표백제 규제 대상인 한약재 28종 101건을 재배 현장에서 채취하여 수세, 건조 후 천연유래 이산화황 함유량을 모니어-월리암스 변법과 산증류-이온 크로마토그래피법으로 조사하고 그 출처를 규명하였다. 모니어-윌리암스 변법으로 측정한 한약재의 천연유래의 이산화황 함유량은 0.6-4.7ppm으로 의이인(0.6ppm)이 가장 낮았으며 황기(4.7ppm)가 가장 높았으나 산증류-이온 크로마토그래피법에 의해 측정한 천연유래 이산화황 함유량은 0.31-3.20ppm으로 택사(0.31ppm)가 가장 낮고 고본(3.3ppm)이 가장 높은 함유량을 보였다. 시험법에 따른 측정값의 차이 및 이산화황의 출처를 규명하기 위하여 GC-MS로 휘발성분을 분석한 결과, 측정값의 차이는 모니어-윌리암스 변법에서 휘발성 유기화합물에 의한 false positive response로 일어났으며, 한약재에서 측정되는 천연유래 이산화황은 한약재가 함유하고 있는 휘발성 황화합물에 기인함을 확인하였다.
코발트와 니켈 이온을 4-(2-피리딜아조)레조루신올(PAR) 리간드와 킬레이트를 만들고 이 금속-PAR 킬레이트들을 역상 모세관 고성능 액체 크로마토그래피(RP-CpHPLC)로 분리와 정량을 하였다. 컬럼은 주로 Vydac C4 모세관 컬럼을, 이동상은 아세토니트릴(MeCN) 수용액을 사용하였다. 머무름 인자, k와 봉우리 높이에 대한 이동상의 pH와 MeCN 농도의 영향을 검토하여 분리와 정량의 최적 조건을 얻었다. 결과, 분리의 최적 이동상은 22.5% MeCN, pH 5.6이었고, Co(II) 이온의 정량은 이 조건에서 할 수 있었다. 그러나 Ni(II) 이온의 정량은 분리와 봉우리의 높이로부타 22.5% MeCN, pH 7.20이 보다 적합함을 확인하였다. 각각의 조건에서 Co(II)와 Ni(II) 이온의 검출한계(D.L., S/N=3)는 각각 $2.0{\times}10{-7}$ M(14.9 ppb)와 $1.0{\times}10{-6}$ M(59.2 ppb)였다.
수산가공공장에서 원료어 처리시 대량으로 발생하는 비가식부의 하나인 대구의 고니부분을 효율적으로 이용하기 위하여 단백질을 효소로 가수분해시킨 후 한외여과막을 사용하여 분자량별로 분획하였으며, 이들 가수분해물 중 항산화활성이 뛰어난 펩타이드를 이온교환 크로마토그래피, 겔크로마토그래피 및 HPLC로 분리${\cdot}$정제하여 그 아미노산 서열을 결정하였다. 여러 가지 단백질 분해효소로 분해시켜 얻은 가수분해물 중에서 항산화활성이 가장 우수한 것은 Alcalase로 천연 항산화제인 ${\alpha}-tocopherol$보다 $5{\%}$정도 뛰어난 효과를 나타내었으며, 이 가수분해물을 한외여과막으로 분자량 10 kDa, 5 kDa 및 1 kDa의 세 종류로 분리하여 항산화활성을 측정한 결과, 1 kDa의 막을 통과하여 분리된 가수분해물이 가장 높은 활성을 나타내었으며, 이는 천연항산화제인 ${\alpha}-tocopherol$보다 $10{\%}$정도 높았다. 이 획분으로 Spsephadex C-25를 사용하여 이온교환 크로마토그래피를 한 결과, $0.5{\~}1.0 M$ NaCl 용액으로 용출시 킨 분획물에 서 ${\alpha}-tocopherol$보다 약 $17{\%}$ 활성이 높게 나타났으며, 이것을 다시 Sephadex G-15로 겔여과하여 3개의 획분을 얻었으며 이 중 획분 II에서 ${\alpha}-tocopherol$보다 약 $45{\%}$가 높은 항산화활성을 보인 획분을 얻었다. 이것을 역상 HPLC를 이용하여 5차의 획분을 얻었으며, 항산화활성은 획분 A에서 ${\alpha}-tocopherol$보다 약 $53{\%}$정도 높게 나타나 가장 우수하였다. 이 획분을 capillary electrophoresis로 순도를 확인하여 아미노산 서열을 결정한 결과 Ser-Asn-Pro-Glu-Trp-Ser-Trp-Asn였다.
