원형 용융탄산염 단위 연료전지의 성능 및 온도분포가 수치모사를 통해 얻어졌다. 원형 단위전지내에서는 사각형 단위전지에 비해 비교적 균일한 온도분포가 얻어졌다. 전지의 바깥쪽으로 갈수록 가스전환율이 커졌고 전류밀도도 크게 증가하였다. 운전전압이 감소할수록 각 가스들의 전환율은 커지고 전류밀도도 커졌다. 원형 전지에서의 평균전류밀도나 출력은 전압이 높을 때는 사각형 전지보다 작았고, 전압이 낮을 때는 더 컸다. 음극 및 양극 가스의 전환율도 마찬가지였다. 전압이 낮을 때 가스의 전환율이 커서 원형 전지의 효용성이 크게 나타났다.
Candida pseudotropicalis의 영양요구성 돌연변이 균주들에 대한 원형질체 형성, 재생 그리고 융합에 있어서 bovine serum albumin (BSA), myoinositol 그리고 ergosterol의 증진효과를 연구하였다. 원형질체 형성율은 영양요구성 균주의 type에 따라 48%-98%였다. O. 5mg/ml의 myoinositol과 0.1mg/ml의 ergosterol을 배양액에 첨가하고 4mg/ ml의 BSA을 원형 질체 형성 완충용액에 첨가했을 때는 50~100%의 원형절체 형성윷을 얻었다. 영양요구성 균주의 생장배지에 myoinositol과 ergosterol을 동시에 첨가하고 원형질체 형성 완충용액에 BSA를 침가하면 2.2-3.0애의 원형질체 재생율 증진을 보여주었다. 원형질체 융합의 최적조건에서 상보적 영양요구성 균주간의 융합율은 $7.0\times 10^{-4}$ ~ $1.5\times 10^{-3}$ 이였으며 상기화합물을 처리하지 않고 얻은 융힐l율과 비교해서 1. 9-2. 3배의 증가를 보였다. 이러힌 결과로 본 연구에서 사용된 균주들에서는 상기화합물 처리 에 의해 원형질체 재생은 물론 세포융합율도 증진됨을 알 수 있었다.
섬유소 분해능이 우수한 P. verruculosum 의 분생포자로부터 원형질체의 생성 및 재생에 대하여 조사하였다. 균의 원형질체 생성을 위한여 2-deoxy-D-glucose(2-DG) 가 첨가된 최소배지에서 분생포자를 10-12 시간 전배양 시킨후 시판 세포벽분해효소들을 작용시켜 본 결과 그중 Novozyme 234 (1%, w/v) 에서 50% 이상의 가장 좋은 원형질체 생성 수율을 보였다. 전배양 되지 않은 포자로부터는 원형질체 생성이 이루어지지 않았으며 원형질체 생성율을 향상시키기 위한 첨가테로서 2-DG 의 효과가 무첨가에 비해 2배 이상의 수율을 증가시켰다. 포자 원형질체의 재생율은 49.2% 로 동 균주의 균사체 원형질체의 재생율4.6-27.8%(삼투압 조절체로서 0.6 M magnesium sulfate) 보다 높았다. 원형질체 생성 및 재생을 위한 상투압 안정제로서는 0.6M ammonium sulfate 와0.6 M magnesium sulfate가 가장 적절하였다. 광학 형미경을 통하여 부풀린 포자로부터 원형질체의 생성과정과 두 가지 각기 다른 양상의 재생과정이 관찰되었다.
벼의 종자로부터 embryogenic callus를 유도하고 이로부터 개체로의 재분화를 유도하였으며, embroyogenic cell suspension culture를 통하여, 이로부터 원형질체를 분리, 배양하여 embryogenic callus를 형성하였다. 또한, 분리된 원형질체를 electroporation하였을 때 생존율(viability)에 미치는 여러 요인들을 조사하였다. 원형질체의 생존율은 voltage와 capactiance가 증가할수록 감소를 보였으며, HBM buffer에서 $4^{\circ}C$로 electroporation 하였을 때 생존율에 보다 효과적이었다.
