파밤나방(Spodoptera exigua (H bner))의 생리적 요인이 에스테라제 변이에 미치는 영향을 파악하고자 전기영동을 이용한 동위효소 분석이 이루워졌다. 또한 각 동위효소의 화학적 특성을 파악하고자 기질 및 억제제에 따라 반응성을 분석하였다. 총 28개의 에스테라제 동위효소들이 10%비변성 전기영동에서 분리되었다. 이들 동위효소들은 양극으로 이동거리 증가에 따라 E1에서 E28까지 명명되었다. 파밤나방의 발육단계에 따라 에스테라제 동위효소는 변이를 보였다. 유충과 용이 성충에 비해 많은 수의 에스테라제 동위효소를 보였고, 알이 가장 적은 수를 나타냈다. 특히 E1과 E2는 1령충에서 특이하게 발현되는 도우이효소들이 있다. 서로 다른 조직간에도 에스테라제 동위효소 변이를 보였다. 혈림프와 지방체에 비해 표피와 소화관 조직에서 더많은 수의 에스테라제가 발현됐다. E1-E6 동위효소는 표피조직에 E10, E11, E25, E26 및 E27은 소화관조직에, 그리고 E18은 혈림프에 각각 특이한 에스테라제 동위효소들이었다. 조사된 haphtyl ester계통의 에스테라제 기질들 중에서 $\alpha$-naphty1 propionate가 모든 에스테라제 동위효소에서 가장 높은 반응성을 보였다. 이들 동위효소는 에스테라제 억제제(exerine, dichloroves, moncrotophs 및 paraox-on)에 대한 반응에 따라 E10과 E24는 콜린에스테라제, E4, E9,E17, E19, E21 및 E23은 아릴에스테라제 및 나머지 20종은 카르복실에스테라제로 각각 판명되었다.
배추좀나방의 deltamethrin에 대한 약제 저항성 기작을 알기 위하여 에스테라제의 활성과 조성을 분석하였다. 0.1$\mu\textrm{g}$의 deltamethrin으로 매 세대 선발하였을 때 선발세대의 진행에 따라 배추좀나방 4령충의 약제감수성은 줄었고 에스테라제 활성을 증가했다. Deltamethrin으로 선발된 또는 선발되지 않은 서로 다른 배추좀나방 집단들의 약제감수성과 에스테라제 활성간에 높은 상관을 보였으며 이들 요인들간에 상관계수는 0.9918(P=0.0082)로 정상관을 보였다. 전기영동(6% gel)의 결과 17개의 에스테라제 밴드가 분리되었다. Deltamethrin에 대해 선발된 집단들은 비선발 집단에 비해 적은 숫자의 에스테라제 밴드를 보여주었다. 그러나 4개 밴드(E3, E4, E11, E12)는 deltamethrin 선발집단에서만 나타난 밴드였다.
적혈구 콜린에스테라제 활성도와 성, 연령, 키, 몸무게, 음주 및 흡연력 등 인구학적 특성과의 관련성을 살펴보기 위해서, 두 곳의 농약 사업장 근로자 52명과 의과대학생 51명 등 총 103명을 대상으로 현장 검사용 기계를 이용해 2000년 1월부터 2월까지 적혈구 콜린에스테라제 활성도를 측정하였다. 조사 대상자는 남성이 89명(86.4%), 여성이 14명(13.6%)였으며 평균 연령은 각각 $31.8{\pm}11.4$, $27.1{\pm}10.1$ 세였다. 측정된 적혈구 콜리에스테라제 활성도의 평균값은 남성에서 $34.7{\pm}3.9$ U/g hemoglobin, 여성에서 $34.0{\pm}4.0$ U/g hemoglobin으로 군간 유의한 차이가 없었다. 한편 적혈구 콜린에스테라제 활성도와 조사된 모든 인구학적 변수들간에는 유의하지 않은 매우 낮은 상관성만이 관찰되었다. 결론적으로 적혈구 콜린에스테라제 활성도는 혈장 콜린에스테라제 활성도와는 달리 성, 연령, 키, 몸무게 등 인구학적 변수와 상관성을 보이지 않는다고 판단되었다.
항콜린에스테라제 약물은 AChE를 억제하여 ACh을 콜린성 수용체에 축적시켜 지속적인 ACh 자극을 유도하는 약물이다. 이러한 특성이 적출한 위장의 운동성에 미치는 영향과 콜린에스테라제 활성화 약물의 영향을 조사하고, 에탄올이 AChE의 활성도를 감소시키는 보고를 바탕으로 항콜린에스테라제와 에탄올의 동시 투여시 나타나는 위장관의 수축운동의 변화를 규명하고자 다음과 같은 실험을 수행하였다. 흰쥐의 위장을 적출하여 $2{\times}10mm$ 환상근 절편을 만들어 적출근편 실험조에 고정하고 등척성 장력측정기를 이용하여 약물 처치에 따른 위장 절편의 수축 변화를 측정하였다. 비가역성 항콜린에스테라제인 fenthion은 ACh 유발 위장 절편의 수축을 증가시켰으며 콜린에스테라제 활성화 약물인 PAM은 이 작용을 길항하였다. 가역성 항콜린에스테라제인 physostigmine은 그 자체로 인해 위장 절편의 수축이 증가하였는데, 이는 비극성을 나타내어 위장 절편 조직으로의 흡수가 빠르기 때문이라고 생각되고, ACh에 의한 반응성 또한 현저히 증가하였다. PAM에 의한 반응성 감소효과도 대조군과 통계적으로 유의한 차이를 보였다. 최근 평활근 이완을 유도한다고 알려진 에탄올은 fenthion 처치에 의한 수축운동 증가를 억제하였고 이러한 결과로 볼 때 항콜린에스테라제와 에탄올의 동시 투여시에는 콜린에스테라제 활성도 감소보다 에탄올에 의한 위장관 운동성 감소가 많이 작용함을 의미하였다. 이상의 결론은 가역성 및 비가역성 항콜린에스테라제에 의해서 위장관 운동성 항진이 나타나고 이는 콜린에스테라제의 활성화 약물로서 길항되었다. 그리고 에탄올과 항콜린에스테라제에 동시에 노출된 경우는 에탄올의 평활근 이완 효과에 의해 위장관 운동성 감소가 나타남을 알 수 있었다.
