This study was conducted to elucidate the most appropriate method to obtain auxotrophic mutants from Valsa ceratosperma, the causal fungus of apple canker, which may be used as a gene marker in detecting the transfer of the factors of avirulent strains to virulent strains. Among the 3 kinds of synthetic media tested, each have two formula for minimal and complete, the medium which has been used in study of Endothia parasitica (E. P medium) was turned out to be most appropriate for the growth of V. ceratosperma. A medium for single colony formation from pycnidiospore of this fungus was developed by adding 0.5% L - sorbose to the E. P minimal medium. The period of incubation in dark for preventing the photoreactivation after U. V irradiation was estimated as about 60hrs at which most of the spores become binucleate. Largest number of putative auxotrophs were obtained at about 50second of irradiation to the spores smeared on the medium for single colony formation, at which the survival rate of spores was 5 to 6 percent. With these method developed in this experiment, 161 isolates of putative auxotrophs were detected among which the nutrient requirement for 10 isolates were determined. Five out of 10 mutants were still virulent to apple tree and all but one could not sporulate.
Penicillium oxalicum (PENOX) has shown the potential as a biocontrol agent(5CA) for control of a weed, clover(Trifolium repens L.) in grass plots. The bioherbicidal activity may be due to germinative and growth capacities and substrate availability of the agent over a range of environmental factors. The influences of different water activities($0.94{\sim}0.995\;a_w$) and temperatures($18{\sim}30^{\circ}C$) on mycelial growth, conidial germination, sporulation oil 2% MEA(malt extract agar) adjusted to different water activities with glycerol, and carbon source utilization using BIOLOG GN MicroPlate were determined in vitro. Decreases in $a_w$ on MEA caused a reduction in mycelial growth and conidial germination depending on temperature. The mycelial growth of PENOX was greatest at $30^{\circ}C/0.995\;a_w$. At some lowered water activity($0.97\;a_w$), the growth was similar between 25 and $30^{\circ}C$, and considerably decreased at lowered temperature($20^{\circ}C$). The germination rate was also greatest at $30^{\circ}C/0.995\;a_w$. Lag phase times for PENOX at $18^{\circ}C$ on MEA were >6hrs at tile whole $a_w$ level tested, and at 18 and $25^{\circ}C$ they were >18hrs and >12hrs at $0.94\;a_w$, respectively. However, its sporulation was some better at $0.97\;a_w$ than $0.995\;a_w$ or $0.94\;a_w$, and better at $20^{\circ}C$ than $30^{\circ}C$. In contrast, the number of carbon sources(niche size) utilized by PENOX varied with $a_w$ and temperature. Under some water stress condition($0.95\;a_w$), the agent utilized smaller number of carbon sources than $0.995\;a_w$ depending on temperature. The niche size at 0.995 and $0.95\;a_w$ were highest at $25^{\circ}C$, and showed 86 and 65, respectively. At $30^{\circ}C$, the niche size at 0.995 and $0.95\;a_w$ showed 84 and 50, respectively. There was no carbon source utilized by PENOX at $0.90\;a_w$ regardless of temperature. These information of tile fungal ecophysiology will be useful for the effective development of BCA.
Kim, Jae-Jeung;Kim, Joon-Tae;Park, Sung-Woo;Park, Eun-Suk;Kim, Heung-Tae
The Korean Journal of Pesticide Science
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v.7
no.3
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pp.159-168
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2003
With microtiter plate, the assay method was developed for detecting the fungicidal activity of new compounds against spore germination, spore adhesion and mycelial growth of Colletotrichum sp. JC24 cal1Sing red pepper anthracnose. Also, the effects of some commercialized fungicides on fungal development like above mentioned were investigated by measuring the optical density of mycelia grown into wells of microtiter plate. For the standardization of assay method, some factors, such as the treatment of MTT and/or propanol, inodulum density and incubation period, affecting on mycelial optical density were investigated. For obtaining precise and consistent mycelial optical density, it was necessary the treatment of MTT for 12 hrs and propanol for 1 hr. inoculum density adjusted to $1\times10^5$ spores/mL and incubation period for 36 hrs at $25^{\circ}C$. For fungicidal activities, 6 protective fungicides, 6 ones inhibiting sterol biosynthesis, and one inhibiting respiration were used in this study. While mancozeb, chlorothalonil and dithianon among 6 protective fungicides inhibited strongly spore germination, adhesion, and mycelial growth at $6.25{\mu}g/mL$, propineb, iminoctadine and fluazinam inhibited intermediately spore germination and mycelial growth at $100{\mu}g/mL$. Washing above 3 fungicides with new PD broth, their activity against spore adhesion decreased. With hexaconazole, tebuconazole and myclobutanil, the tendency of the activity against fungal differentiation of the early infection stage was similar to the latter group of protective fungicides, showing the decrease of the inhibitory activity against spore adhesion by washing 2 hrs after incubation. However, kresoxim-methyl inhibited spore adhesion distinctly, depending on the applied concentrations. Based on these results, it might be able to assess the fungicidal activity of many compounds against spore germination, adhesion and mycelial growth by the use of microtiter plate in vitro. Using the assay developed in this report, it was possible to investigate the inhibitory activity of some commercialized fungicides, too.
