• 한국응용곤충학회지
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• 제36권1호
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• pp.96-104
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• 1997

DNA 다형성을 이용한 누에 유전자 해석기술을 개발하기 위하여 광식성 누에 계통 J111과 비광식성계통 $C_3$의 DNA를 분리하여 유전자 은행을 제작하였다. 누에 유전자 은행은 genomic DNA를 EcoRI로 절단한후 pUC18에 ligation 시켜 DH5$\alpha$ E. coli에 형질전환 시켰다. 형질전환 후 얻어진 colony는 15개 누에 품종의 genomic DNA에 hybridization하였을 때 누에의 품종에 관계없이 highly repetitive, moderately repetitive 및 single 혹은 low copy number 로 구분되었다. RFLP마커에 적합한 single 및 low-copy number band만을 형성하는 colony probe을 신속하게 선발하고자 colony또는 genomic DNA로 hybridization하였다. Single 및 low-copy number의 특성을 가진 219개의 clone을 선발하여 Hind III등 8종의 제한효소별로 처리한 genomic DNA를 이용하여 다형성을 검정하여 J111과 $C_3$ 계통간 다형성을 보인 46개의 clone을 선발하였다. 선발된 clone의 일부를 J111과 $C_3$를 교배하여 얻은 $F_2$의 blot에 hybridization 결과 RFLP clone들이 양친검정에 이용가능하여 누에 RFLP 연관 지도 작성의 기반을 조성하게 되었다.

• 생명과학회지
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• 제12권6호
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• pp.715-720
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• 2002

Arabidopsis thaliana columbia의 종자에 EMS를 처리하여 돌연변이체들을 만들었고 이중 UV-B에 감수성이 높은 돌연변이체를 골랐다. 이 UV-B 감수성 돌연변이체의 원인 유전자를 밝히기 위하여 교배 실험을 한 결과 이는 Mendel 유전법칙을 따르고 단일 유전자의 돌연변이에 의하여 나타나며 열성 유전을 하는 것으로 밝혀져 이 유전자를 uvs라 하였다. 염색체상의 uvs의 위치를 밝히기 위하여 CAPS maker를 이용한 연관분석을 하고자 하였고 이를 위하여 각각 maker의 primer 10종류를 제작하였다. 이를 이용, 각 PCR 산물에 대하여 uvs mutant와는 다른 제한효소 pattern를 갖는 Lansberg와 uvs mutant를 교배시켜서 얻은 것들로부터 DNA를 추출하여 PCR을 수행하였다. 이들과 자외선과의 감수성을 연관시켜 교차율을 계산한 결과 5번 염색체의 LFY3과 가장 가까웁게 연관되어 있었다.

• 미생물학회지
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• 제34권3호
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• pp.115-119
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• 1998

Pseudomonas sp. DJ77로부터 전보에서 클로닝한 pHENX7의 하류방향으로 약 3kb 정도를 포함하는 pYCS500을 클로닝하였다. PYCS500의 제한효소지도를 작성하고 부분적으로 염기서열을 분석한 결과 465 bp의 HindIII-ClaI절편에서 282 bp로 이루어진 하나의 open reading frame(ORF)을 발견하였다. phnM으로 명명된 이 ORF는 93개의 아미노산으로 구성된 polypeptide를 암호화하고 있었으며 계산된 분자량은 10,008 Da이었다. PhnM은 NahT, XylT, DmpQ, AtdS, PhlG, PhhQ, TbuW 등 plant-type ferredoxin 형태의 단백질과 37.7%-53.9%의 상동성을 나타내었으며 이들이 공통적으로 가지고 있는 motif가 일치하였다.

• 한국식물병리학회지
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• 제10권3호
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• pp.235-239
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• 1994

Viral RNA was extracted from purified Chinese cabbage strain of turnip mosaic virus (TuMV-Ca) from infected leaves of turnip. Polyadenylated genomic viral RNA was recovered by oligo (dT) cellulose column chromatography and used as a template for the synthesis of complementary DNA (cDNA). Recombinant plasmids contained cDNA ranged from about 900 bp to 2, 450 bp were synthesized. Among the selected 41 transformants, pTUCA31 and pTUCA35 had over 2 Kbp cDNA insert. Restriction endonuclease patterns of the clones examined were very similar among them. Clones pTUCA23 and pTUCA31 were overlapped with pTUA35. The longest clone pTUCA35, encoding 3'-end, showed that it contained two sites for EcoRI, and one site for BamHI, ClaI, HincII, SacI and XbaI, respectively. The restriction mapping indicated that the clone pTUCA35 contained partial nuclear inclusion body gene, complete coding region of the coat protein and 3' untranslated region of TuMV-Ca genomic RNA.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제38권2호
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• pp.144-149
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• 1996