파밤나방(Spodoptera exigua (Hubner))은 야외집단과 실내집단들간에 살충제 감수성에서 큰 변이를 보였다. 조사된 모든 약제에서 야외집단은 비선발 실내집단보다 높은 약제 저항능력을 보였다. 약제 선발된 실내집단은 선발 약제에 대해 저항능력을 높게 발현시켰다. 이러한 약제 저항능력의 변이가 아세틸콜린에스테라제와 에스테라제 활력 변이와 비교 분석되었다. 약제 저항능력이 높은 집단일수록 아세틸콜린에스테라제 활력이 낮아지고 에스테라제활력은 높아졌다. 아세틸콜린에스테라제의 Km(Michaelis-Menten constant)값은 약제저항능력이 높은 집단일수록 증가하는 것으로 기질에 대한 이 효소의 친화도가 낮아졌다. 이 효소의 효소활력 변이는 같은 집단일수록 증가하는 것으로 기질에 대한 이 효소의 친화도가 낮아졌다. 이 효소의 효소활력 변이는 같은 집단 내에서 발육단계에 따라 차이를 나타내어 2, 3, 4령충보다는 5령충에서 특히 Km값이 증가하였다. 파밤나방의 에스테라제는 6.5% 비변성조건의 겔에서 21개 밴드를 보였다. 이중 E2, E7, E8, E11, E16, E7 밴드들은 약제저항능력이 높은 집단일수록 발현 빈도수가 높았다. 이상의 결과는 파밤나방의 살충제 감수성변이에 해독효소활력증가와 작용점변환이 포함됨을 나타낸다.
벼멸구의 카보후란에 대한 저항성 기작을 구명하기 위해 실내에서 카보후란으로 30세대 도태하여 얻은 저항성계통($LD_{50};\;20.3{\mu}g/g$)과 약제를 12년 동안 처리하지 않은 벼멸구 감수성 계통($LD_{50};\;0.3{\mu}g/g$)을 완충용액과 마쇄하여, 105,000g에서 2시간 원심분리하여 얻은 상등액(에스테라제층)과 침전물(P450-산화효소층)을 효소액으로 하여 $^{14}C$-카보후란을 반응시켜 계통 간 대사물 량의 차이를 조사한 바 저해제(piperonyl butoxide; 산화효소저해제, diethylmalate; 글루타치온 전이효소 저해제, iprobenfos; 에스테라제 저해제)와 보조인자 (NADPH; P-450 산화효소, 글루타치온; 글루타치온전이효소)에 상관없이 카보후란의 대사물과 그 양이 계통간 차이가 없었다. 이상의 결과로부터 저항성 벼멸구에서 일반적으로 곤충에서 생화학적 저항성 기구로 잘 알려진 가수 분해 효소의 일종인 에스테라제와 p-450 산화효소, 글루타치온 전이효소의 활성 증가가 저항성 발달에 관여하지 않음을 알 수 있었다.
파밤나방(Spodoptera exigua (Hiibner))의 살충제 감수성을 판별할 수 있는 간편한 진단 장치가 개발되어 야외 집단을 대상으로 판별능력을 시험했다. 이 진단장치의 기본설계원리는 에스테라제와 아세틸콜린에스테라제의 효소활력이 파밤나방의 살충제 감수성과 밀접한 관련성이 있음을 이용하였다. 네가지 형태의 진단장치(ED, EM, AD 및 AM)가 고안되었고 판별효소(E-에스테라제, A-아세틸콜린에스테라제)와 억제제(D-dichlorvos, M-monocrotophos)의 종류에 따라 분류되었다. 판별억제제의 농도는 각각 ED는 1mM, EM는 10mM, AD는 100mM 및 AM는 100mM이었다. 억제되지 않은 저항성 개체는 두 효소 모두에서 적색을 보이나 억제된 감수성 개체의 시료는 무색으로 나타난다. 한 개체의 파밤나방으로부터 채취된 혈액과 머리시료가 네가지 판별장치 검색장치에 한꺼번에 이용되었다. 검색장치의 실증검증을 위해 11개의 실내와 야외 집단들을 대상으로 살충제 감수성과 검색장치 판별력을 비교하였다. 이들 집단은 파밤나방 방제에 이용되고있는 3가지 살충제들(bifenthrin, methomyl, chlorpyrifos-methyl)에 대해 네 종류의 판별장치는 상이한 약제 감수성을 보였다. ED는 bifenthrin, AD는 methomyl 및 ED와 AM은 chlorpyrifos-methyl에 대하여 약제 감수변이를 판별하는 데는 각각 효과적이었다. 이상의 본 연구에서는 개발된 검색장치는 간편하고 신속하게 특정집단의 약제 저항성개체의 빈도수를 알려줌으로 효과적인 방제방법을 선정하는데 이용될 수 있다. 특히, 각 지역의 지도소에서 이 검색장치를 이용할 경우 객관적이고 합리적인 현장 농민에게 지도할 수 있겠다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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