스가 처리된 내혼계배추를 대상으로 한 KBGP-24K oligo chip의 결과 [BrEMD(Brassica rapa EST and Microarray Database)]를 분석하였다. 그 결과 23,929개의 배추 unigene 중 저온 처리시 대조군 대비 5배 이상 발현이 증가하는 417개(1.7%)의 저온 반응 유전자를 1차 선발하고, 이들 중 기능이 정확히 알려지지 않았으나 완전장을 갖추고 있는 BrCSR로 명명한 유전자를 선발하였다. 이 유전자의 저온 저항성을 분석하기 위하여 형질전환용 과발현 vector인 pSL101 binary vector를 제작하여 담배에 형질전환시켰다. BrCSR이 과발현된 $T_1$ 세대 담배 형질전환체들은 PCR과 Southern hybridization 분석에 의해 선발하였고, BrCSR의 기능은 저온 처리 시 유전자의 발현 수준 분석과 표현형 검정을 통해 확인하였다. Quantitative real-time RT-PCR과 Northern blot hybridization 분석 결과, 형질전환 담배에서 BrCSR의 발현이 대조군보다 약 2배 정도 높게 발현되었으며 실제로 $4^{\circ}C$ 처리 후 표현형 분석에서 BrCSR이 과발현된 형질전환체들이 대조군보다 우수한 저온 저항성을 보여 주었다. 위 결과들에 근거하여 BrCSR 유전자가 저온 환경 하에서 식물의 생장과 저항성 향상에 중요한 역할을 담당하고 있음을 확인할 수 있었다.
양적형질 유전자 좌위 (QTL)의 탐색과 이들의 발현 양상 규명을 위해 Berkshire종과 Yorkshire종 간의 교배를 통해 생산된 F$_2$ 실험집단에서 regression interval mapping이 이루어졌다. 모두 525마리의 F$_2$ 자손들에서 일당 증체량, 평균 등지방 두께, 배장근 단면적이 표현형으로 조사되어 분석에 이용되었으며 모돈의 번식능력에 관련된 QTL 존재 여부 추정을 위해 간접 형질로 인정되고 있는 생시체중과 이유 시 체중을 분석에 포함하였다. 양적형질의 분리 여부를 추론하기 위하여 돼지의 2번 염색체에서 8종의 microsatellite 표지인자가 선택되어 유전자형이 조사되었다. 각각의 유전적 모델에서 산출된 통계량으로부터 QTL 존재 여부와 특정 QTL 발현 양상에 대한 여부를 나타낼 수 있는 인정되는 수준의 type I 오차율을 제어할 수 있는 임계값 (threshold)을 permutation test에 의해 제시하였다. QTL의 존재와 그 QTL의 Imprinting 여부는 부계와 모계를 통해 원가계 1세대의 대립유전자가 전달되는 과정에서 발현되는 특성을 분리시키는 통계적 의형을 설정하여 검정 통계량을 산출하였다. 분석에 이용된 3가지 형질과 연관된 3종류의 QTL 존재 가능성을 돼지의 2번 염색체에서 확인하였으며, 이들 중 평균 등지방 두께와 배장근 단면적에 각각 영향을 미칠 것으로 추론된 2종류의 QTL 발현은 정상적인 Mendelian 유전양식을 따르지 않고 imprinting된다는 증거를 얻어냈다. 또한 이들 imprinting되는 QTL은 이미 imprinting 표현 양식을 가진다고 알려진 IGF II 유전자의 위치와 거의 동일한 염색체강의 지점에서 부계로 전달되는 QTL만이 발현되는 특징을 보이는 것으로 밝혀졌다. 한편 Mendelian 모형과 imprinting 모형 모두에서 유의적인 임계값 이상을 보이는 검정 통계량이 산출된 일당 증체량 연관 QTL은 두 모형간의 적정성 분석을 위한 검정을 퐁해 Mendelian 양식을 따른 것으로 최종 확인되었다.
본 연구에서는 나일틸라피아의 초기성장에 대한 유전적 개량의 가능성을 알아보기 위해 60일령 나일틸라피아를 대상으로 체고(BH1, BH2)를 비롯한 8 가지의 계측형질에 대해 형매분석 (sib analysis)에 의하여 유전모수를 추정하였다. 각 계측형질에서의 sire 유전율 ($h^2_s$)은 0.08$\~$0.70, dam 유전율 ($h^2_d$)은 0.22$\~$0.41, 전형매 유전율 ($h^2_{s+d}$)은 0.18$\~$0.55의 범위였다. SL의 경우 각각 0.13, 0.22 및 0.18로 추정되었다. 한편, 본 연구에서 계측형질로 채택한 BH2의 "$h^2_s$, $h^2_d$ 및 $h^2_{s+d}$은 각각 0.08, 0.38 및 0.23으로서 새로운 선발 대상 형질로의 활용 가능성을 보였다. 또한 이들 8 개 계측형질간의 표현형상관 및 유전상관을 추정하였는데, 표현형상 관계수는 0.86$\~$0.97의 범위였고, 유전상관계수는 0.90$\~$0.99로 나타났다. 앞으로 더욱 정확한 유전모수의 추정을 위한 지속적인 연구가 필요하나, 본 연구 결과 개체선발에 의해서 나일틸라피아의 초기성장에 대한 유전적 개량의 가능성을 확인할 수 있었다.