Electron beam (EB) irradiation was tested to determine the dose required to eradicate plant pathogens, such as Botrytis cinerea and Agrobacterium rhizogenes, from the infected seeds without affecting the germination rate of the irradiated vegetable seeds, including crown daisy, cucumber, hot pepper, green onion, leaf lettuce, and radish seeds. EB irradiation of 1.5 kGy and 2 kGy was sufficient to kill 100% of hairy root disease bacteria and gray mold conidia, respectively. EB irradiation showed no effect or minimal effect on the germination rate of the crown daisy, cucumber, green onion, and radish seeds. However, the germination rate of the hot pepper and leaf lettuce seeds was significantly reduced by using 2 kGy of EB irradiation. Difference in susceptibility to EB irradiation appears not to be related to the weight of each seed, but to the intrinsic characteristic of each plant. Conclusively, EB irradiation might be a useful way to decontaminate crown daisy, cucumber, green onion, and radish seeds.
Kyeong Yoon Kwak;Joo Yeon Youn;Hyun Jung Kim;Kyong Ha Han;Zhun Li;Hyeon Ho Shin
Korean Journal of Environmental Biology
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v.40
no.4
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pp.387-397
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2022
The germination characteristics of the resting cysts of Pheopolykrikos hartmannii collected from the southern coastal sediments of Korea were studied at different temperature conditions, and the morphology and phylogeny of the germlings were examined. The resting cysts of Ph. hartmannii were round and characterized by a red accumulation body and many arrow-like spines and could germinate at temperature of 10 to 30℃. High germination rates (>90%) were observed at 15 and 20℃, indicating that the resting cysts could act as seed populations for the bloom initiation of Ph. hartmannii in Korean coastal waters in early summer or early fall. The morphology of the germlings was generally consistent with the previous description, and an apical groove characterized by a fully enclosed loop was observed. Phylogenetic analysis based on large SubUnit (LSU) rRNA gene sequences revealed that the germlings shared an identical sequence with the Korean and American isolates of Ph. hartmannii and was a sister clade of Polykrikos species.
Proceedings of the Korean Vacuum Society Conference
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2013.02a
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pp.519-519
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2013
본 연구에서는, 전기적 충격이 없고 넓은 면적을 동시에 처리할 수 있는 형태의 유전체 장벽 방전(DBD: Dielectric Barrier Discharge)을 이용한 대기압 저온 플라즈마 장치를 제작하고 이를 이용하여 빵 곰팡이(Neurospora crassa) 살균에 대한 기본 분석을 하였다. 실험에 사용한 저온 대기압 면방전 플라즈마의 파워는 사인파 교류전압을 인가하여, 방전전압은 1.4~2.3 kV, 방전전류는 20~30 mA의 값을 가지며, 전압과 전류의 위상차는 약 80도의 기울기 차이가 난다. 이때의 출력은 약 4 W를 가지며, 공랭식 쿨러를 이용하여 유전체의 열을 배출하였다. 시료대의 온도 측정결과 방전과 동시에 쿨러를 작동할 경우 최대 10분에서 37도를 넘지 않았다. 장치에서 발생하는 플라즈마에 의한 O3의 양은 플라즈마 발생부로부터 10 mm 이내에서 약 25~30 ppm 이 측정되었으며, NO나 NO2 는 거의 검지되지 않았다. 증류수(Deionized water)속에 담긴 빵 곰팡이(Neurospora crassa) 포자를 면방전 플라즈마 발생장치로 처리하였을 때, 포자의 발아율은 처리시간 및 출력파워가 증가함에 따라 급격히 감소하였으나 VM (Vogel's Minimal) 배양액에 넣고 플라즈마 처리를 한 경우에는, 증류수의 결과와 달리 살균효과가 미비함을 보였다. MTT 측정법 또한 같은 경향성을 보였으며, 이를 통해 포자를 둘러싸고 있는 환경이 플라즈마의 살균효과에 영향을 미치는 것으로 보인다. 본 실험을 통해, 유전체 장벽을 이용한 면방전 플라즈마 발생장치가 플라즈마 제트(jet)와 달리 직접적인 플라즈마 접촉 없이도 미생물 살균이 가능하다는 것을 보았으며, 처리대상의 생체용액과 같은 주변 환경에 영향을 받음을 알 수 있었다. 또한 면방전 플라즈마 장치로부터 발생하는 O3과 같은 활성종들이 빵 곰팡이의 비활성화에도 역할을 할 수 있음을 알 수 있었다.