난과식물의 형질전환 유도의 기초연구로서 자란(Bletilla striata)의 미성숙 종자로 부터 embryogenic callus를 유도하고, 이 배발생 캘러스의 현탁배양을 하여 이로부터 분리한 원형질체에 여러가지 조건하에서 electroporation을 행하고 원형질체의 생존율(viability)을 조사하였다. Voltage와 capacitancy의 증가에 의해 생존율은 감소를 가져 왔으며, HBM buffer에서 $4^{\circ}C$로 electroporation시 원형질체의 생존율에 있어서 안정성을 높일 수 있었다.
Shin J. S.;Kim, C.;S. J. Uhm;Kim, N. H.;Lee, H. T.;K. S. Chung
한국가축번식학회지
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제22권4호
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pp.395-403
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1998
본 연구에서는 돼지난자내 원형정자 주입후 수정율과 체외 배 발달을 조사하였다. 원형정자 주입 2시간 전에 인위적 전기자극을 주고 원형정자를 주입했을 때 난자들의 수정율이 주입 직후에 전기자극을 준 것들과 전기 자극을 주지 않은 것들보다 수정율이 높았다. 원형정자와 원형 정자핵을 각각 주입 한 후 전핵 형성율과 전핵 이동율을 조사하였으나 유의차를 발견할 수 없었다. 전핵의 형성과 이동중 미세소관의 움직임을 간접형광면역법 및 공춧점 현미경을 사용하여 조사해본 결과, 난활성 직후 난자의 표층에서 미세소관이 발생해서 이것에 의해 웅성 및 자성전핵이 난자 중심부로 이전됨을 볼 수 있었다. 원형정자와 원형정자핵 주입후 배양 6일째에 각각 25% 와 27%의 배반포로 형성되었고, 8 일째 형성된 배반포를 염색하여 관찰한 철과 세포수가 각각 평균 87에서 99개가 형성되었음을 알 수 있었다. 이러한 결과는 체외 성숙된 돼지 난자 내에 원형정자 혹은 원형정자 핵을 미세 주입하는 방법에 의해 정상척인 배발달을 하는 돼지 수정란 생산이 가능한 것을 보여주는 것이다.
자동차 및 각종 판재 성형시 성형율을 향상시키는 방법에는 신소재 개발, 금형기술개발, 접촉부의 마찰을 줄여 주기 위한 윤활 등등이 있겠으나 손쉽게 공구다이 상하에 비드를 설치하여 판재를 성형할 경우 미끄럼 저항의 균형을 이루어 주름 억제와 두께분포가 보다 균일해지며 스프링백 현상 등으로 인한 성형 후 치수 불량 등을 주어 판재성형율을 향상시키는데 기여할 수 있다. 본 연구에서는 펀치가 판재를 성형하기 위해 진행됨에 따라 공구다이와 펀치간의 접촉각도가 변하게 되는 점을 고려하여 인출 각도변화에 따른 인출특성 및 마찰계수 변화등을 알아보고자 하며 원형 형태의 환저비드, 단일원형비드, 이중원형 비드의 종류와 크기변화 및 비드좌우 모서리 변화, 공구다이모서리변화, 블랭크가압력 변화, 비드 전진깊이 변화, 비드통 과 후 재료의 기계적 성질 변화등 인출 특성에 영향을 미치는 인자들을 변화시켜나가며 이에 따르는 인출특성을 Data Bank화 시켜 비드 종류나 형상에 따른 금형설계의 기초자료를 제공하고자 한다.