Aspergillus niger 균체로부터 황산암모늄 분별침전, 이온교환 크로마토그래피, 한외여과, 소수성 크로마토그래피 과정을 거쳐 glucose oxidase( EC 1.1. 3.4)를 순수 정제하였다. 최종 정제과정인 소수성 크로마토그래퍼에 의해 소수성은 다르나 glucose oxidase의 활성을 갖는 A, B fraction이 얻어졌고, 그의 비활성도는 각각 2,191, 1,273units/mg이었다. A와 B는 분자량 78,000의 당단백질임이 확인되었으나, HPLC 겔 여과로 측정한 분자량, 최대 흡수 파장, 등전점 등에 차이를 보였다. 효소 A는 $\beta$-D-glucose를 특이적으로 산화하였고, 촉매 활성에 대한 최적 온도 는 $30^{\circ}C$, 최적 pH는 3.5이었으며, SDS에 대하여 비교적 강한 저항성을 나타내었고, 촉매 기능은 10mM $Hg^{2+}$에 의해 급격히 억제되었다. 화학 수식 실험 결과 cysteine/ cystine중의 SH기가 glucose oxidase의 활성에 관여하고 있음이 시사되었다.
pH 1에서 15-crown-5(SGBM)을 결합시킨 silica gel를 고정상으로 하는 액체 크로마토그래피을 이용하여 혼합 금속이온 용액으로부터 금속이온들의 분리효율을 결정하였다. 여러가지 SGBM-금속이온들간의 결합상수 및 분리인자들을 측정한 결과 그 순위는 Li(Ⅰ) < Sr(Ⅱ) < Na(Ⅰ) < Cu(Ⅱ) < Mg(Ⅱ) < K(Ⅰ) < Ca(Ⅱ) < Bi(Ⅲ) < Sb(Ⅲ)로 나타났다. 이러한 사실은 금속이온의 크기 효과 및 전자 밀도 효과에 의해서 결정됨을 알 수 있었으며, 또한 알칼리, 알칼리 토금속이온 및 $Cu^{2+}$이 혼합된 용액에서 $Sb^{3+}$의 분리효율이 다른 이온들에 비해서 훨씬 좋게 나타남을 알았다.
본 연구에서는 분석대상식품인 곡류, 과일류, 채소류, 어류둥 20종 180품목의 식품별에 따른 천연 이산화황의 함유량에 대해 모니어월리암스변법, 개량랭킹법 및 산증류/이온배제크로마토크래피법을 각각 적용하여 분석한 후 다음과 같은 결과를 얻었다. 본 연구에서 사웅한 각 실험방법별 회수율은 모니어월리암스변법은 $74{\sim}91%$, 개량랭킹법법은 $67{\sim}87%$, 산증류/이온배제크로마토그래피법은 $68{\sim}88%$의 회수율을 얻을 수 있었으며 모니어월리암스 변법에 의한 조사대상식품의 이산화황 분석결과는 $1.02{\sim}43.87\; ppm$의 범위를 보였고 마늘, 도라지, 파, 양배추 및 양파가 각각 43.87, 15.37, 11.50, 11.21 및 10.60 ppm의 높은 농도로 검출되었으며, 그 나머지 식품은 모두 10.00 ppm 미만으로 낮은 농도를 보였다. 개량랭킹법에 의한 조사대상식품의 이산화황 분석결과는 파와 마늘이 2.87 ppm과 6.41 ppm으로 높게 나타났고 나머지는 대부분 2.00 ppm미만의 낮은 농도를 보였다. 산증류/이온배제크로마토그래피법에 의한 조사대상식품의 이산화황 분석결과는 마늘, 양배추, 파, 양파, 감자 및 사과가 각각 15.43, 9.82, 5.74, 5.37, 2.14 및 0.49 ppm이 검출되었고, 그 나머지는 불검출이었다. 결론적으로, 20종 180품목을 3가지 분석방법을 적용하여 천연으로 존재하는 이산화황의 함유량을 조사한 결과, 여러 식품중 천연으로 존재하는 이산화황의 함유량을 모니터링하는데는 현행 식품공전의 공정시험법인 모니어월리암스변법이 타당한 방법이라고 생각되나, 건조된 파, 양파, 양배추등의 황화합물을 함유하는 식품의 경우에는 모니어월리암스법(AOAC공정법 990.28)에 규정되어 있는 것과 같이 이산화황이외의 황화합물에서 기인되는 휘발성물질이 이산화황으로 같이 검출되므로 건조된 파, 양파, 양배추등의 황화합물을 함유하는 식품의 경우에는 황화합물에서 기인되는 휘발성물질이 이온크로마토그래프에서 배제되고 이산화황만 검출되는 산중류/이온배제크로마토그래피법을 적용하여 분석하는 것이 타당하다고 사료된다.
