생체내 부정적 영향을 미치는 물질로 알려진 과산화지질의 생성을 억제하는 물질로서 지질대사 개선작용, 간보호작용, 혈소판응집능 억제작용 등 생체내 지질과산화 현상과 밀접한 상관성을 가지고 있을 것으로 사료되는 일련의 생리활성이 확인되었으나 아직 항 과산화지질 활성이 검토 보고된 바 없는 Brazilin 및 그 hydroxy 유도체인 hematoxylin을 대상으로 생체내 지질과산화 유도제로 $CCl_4$와 ethanol을 사용하여 지질과산화 억제효능 및 in vitro에서의 효소적, 비효소적 지질과산화에 대한 억제효능을 검토하였다. Brazilin 및 hematoxylin이 $CCl_4$로 유도된 과산화지질의 억제효과를 보면 간 homogenate에서 각각 90%, 94%, mitochondria 분획에서 각각 68%, 82%, microsome 분획에서 각각 65%, 81%의 억제효과를 보였다. 이에 반해 혈장에서의 억제효과는 각각 37%, 68%로 간에서 낮은 억제효과를 나타내었으나 이 두 물질은 간 뿐만 아니라 혈장에서도 과산화지질 억제효과가 유의성 있게 나타났다. Ethanol로 유도된 과산화지질의 억제효과를 보면 간 homogenate에서 각각 93%, 99.8%, mitochondria 분획에서 각각 74%, 98%, microsome 분획의 경우 각각 70%, 94%의 효과를 보였다. 이에 반해 혈장에서의 억제효과는 Brazilin 및 Hematoxylin이 각각 43%, 80%로 나타났다. 간조직중에서는 Brazilin과 Hematoxylin이 유사한 수준의 지질과산화 억제활성을 나타내고 있으나 혈장 과산화지질치는 현저한 차이를 나타내고 있어 Brazilin과 Hematoxylin은 간으로부터 혈액중으로의 지질의 방출에 상이한 정도로 영향을 미치거나 순환지질 기질의 보호에 의한 지질과산화 억제효과에 차가 있거나 혹은 두 가지 인자의 복합적인 작용에 의한 것으로 추정할 수 있다. 세포하수준에서의 항 지질과산화 활성을 알아보기 위해 실시한 간 misosome 및 mitochondria 분획에 대해 검토해 본 결과 양분획 모두에서 Hematoxylin이 Brazilin보다 강한 항산화 활성을 나타내었고 저지율은 양분획에서 유사한 수준이었다. Brazilin 및 hematoxylin이 효소적 지질과산화 반응인 NADPH 유도 지질과산화 반응에 미치는 영향을 검토한 결과 Brazilin의 경우 88.5%, Hematoxylin의 경우 91.0% 억제효과를 나타내었고 비효소적 지질과산화 반응인 ascorbate 유도 지질과산화 반응에서도 Brazilin이 75.7%, Hematoxylin이 81.9%의 지질과산화 억제효과를 나타내었다. 위의 결과에서 지질과산화 억제효과는 주로 자체의 항산화 작용에 의하나 microsome 약물대사활성에 의한 효소적 과산화 현상에도 억제작용이 있는 것으로 추정된다.
과산화지질을 급여한 흰쥐에서 갈근 추출물이 체지질구성, 간장기능 및 항산화능에 미치는 영향을 검토했다. 혈장 총콜레스테롤량 및 혈장 중성지질량은 과산화지질첨가군 모두가 정상군 보다 증가하였으나 갈근추출물 첨가에 의해 하락하여, 대조군보다 낮은 수치를 보였다. 혈장 HDL-cholesterol량은 갈근추출물 첨가군이 대조군 보다 높은 경향을 나타내었으나 유의한 차이를 나타내지는 않았다(P>0.05). 간장의 총콜레스테롤량은 전 처리군에서 유의한 차이를 나타내지 않았으며, 중성지질량은 정상군보다 과산화 지질처리군 모두가 높은 수치를 보였다. 그러나 과산화지질 처리군 간에서는 갈근 처리군들이 대조군보다 낮은 경향을 보였다. 혈장 및 간장 내 TBARS량은 과산화지질 처리군 모두가 정상군보다 높은 값을 보였다. 그러나 과산화지질첨가군들 간에서는 갈근 처리군들이 대조군보다 낮은 경향을 보였다. 혈장 GOT 및 GPT의 활성치는 과산화지질첨가군들이 정상군보다 높은 수치를 보였으나 갈근처리에 의해 하락했다. 간장 GSH-Px, SOD 및 CAT활성치는 과산화지질 첨가군 모두가 정상군보다 낮은 값을 보였으나 과산화처리군 간에서는 갈근처리군이 대조군보다 높은 값을 보였다.