착상전 수정란 단계에서 형질전환 수정란의 선발은 형질전환동물의 효율을 증대시킬 수 있는 방법이다. 성공적인 형질전환동물의 생산을 위해서는 생산된 수정란의 mosaicism 빈도를 감소시켜 전체 할구에서의 유전자 발현을 유도하는 것이 최적일 것이다. 따라서 본 연구에서는 돼지의 웅성 생식세포를 이용한 형질전환동물의 생산에 있어서 다양한 정자세포 이용시 형질전환 수정란의 생산성 및 mosaicism 빈도를 조사하였다. 아울러 돼지 웅성생식세포내 GFP 유전자도입시 세포들의 생존율 및 원형정자세포분리 후 배양에 따른 형태적 변화를 관찰하였다. 돼지의 웅성 생식세포내 GFP 유전자 도입은 전기자극법 (1.3 ㎸/cm, 200 $\mu\textrm{s}$) 에 의하여 수행되었으며, 이 때 생존율은 60-70%이였다. 유전자가 도입된 전체 세포중 원형정자세포군의 분리는 유식세포분리기에 의하여 수행하였으며, 전체집단에 대한 분리군의 비율은 평균 16.2%이였다. 형질전환 수정란의 생산은 정자 (ICSI), 원형정자세포 (ROSI), 배양후 확장된 원형정자세포(ELSI)를 이용하였으며 각각의 난할율은 ICSI (82.9%), ROSI (59.1%), ELSI (62.1%)로 유의한 차이를 나타내었다. 그리고 8세포기까지의 배발달율은 각각 61.1, 40.9 및 48.6%이였으며, 상실배 및 포배기형성율은 각각 24.6, 18.1 및 32.4%이였다. 형광현미경하에서 GFP 단백질이 발현된 8세포기 수정란을 대상으로 각각의 할구를 primer extension pream-plification (PEP) PCR 방법으로 분석한 결과, ICSI 및 ROSI 실시후 대부분 (15/20, 9/10) 의 수정란은 3~4개의 할구에서만 GFP 유전자의 존재여부를 확인할 수 있었으며, 전체 할구에서 GFP 유전자가 모두 확인된 수정란은 없었다. 반면에 배양된 확장 원형정자세포를 이용하여 생산한 수정란의 경우, 4/10 (40%)에서 전체 할구내에 GFP 유전자의 존재를 확인할 수 있었다. 이러한 결과는 비록 배발달율 및 GFP 유전자 발현율에 있어서는 ELSI방법이 ICSI 등의 방법보다 현저히 낮았지만, mosaicsism 빈도가 낮아 바람직한 형질전환 수정란 생산에서는 오히려 유용한 방법이라고 사료된다. 또한 외래 유전자의 도입효율 면에서 후기 원형정자나 성숙정자보다 초기 원형정자세포에 외래유전자를 도입한 다음, 성숙시킨 확장원형 정자세포를 이용하는 방법이 보다 우수하다는 것을 시사하였다. 따라서 본 연구결과는 포유동물의 웅성 생식세포를 이용하여 nonmosaicisn을 나타내는 형질전환수정란을 생산하고 선발할 수 있는 일련의 기술적 과정을 정립하였다고 사료된다.
Pseudomonas 속에 속하는 여러균주의 원형질체 생성을 위한 최적조건과 이들의 재생에 영향을 미치는 몇 가지 요인들을 조사하였다. Pseudomonas는 lysozyme ($100{\mu}g/ml$)과 10mM EDTA를 처리하였을 때 99.0%에서 99.9%까지 원형침체로 천환 되었으며, 이때 사용한 완충액의 최적 pH는 8.0이였고 효소처리는 상온에서 진탕하지 않고 처리하였을 때가 비교적 균주간에 차이가 없이 효과적으로 원형질체가 생성되었다. $MgCl_{2}$ 그러고 Streptomycin수용액이 윈형 질체의 안정성을 높였고, 원형질체의 생성에는 $Mg^+\;and\;Na^+$ 이온이 효과적으로 작용하였다. 원형질체의 재생은 Rich Regeneration Medium배지에 20mM $MgCl_{2}$를 첨가하였을 때 원형질체의 재생율이 28배까지 증가하였다. 원형질체의 생성과 그것을 희석하는데 사용한 완충액에 1% Bovine Serum Albumlne를 첨가한 경우 재생율이 10배 가까이 증가되었고, 또한 완충액에 1% BSA를 첨가하고 재생배지에 0.5% 제라틴을 첨가했을 때에는 14배까지 재생율이 증가되어다.
식용으로 재배면적이 증가하고 있는 느타리버섯과 사철느타리버섯의 유전연구와 균주개 발을 위하여 원형질체의 재생 및 환원에 관한 실험 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 느타리버섯의 원형질체 재생에 알맞는 삼투압 조절제는 0.6 M KCl과 0.6 M Sucrose였으며, 균사의 생장을 촉진하는 amino acid와 vitamin을 혼합한 배지에서 원형질체 환원율이 약 5배로 증가하였다. 2. 삼투압 조절제가 첨가된 배지에서 재생후 2일부터 원형질체가 재생하여 $5{\sim}10$일에 균총을 육안으로 확인하였으며, 환원율이 $0.24{\sim}3.19%$로 사철느타리버섯과 wild type이 느타리버섯과 영양요구성 균주보다 환원율이 다소 높았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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