곤충 바이러스인 Baculoviridae의 subgroup A에 속하는 핵다각체병 바이러스는 미생물 살충제로서, 또는 유용물질의 생산을 위한 발현벡터로서 현재 널리 연구·이용되고 있다. 본 연구에서는 이러한 NPV중 국내에서 분리된 SeNPV의 다각체 단백질 유전자의 구조적 특성을 구명함으로써 새로운 발현벡터를 제작하고자 하였다. 이를 위해 SeNPV의 다각체 모양을 전자현미경으로 관찰하고, 다각체 단백질의 분자량과 그 유전자의 구조를 각각 SDS-PAGE 및 염기서열 결정법에 의해 결정하였다. 그 결과, SeNPV의 다각체는 분자량 30 kDa의 단일 단백질로 이루어진 부정형의 구조였으며, 다각체 단백질 유전자의 염기서열을 포함한 876 염기의 서열을 결정하였다. 또한, SeNPV 전체 DNA상에서 다각체 단백질 유전자는 Xho I 3.0 Kb와 Nco I 6.0 Kb에 각각 존재함을 확인하고, 각각 cloning하여 제한효소 지도를 작성하였다.

• 미생물학회지
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• 제23권2호
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• pp.122-128
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• 1985

Bacillus thuringiensis serovar israelensis 4Q1 contains 8 different covalently closed-circular (CCC) plasmids of molecular weight 204, 267, 109, 103, 16, 7.6, 6.4, and 5.0kb. The three smallest plasmids, designated pBti6, and pBti8 may prove to be useful as cloning vectors because of thier size and ease of isolation. The three plasmids were incubated separately with 9 different restriction enzymes and 7 of the enzymes tested cleaved one or more of the plasmids. Plasmid pBti6 has a single site for Bg1 II, Pst I and Pvu II, two sites for Bc1 I and Eco RI, and five sites for Hind III. Plasmid pBti7 has a single site for Bam HI and Pst I, two sites for Hind III, and three sites for PvuII. Plasmic pBti8 has a single site for Bam HI, BelI and Hind III, two sites for Eco RI, and three sites for Bgl II and Pvu II. Composite restriction enzyme maps for pBti6, pBti7 and pBti8 were constructed. The sites of restriction enzyme cleavage were determined by single, double and partial digests of the plasmid DNA. All the restriction sites were aligned relative to the single Bgl II(pBti6), Pst I(pBti7) or Hind III(pBti8) site, respectively.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제18권1호
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• pp.98-102
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• 1990

본 실험에서는 채소 등에서 연부병을 유발시키는 원인균의 일종인 Erwinia herbicola의 생육을 저해시키는 bacteriocin 생산균주를 경작지로부터 분리하여 몇 가지 특성을 조사하였다. 분리균주가 생산하는 bacteriocin은 배양 48시간안에서 가장 많은 축적량을 보였고 bacteriocin 생산유전자는 chromosome 상에 있음을 확인하였다. 또한 Erwinia 속의 chromosomal DNA 를 분리하여 EcoRI으로 절단하고 pLAFR3 vector의 EcoRI site에 cloning 하여 bacteriocin을 생성하는 형질전환체, 두 개체를 얻었다. 이들 중 bacteriocin 생산능이 우수한 CH 49 clone의 제한효소 지도를 작성하였다. Vector 내에 삽입된 3.0kb insert 내에 BamHI과 NglII site가 각각 한 개씩 있음을 밝혔다.

• 생명과학회지
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• 제13권3호
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• pp.280-290
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• 2003