The effect of high concentration ion matrix on the analysis of low anion concentration in the suppressed ion chromatography was studied. The anions studied were $Br^-$, $NO_3{^-}$, $HPO_4^{2-}$, $SO_4^{2-}$, and $C_2O_4^{2-}$ in the presence of excess NaCl and $CaCl_2$. In this study we suggested that the erroneous results in the suppressed ion chromatographic determination of small concentration of anions were not caused by the interaction of large amount of cation in the suppressor, but by the interaction of cation with concerned anion in the original solution. The error in the analysis of such anion can not be eliminated just by dilution. Therefore, we suggested that standard addition method might be adequate for analyses of those samples.
아세톤으로 탈지한 대두분으로부터 gel여과법과 이온 교환 크로마토그래피등의 전통적인 단백질 추출 방법을 이용하여 Lipoxygenase 이성효소를 분리하였다. 이온 교환 후의 lipoxygenase-1과 -2는 Crude extract에 비해 각각 19배와 32배 정제 되어졌으나, 상당한 효소활성의 손실을 초래하였으며, lipoxygenase 에 특이적인 염색기술을 이용하여 행한 7% PAGE에서 lipoxygenase-1, -2, 그리고 -3은 각각 0.38, 0.29그리고 0.33의 Rf치를 나타내었다.
알긴산 분해능이 강한 균주를 자연산 미역으로부터 분리하여 동정한 결과 Vibrio sp.로 밝혀졌고, 이 균은 탄소원으로 alginate, 질소원으로 peptone, NaCl 농도 2.5%, 28$\pm$2$^{\circ}C$에서 최대의 효소활성을 보였다. 겔 여과 및 이온크로마토그래피 방법으로 정제하여 정제도가 53.7배, 비활성이 11.84U/mg의 정제효소를 얻었다. 이 정제효소를 SDS-전기영동하여 분자량을 측정한 결과 약 27,000 정도로 추정되었다.
본 논문은 설탕물 양치 전후, 타액 내 칼륨과 마그네슘의 농도 변화를 분석한 연구이다. 타액 샘플은 10% 자당(포도당) 용액으로 양치하기 전과 양치 직후부터 60분까지 채취하였고 이온크로마토그래피법으로 분석하였다. 설탕물 양치 전 칼륨의 평균 농도는 274.3±77.9 mg/ℓ (279.2±62.1 mg/ℓ)이며, 마그네슘의 평균 농도는 4.5±2.5 mg/ℓ(4.8±2.0 mg/ℓ)이다. 설탕물 양치 직후, 칼륨과 마그네슘의 농도는 자당의 경우 143.9±55.4 mg/ℓ, 2.7±3.1 mg/ℓ이며, 포도당의 경우 150.9±64.2 mg/ℓ, 2.6±0.7 mg/ℓ로 대조군에 비해 급격히 낮아졌으나, 양치 후 60분에서 대조군의 이온 농도 수준으로 회복됨을 확인하였다. 즉 설탕물 양치 직후에는 자극에 의해 타액 내 칼륨과 마그네슘 이온 농도가 낮아지나, 60분 후에는 타액의 자정작용으로 구강 내 향상성이 회복되었다. 본 논문은 타액에 관한 기초자료를 축적하는 것에 의의를 두고 연구하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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