목적 : 약침액(藥鐵液)의 지질과산화 예방 및 cytocome P450과의 상호 작용에 있어서 대계의 역할은 과거 연구가 거의 없었다. 따라서 본 실험에서는 대계 약침액이 지질과산화를 예방하고, 심혈관계질환 유발에 밀접한 연관이 있는 cytochrome P450의 직접적인 저해 효과를 검토 하고자 한다. 방법 : 대계 약침액이 지질과산화를 억제하는 정도를 평가하기 위하여 세포막을 구성하는 불포화지방산의 일종인 linoleic acid를 대상으로 지질과산화 진행 시간과 대계 약침액의 농도에 의존적인 저해 효과를 실험하였다. 또한 실험쥐의 간조직을 이용하여, 강제적인 과산화를 유도한 후 이를 방어하는 효능을 검토하였다. 그리고 cytochrome P450을 구성하는 그룹의 1A1, 1A2 및 2E1의 활성을 각각 EROD, MROD, p-nitrophenol, aniline 방법으로 측정하였다. 결과 및 결론 : 대계 약침액은 세포막 구성의 불포화 지방산인 linoleic acid의 산화를 시간 및 처리 농도에 의존적으로 억제하였고, 실험쥐의 조직 과산화를 유의성 있게 저해하였다. 또한 aryl hydrocarbon receptor (AHR)을 활성화 시켜 polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs)에 의한 심혈관계 질환 유발 인자로 알려진 cytochrome P450 1A1 및 1A2의 발현을 일부 저해하였으며, 특히 체내에 흡수된 알콜 대사에 관여하는 P450 2E1을 강하게 억제 시켰다.
본 연구는 지질의 과산화에 대한 항산화 효과를 조사하기 위하여 엉겅퀴(Silybum marianum)로부터 silymarin 및 silybin을 정제하여 실험하였다. Silymarin 및 silybin은 xanthine oxidase system에서 superoxide anion의 생성을 억제하였다. 쥐의 간 mitochondria에서는 silymarin 및 silybin은 reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate(NADPH)에 의해 효과적 또는 ascorbic acid 또는 Fenton's reagent에 의하여 비효소적으로 유도되는 지질의 과산화를 억제하였다. 또 mitochondria의 지질과산화도 silymarin 및 silybin에 의하여 억제되었고 NADPH 의존 cychrome P-450 reductase에 의한 Fe2+의 산화도 silymarin 및 silybin에 의하여 억제되었다. Silymarin 및 silybin은 microsome의 효소 시스템 및 linoleic acid hydroperoxide induced peroxidation system에서 지질의 과산화의 연쇄반응에서 유리기의 억제효과가 있었다.
고려인삼에서 분리한 폴리아세틸렌 성분인 파낙시돌, 파낙시놀과 파낙시트리올의 사염화탄소로 유도된 마우스와 흰주의 지질과 산화와 효소적 또는 비효소적으로 유도된 시험관내 과산화 지질 형성에 미치는 영향을 관찰하였다. 정상 또는 사염화탄소 처리된 마우스와 흰쥐에 대한 폴리아세틸렌의 효과를 혈청과 간 과산화 지질수준과 혈청효소 (GOT, GPT, LDH) 활성을 측정함으로써 관찰하였다. 간 마이크로좀 내 cytochrome P-450 함량과 aniline hydroxylase와 aminopyrine demethylase 활성도 측정되었다. 정상 마우스에 폴리아세틸렌을 처리한 경우 파낙시놀의 경우를 제외하곤 간과 혈청의 과산화 지질 형성과 혈청효소들의 활성에 변화가 없었으며, 파낙시놀은 간의 지질 과산화를 억제하였다, 폴리아세틸렌 성분들은 사염화탄소로 유도된 간의 과산화지질형성에 대한 보호작용을 나타내었고, 혈청지질과산화 수준을 낮추었다. 또한 사염화탄소로 유도된 LDH의 혈액내 유출에 대한 보호작용이 있으나, 혈청 GOT와 GPT 수준엔 영향을 주지 않았다. 사염화탄소는 cytochrome P-450 함량과 aniline hydroxylase, aminopyrine demethylase 활성을 낮추었으며, 이 경우 폴리아세틸렌은 효과를 나타내지 못하였다. 반면, 사염화탄소 없이 폴리아세틸렌만 처리한경우, 파낙시돌과 파낙시놀은 aniline hydroxylase를 세폴리아세틸렌성분은 aminopyrine demethylase를 유도하였으며, cytochrome P-450엔 영향을 주지 않았다. 시험관내 간 마이크로좀의 지질 과산화는 폴리아세틸렌 첨가시 농도에 비례하여 억제되었다.