RAPD 연관지도를 RFLP 연관지도와 합병을 하는 것은 각각의 유전 marker들의 단점을 서로 보완하여 세밀화된 유전자 지도작성을 용이하게 할 수 있다. 본 연구는 Essex와 PI 437654의 $F_2$ 및 $F_3$ 후대계통들을 재료로 하여 작성된 RAPD 연관지도를 콩의 RFLP 연관지도와 합병을 함에 있어서 나타난 몇가지 특징들을 기술하고자 함을 목적으로 하는 바 그 특징들은 아래와 같이 요약된다. 1. RAPD 연관지도상에서의 RFLP probe들의 위치가 RFLP 연관지도상에서의 위치와 부분적으로 변동된 현상이 나타났다. RAPD 연관그룹 L.G.C-3을 RFLP 연관그룹 a1 및 a2와 합병하는 과정에서 pSAC3와 pA136, 그리고 pA170/EcoRV와 pB170/HindIII이 서로 반대방향으로 위치하였다. pK400은 RFLP 연관지도상에서는 pA96-1과 pB172의 사이에 위치한 반면 RAPD 연관지도상에서는 i locus와 pA85 사이에 위치하였다. 2. RAPD 연관지도상에서의 두 marker들간의 간격이 RFLP 연관지도상에서의 간격보다 멀어진 현상이 두드러지게 나타났다. pA890과 pK493간의 간격은 RAPD 연관그룹 L.G.C-1에서는 48.6 cM이었던 반면 RFLP 연관 그룹상에서는 단지 13.3 cM으로 나타났다. 또한 pB32-2와 pA670, pA670과 pA668사이의 간격은 RAPD 연관그룹 L.G.C-2에서는 50.9 cM과 31.7 cM이었던 반면, RFLP 연관지도상에서의 간격은 각각 35.9 cM과 13.5 cM으로 나타났다. 3. 하나의 RFLP probe로부터 두개 이상의 다형화 현상을 나타낸 marker들이 동일한 연관그룹이나 다른 연관그룹에 위치하는 현상이 나타났다. 제한효소 HindIII로 절단된 probe pK418은 세개의 marker를 나타내었는데, 그 중 하나는 L.G.C-20에 위치하였으며, 다른 두개는 L.G.C-4에 위치하였다. 위에 나타난 특징들은 RAPD 연관지도는 intraspecific cross의 후대계통들을 재료로 하여 작성된 반면 RFLP 연관지도는 interspecific cross의 후대계통들을 재료로 하여 작성된 결과에선 비롯된 차이점 때문인 것으로 추측된다.

• 한국응용곤충학회지
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• 제35권1호
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• pp.58-65
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• 1996

RAPD-PCR(Random Amplified Polymorphic DNAs-Polymerase Chain Reation) 기법에 누에의 유전적 변이 분석을 위한 첫 단계로 다양한 GC함량을 갖는 random primer에 의해서 증폭되는 DNA 단편의 양상 및 증폭도를 비교하였다. RAPD-PCR을 위한 random primer의 증폭도는 GC함량에 의해서 상당히 영향을 받음이 분석되었다. 특히, 50% GC 함량을 갖는 primer는 그 증폭도에 따라서 4가지의 그룹으로 DNA단편이 증폭되었으며 〔bad amplification (75.5%), poor amplification (11.1%), good and excellent amplification(11.1%)〕, primer의 GC 함량이 증가할수록, 휠씬 더 좋은 증폭도를 보여주었다. 그러나, 40% GC 함량을 갖는 primer에 의해서는 어떤 증폭산물도 관찰되지 않았다. PCR을 수행하기 전에 6가지의 제한효소(BamHI, HindIII, Xbal, HaeIII, MspI, Rsal)를 사용하여 누에 genomic DNA를 처리하여 이를 주형 DNA로 하여 RAPD-PCR을 수행한 결과, 유전적 마커의 생산에 대한 효율이 증가함을 알 수 있었다. 이상의 결과를 종합해 볼 때 60%이상의 GC함량을 갖는 random primer와 전처리한 주형 DNA의 사용은 여러 가지 다른 누에 계통의 동정 및 연관군 지도작성에 따른 경비 및 시간을 줄이는데 효율적이라고 사료된다.

• 미생물학회지
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• 제32권4호
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• pp.301-305
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• 1994

토양분리 방선균 Streptomyces diastatochromogenes로부터 분리된 제한효소 SdiI은 넓은 범위의 pH(7.0~12.5)와 온도 ($-60^{\circ}C$)에서 활성을 보였으며, 고농도 (-500mM) NaCl이 있어도 작용하였다. 또한, $20~60^{\circ}C$ 온도에서 안정하며, 활성을 갖기 위해서는 $MgCl_2$를 필요로 하였다. Lambda DNA에 대한 지도 작성으로부터 XhoI의 isoschizomer로 추정되었으며, DNa 염기서열 분석 결과, 인식, 절단 서열은 다음과 같이 결정되었다. 5‘-C${\downarrow}$TCGA G-3' 3'-G AGCT${\uparrow}$C-5'