본 연구에서는 2000년부터 2008년 사이에 출생한 Duroc종, Landrace종 및 Yorkshire종 종돈의 총 31,455두의 농장검정 자료를 이용하여 다형질 동물 모형과 다변량 모체효과 모형에 의한 돼지 경제형질의 유전적 분산성분을 추정하였다. 품종별 조사된 각 형질에 있어서 다변량 모체효과 모형을 이용하여 추정된 상가적 효과에 의한 유전력이 모체효과에 의한 유전력보다 모두 높게 나타났으며, 다형질 동물 모형에서 상가적 효과만 고려했을 때의 유전력이 다변량 모체효과 모형에서 추정된 상가적 효과의 의한 유전력보다 대부분 높게 추정되었다. 다변량 모체효과 모형을 이용하여 추정된 모체효과에 의한 육종가와 표현형가와의 상관관계에 있어서 대부분 낮은 정(+)의 상관이거나 강한 부(-)의 상관관계를 보여 품종별 각 형질에 있어서 모체효과를 적절히 고려하여 육종가와 표현형의 상관관계를 높인다면 보다 나은 개량을 도모 할 수 있을 것으로 사료된다.
본 연구는 1990년 1월부터 2006년 12월말까지 지난 17년간 과천경마공원에서 경주한 경주마 9,934두의 주파기록, 총 208,043개를 이용하여 속도형질들에 대한 경주년도별 개량 추세를 분석하였다. 속도형질로는 반복 주파기록, 우승마 주파기록, 거리별 연간 최고 주파기록 세 가지를 분석하였으며, 이들에 대한 유전율은 각각 0.288, 0.275와 0.341로 추정되었고 반복율은 각각 0.502, 0.475와 0.496이었다. 경주속도 형질들에 대한 연간 표현형 개량량은 -0.115 ~-0.148초의 범위를 나타내었다. 반면 반복 주파기록에 대한 연간 유전적 개량량은 -0.027초 추정되었으나 나머지 형질들에 대해서는 유의성이 인정되지 않았다. 따라서 더러브렛 경주마의 개량형질로는 반복 주파기록을 이용하는 것이 바람직할 것으로 생각된다.
구기자 육종의 수량형질에 대한 선발효율을 높이기 위한 기초연구로서 유전력, 표현형 상관, 유전상관, 환경상관 및 경노계수에 대해 연차간 유전통계량을 분석한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 포기자의 수양형질중 생과중, 건과중 및 생근중의 유전분산이 가장 크고 년차간의 변동이 적었으며 기타의 형질도 유전분산이 환경분산보다는 컸고 연차간변동은 적었다. 2. 3개년간 전품종들을 Pool로 한 분석에서 연차와 품종 및 이들의 교호작용은 건과율 및 건근중률을 제외한 모든 수양형질에서 고도의 유의차가 인정되었으며 연차간변동도 적었다. 3. 광의의 유전력에서는 생과중, 건과중, 생근중, 건근중 및 지골피수량양에서 매우 높았고 연차간변동도 적었다. 4. 유전상관에서는 생과중과 건과중, 생근중과 지골피, 생근중과 지골피비율, 건근중과 지골피간에는 고도의 정의 상관으로 유의성도 높고 연차간의 변동도 적 었다. 5. 경노계수의 연차간변동은 대체로 적었으나 3개년간 모두 지골피수량에 직접, 간접으로 효과를 크게 미치는 형질은 생근중이었다.
식물생명공학 연구에 있어서 모델 식물인 Arabidopsis thaliana (애기장대)와 아주 유사한 염생 식물인 salt cress (Thellungiella halophila 또는 Thellungiella parvula)는 고염 스트레스에 대하여 강한 내성을 가지고 있다. 본 연구에서는 고염에 저항성을 가지는 유용유전자를 선별하기 위하여, 200 mM NaCl을 처리한 T. halophila 또는 T. parvula 식물로부터 mRNA를 분리하여 cDNA library를 작성하였다. Full length cDNA library를 Agrobacteria-methods 형질전환 방법에 필요한 binary vector pool을 작성하고 Arabidopsis에 형질전환 시켰다. 형질전환되어진 Arabidopsis를 항생제 Basta 선별을 통하여 형질전환체 pool을 구축하였다(305,400 종자). 이와 같은 방법을 통해 구축 되어진 pool중에서 168,500 종자를 이용하여 고염 스트레스 조건하에서 종자 발아율과 뿌리 생장 촉진되는 현상이 나타나는 내염성 형질전환체를 1차 선별하였다(7,157 개체; 4.24%). 1차 선별된 형질전환체 중에서 1,551개체를 이용하여 2차 선별을 수행하여 내염성 형질전환체 165 개체를 확보하였다(10.6%). 선별된 형질전환체 중 대부분 개체는 고염 스트레스에 대응하여 종자 발아 및 뿌리 생장 모두 야생형보다 촉진된 표현형을 보였다. 그 중 몇 몇의 형질전환체는 야생형에 비하여 특이적인 기관 발달 현상이 나타났다. 예를 들면, 꽃과 줄기의 발달이 야생형과는 다른 표현형을 보이는 형질전환체가 선별되었다. 이렇게 스트레스에 내성을 가지는 형질전환체로부터 유전자 분리 방법을 통하여 해당 유용유전자를 확보할 수가 있다. 본 연구에서는 향후 halopyte 식물체를 이용하여 고염 뿐만 아니라 다양한 환경스트레스(건조, 냉해, 고열, 호르몬 등) 신호전달에 관여하는 유용유전자를 보다 쉽게 확보하는 방법을 제시함으로서, 환경재해극복에 관여하는 신호전달 기작을 보다 쉽게 이해할 수 있을 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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