솔잎분말이 과산화지질을 급여한 횐쥐의 혈장 및 간장지질구성과 항산화능에 미치는 영향을 검토했다. 일일 식이섭취량은 정상군을 비롯한 과산화지질처리군 모두에서 유의한 차이를 나타내지 않았다. 일일체중증가율 및 식이효율은 과산화지질처리군 모두가 정상군보다 높았으나, 대조군과 솔잎처리군 간에는 유의한 차이를 나타내지 않았다. 혈장 총콜레스테롤량은 과산화지질처리에 의해 증가하였으나, 솔잎 처리에 의해 감소되었다. 혈장 HDL-cholesterol량은 솔잎처리군에서 높은 경향을 나타내었다. 혈장 중성지질량은 처리군간에 유의한 차이를 나타내지 않았다. 간장의 총콜레스테를량과 중성지질량은 과산화지질처리군에서 증가하였으나, 솔잎처리에 따른 유의한 차이는 볼 수 없었다. 혈장 및 간장내 TBARS량과 혈장 GOT 및 GPT의 활성치는 과산화지질처리군에서 증가하였으나, 솔잎처리에 의해 감소되었다(p<0.05). 간장 glutathione peroxidase 활성치는 솔잎처리에 의해 증가하는 경향을 보였으나, 대조군과 유의한 차이를 나타내지는 않았다(p>0.05).
본 연구는 산림환경이 인체 내 과산화지질 농도 변화에 영향을 줄 수 있는지 확인하고, 산림치유 효과 측정을 위한 생리적 지표로써 과산화지질의 활용가능성을 검토하고자 하였다. 피험자 29명을 대상으로 도시지역인 제주도의 제주시청 앞 인도와 산림지역인 삼나무 숲길에서 심리적 지표인 기분상태척도와 생리적 지표인 과산화지질수준 변화를 걷기 전후에 분석하였다. 도시지역에 비해 산림지역에서 기분상태척도의 총기분장애점수가 유의하게 낮아져 심리적으로 안정되는 효과를 보였다. 또한 과산화지질 수준은 도시지역에서 2.9에서 3.5 수준(5점 수준, 만점)으로 유의하게 높아졌고, 산림지역에서는 2.4에서 1.9 수준으로 낮아지는 경향을 보였는데, 위와 같은 결과는 과산화지질이 단기간 환경노출에 의한 인체에 미치는 영향을 파악하는데 적합한 지표라는 것을 보여준다. 산림과 도시에서 대기환경 및 심리적 안정도가 달라 과산화지질 수준의 변화 경향도 서로 다르게 나타난 것으로 보인다. 향후 연구에서는 장기간의 환경노출이 인체에 미치는 영향을 파악하기 위한 생리적 지표로써 과산화지질의 적합성을 분석하고, 새로운 생리적 지표를 지속적으로 발굴하는 것이 필요하다.
생체막의 주요 구성성분인 인지질의 2번 위치에 결합한 불포화지방산은 각종 전이금속이나 각종 활성산소들의 공격을 쉽게 받아 지질과산화반응이 일어나서 생체에 유독한 화합물을 생성하게 된다. 생체는 이러한 기구의 해독을 위하여 크게 2가지 방어기전을 갖고 있다. 즉 Vitamin- C, $\alpha$-tocopherol, flavonoid, SOD, catalase 등과 같이 생성된 활성산소를 제거시키는 기구와. 활성산소에 의해 생성된 과산화물을 제거시키는 기구로 glutathione peroxidase (GPX)가 알려졌으며 GPX에 의해 독성이 낮은 수산화물까지 환원시키는 기구가 보고되었다. 그러나 인지질의 과산화물 그대로는 GPX의 기질이 쥘수 없으므로, 산화된 지방산을 절단하는 효소에 대한 기구의 해석이 요구되고 있다. 최근 여러질병에 관련되어 있는 인지질 2번위치의 지방산을 분해하는 phospholipase $A_2$ (PLA$_2$)가 과산화지질의 분해에 관여한다는 주장이 제기되었다. 따라서 본 연구에서는 rat liver microsome에 $CCl_4$투여로 일어나는 과산화반응에 있어서 PLA$_2$의 역할을 규명하기 위하여 본 실험을 행하였다.