1994~1995년 사이에 대전, 공주, 논산, 부여와 김해 등지에서 채집한 병든 딸기, 토마토, 오이에서 총 1,504 균주의 잿빛곰팡이병균을 분리하여 10 $\mu\textrm{g}$/ml의 약제를 넣은 PDA 배지에서 배양하면서 약제반응을 조사한 결과, benomyl에 대하여는 1,147(76.3%)균주, procymidone에 대하여는 614(40.8%)균주, prochloraz에 대하여는 189(12.6%)균주가 저항성으로 나타났다. UV 처리 및 약제 배지에서의 누대배양을 통하여 prochloraz저항성 균주를 선발하였는데, 이들의 생육 억제 최소 농도(MIC)는 8 $\mu\textrm{g}$/ml 이상이었고, 감수성균의 MIC는 2 $\mu\textrm{g}$/ml 이하였다. 병원력, 포자 발아율, 균핵형성과 같은 적응력과 관련된 생물학적 특성 비교에서 저항성 균주들은 감수성 균주보다 열등하거나 비슷한 정도로 나타났다.
This study was conducted to investigate in vitro mass propagation methods suitable for each growth stage of A. aristata (G. Forst.) Tindale, from spore germination to sporophyte formation. Among spores germinated in $1/8-1{\times}MS$ medium and Knop medium, Knop medium yielded the highest germination percentage (87.1%). We cultured prothalli obtained from germinating spores for 8 weeks on media with different concentrations of sucrose and active carbon, as well as different concentrations and ratios of nitrogen, to select a suitable growth medium. A. aristata (G. Forst.) Tindale prothalli grew most actively in MS medium with 3% sucrose and 20 : 40 mM of $NH_4Cl$ and $KNO_3$ (total concentration of 60 mM). We investigated sporophyte formation according to soil type, finding that bedding soil mixed with perlite at a 2 : 1(v / v) ratio yielded the highest number of sporophytes per pot ($73.8/7.5{\times}7.5cm\;pot$). By contrast, when peat moss was used alone or mixed with other substrates, prothallus development and sporophyte formation were suppressed. Therefore, the most effective propagation method for A. aristata (G. Forst.) Tindale is to grow prothalli in MS medium and to induce sporophyte formation in a mixture of bedding soil and perlite (v / v = 2 : 1).
Attempts were made to control Diatrype stigma occurred on the bed-log of Shiitake using wood vinegar, Pinus koraiensis extract, Piper nigrum extract, and fungicides. Mycelial growth of D. stigma was inhibited completely at 35,000 ppm and no ascospore germinated at 25,000 ppm wood vinegar. Inhibition rates of Pinus koraiensis extract (200 ppm), and Piper nigrum extract (1,000 ppm) to ascospore germination were 98.9% and 95.9%, respectively. In fungicide selection, minimum inhibitory concentration (MIC) of benomyl, carbendazim, and thiabendazole ranged $0{\sim}0.4\;{\mu}g\;a.i/m{\ell}$. Difenoconazole at $0.08\;{\mu}g\;a.i/m{\ell}$ inhibited 98.9% of ascospore germination. Inhibition efficacy of fungicides was not highly variable among the low-, middle-, and high-temperature type strains of shiitake. Benomyl, carbendazim, thiabendazole and thiophanate-methyl could not suppress the mycelial growth of Shiitake. Tebuconazole at $0.4\;{\mu}g\;a.i/m{\ell}$ suppressed 80% of the mycelial growth and it was the highest inhibition rate among the fungicides. In field trials, wood vinegar, Pinus koraiensis extract, Piper nigrum extract, and fungicides were sprayed on the bed-logs before or after D. stigma produced pycnidia. Wood vinegar at 150,000 ppm concentration, showed control effect of 72.7% in the treatment before pycnidiospore formation. On the other hand, 70,000 ppm wood vinegar and 1,000 ppm of thiophanate-methyl showed control effects of 58.1% and 52.3% in the treatment after pycnidiospore formation.
This study was conducted to obtain basic information needed to develop the effective weed control method by using thermal weeder which uses LPG as fuel. For survey of weed distribution in herb field, weed species were investigated at two kinds of herb field of Codonopsis lanveolata and Aster scaber located in Hoengseongkun and Hwacheonkun, Kangwondo. In Codonopsis lanveolata field, Digitaria sanguinalis and Persicaria viridis L were dominated. In Aster scaber field, Digitaria sanguinalis and Erigeron canadensis were dominated. In general, Grasses weeds in herb were more dominated than other broadleaf and Cyperaceae weeds. The treatments of $H_2SO_4$ in weed seeds were more effective for germination of several weeds, compared with that nontreated weed seeds. However, the rate of germination differed depending on weed species and tereatment time of $H_2SO_4. Also, viability of weed seeds was significantly affected by irradiation time and temperature. As the temterature and treatment time of irradiation increased, the rate of germination was decreased.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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