본 연구는 streptozotocin 유발 당뇨쥐에서의 MFO계활성 변화 및 이에 지질과산화를 관찰하고자 체중이 140kg 내외의 Sprague-Dawley 종 흰쥐 숫컷을 대조군과 당뇨 유발 시험군으로 나누어 4주간 사육하였다. 당뇨군은 STZ로 당뇨를 유발시켰으며 당뇨 유발 6일후 쥐를 희생기켜 간조직 및 폐조직 microsome 중의 cytochrome $P_{450}$ 및 cytochrome $b_[5}$ 함량과 NADPH-cytochrome $P_{450}$ reductase 활성도를 측정하고 아울러 microsome내의 지질과산화물을 측정하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 실험군간에 식이 섭취량은 차이가 없었으나, 체중 증가량과 식이 효율은 당뇨군이 STZ군에 비해 현저하게 감소하였다. 간장 및 폐조직의 무게는 대조군과 당뇨군간에 유의적인 차이는 없었다. 간조직 및 GP조직 중의 cytochrome $P_{450}$ 함량은 대조군에 비해 당뇨군이 150%, 175%씩 증가하였다. 간조직 및 폐조직 중의 cytochrome $b_{5}$은 대조군에 비해 당뇨군이 53%,116%씩 각각 증가하였다. 간조직에서의 NADPH-cytochrome $P_{450}$ reductase 활성은 당뇨군이 대조군에 비해 46% 증가하였으며, 폐조직에서는 75%증가하였다. 지질과산화물가는 당뇨군이 대조군에 비해 간족에서는 약 95% 높았으며 폐조직에서는 73%높았다. 이상의 결과에서 STZ 유발 당뇨쥐에서는 MFO system의 활성도가 대조군에 비해 현저하게 증가되고 지질과산화반응이 같으 srudgid이 촉진되었으며 폐조직에서도 간조직에서와 비슷한 경향이었다. 이러한 것은 당뇨군에서는 MFO system의 활성증가로 free radical 생성이 증가되고 그 결과 지질과산화가 촉진되었다고 볼 수 있다.
Iron(II)에 의한 마이크로좀의 지질 과산화에 미치는 quercetin과 rutin의 억제 효과를 iron의 산화중에서 생성되는 산소 라디칼에 대한 제거 작용과 iron에 대한 킬레이트 작용에 관하여 관찰하였다. $Fe^{2+}$ 단독에 의한 지질 과산화는 quercetin 또는 rutin에 의하여 용량에 따라 현저하게 억제되었다. $Fe^{2+}$의 존재하에서 ascorbate또는 NADPH에 의한 지질 과산화는 quercetin과 rutin에 의하여 거의 완전히 억제되었다. $Fe^{2+}$의 과산화 작용은 SOD와 DABCO에 의하여 억제되었고 catalase, DMSO와 mannitol에 의하여 약간 억제되었다. Quercetin과 rutin은 DETAPAC에 반응하는 $Fe^{2+}$의 산화를 억제하였고 반응초기에 유의한 킬레이트 효과를 나타내었다. Quercetin과 rutin은 효과적으로 $H_{2}O_{2}$에 의한 지질 과산화를 억제하였으며 $H_{2}O_{2}$를 분해하였다. $Fe^{2+}$의 존재하에서 $OH{\cdot}$의 생성과 U.V. 조사에 의한 $^1O_2$의 생성은 모두 quercetin과 rutin에 의하여 억제되었다. $Cd^{2+},\;Cu^{2+},\;Ni^{2+},\;Pb^{2+}$와 $Zn^{2+}$에 의한 지질 과산화는 quercetin에 의하여 거의 완전하게 억제 되었다. Quercetin과 rutin은 $Fe^{2+}$에 의한 sulfhydryl기의 손실을 유의하게 저해 하였다. 이상의 결과로부터 ascorbate와 NADPH가 있거나 없는 상태에서 $Fe^{2+}$의 과산화 작용에 대한 quercetin과 rutin의 억제 효과는 그들의 반응성 산소 대사물에 대한 제거 작용과 iron에 대한 킬레이트 작용에 기인하였을 것으로 시사된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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