한국산 표고버섯 균사체를 액체배양하여 천연항암물질로 알려진 단백다당체를 추출한 후 그 물질의 특성에 대하여 검토하였다. 균사체의 최적 재양조건을 TGY배지로 조사한 바 온도 $25^{\circ}C$, 배양초기 pH4.0, 교반속도 300rpm, 균사배지 접종량을 10.0%로 하고 산소 통기량을 1.0volume of ait/volume of medium/mimute으로 하였을때 가장 양호한 조건이였으며, 대량생산 하기 위한 SCM배지에서 최적의 C/N비는 13.1오써 7일간 배양하였을때 18.8g/L의 균사령을 얻었으며, 이때 생산수율은 0.46으로 나타났다. 발효가 끝난 배양액에서 균사, 여액 그리고 배양액의 전체에서 단백다당체를 분리한 결과 각 분획에서 단백다당체가 각각 0.55%, 0.12%, 0.69%가 회수되어 배양액 전체에서 단백다당체를 추출하는 것이 바람직하며, 추출방법으로 열수추출, glass bead추출 및 cellulasa처리를 하여 단백다당체의 수율을 비교한 결과 0.25-0.5mm glass nead로 30분간 균사체를 분쇄한 다음 열수추출을 1시간을 하였을때 990mg/100ml의 단백다당체를 얻을 수 있었다. 고단백다당체를 1차 단백질 가수분해 효소로 분해하고, EDAE cellulose 및 Sepadex G-100 column chromatography로 정제한 후, TLC/FLD, ultracentrifugation한 결과 순수한 물질임을 알 수 있었다. 단백다당체의 항암효과 조사중 in vitro배양에서 $P_{388}$과 $L_{1210}$에 대한 단백다당체의 활성단위 1 unit는 1mg정도였으며, 인체의 장암세포인 HCT-48, HRT-18, HT-29 밀 간암세포인 Hep G2 대한 생육저해 단위는 각각 4.4, 3.6, 6.6, 2.6mg이었다. HCT-48과 Hep G2 세포의 크기 분포도는 대조군에 비하여 시간이 경과함에 따라, 그리고 단백다당체의 농도가 증가함에 따라 peak가 작은 size 쪽으로 이동하였다. 또, 단백다당체를 첨가 배양한 HCT-48과 Hep G2세포의 현미경 관찰에서 본래의 암세포 형태가 변형되고 크기가 감소하며 세포사이의 경계막이 흐트러지면서 세포수가 감소하고 사멸하였다. In vivo실험에서는 대조군보다 단백다당체를 첨가한 군에서 항체 형성능력이 대조군에 비하여 형질세포가 2배로 증가하였다. 단백다당체의 화학적 성분 분석에서 다당함량은 46.1%이면 구성다당류는 glucose, galactose, mannose, xylose로 구성되었고 단백질의 함량은 7.28%이며, 구성아미노산은 15종의 아미노산으로 되었다. 또 무기물은 Na, K, Zn, Ca등의 순으로 이루어 짐을 알 수 있었다.
차가버섯의 균사생육에 적합한 배지로는 BMYA 배지, MCM 배지로 조사되었으며 이 결과 MYA를 공시균주의 기본배지로 사용하였다. 배양환경 조사로 균사생육에 적합한 온도는 $25^{\circ}C$, 초기 적정 pH는 $6.0{\sim}7.0$으로 나타났다. 영양원 선발로 탄소원은 2%의 농도에서 Dextrose를 사용하였을 때 균사 생장 및 밀도가 높게 나타났다. 질소원은 0.2%의 농도에서 Yeast extract를 사용하였을 때 균사생장 및 밀도가 높게 나타났다. 무기염류 조사에서는 여러 가지 무기염류 사이에 큰 차이를 보이지는 않았지만 0.1%의 농도에서 $K_2HPO_4$를 사용하였을 때 약간의 높은 균사 생장을 보이는 것을 확인할 수 있었다. 차가버섯의 액체 접종원 배양환경 조사에서 균사절편 6개 절편을 접종하는 것이 삼각플라스크 배양에 적당한 것으로 나타났다. 또한 균사의 형태가 pellet 형태로 생장이 되었다. 배양기간에 따른 균사 생육조사에서 삼각플라스크 액체배양 시 300ml의 진탕배양용 Shake flask에 균사 절편 6개를 접종하여 22일간 배양하였을 때 높은 균체 건중량을 보였다. 현미배지를 이용한 균사체 형성에 관한 조사에서는 현미배지의 수분함량에 따른 조사를 하여 본 결과 현미 200 g와 수분을 200 ml로 하였을 때 균핵형성이 가장 좋게 나타났다. 4개의 수종을 이용한 균사배양 실험 결과, 참나무, 자작나무, 은사시나무, 오리나무의 4종 모두 균사 생장이 잘 되는 것을 확인할 수 있었다.
인삼모상근의 생장에 영향을 미치는 auxin과 CH의 효과를 규명하기 위하여 auxin류인 IBA, MA, NAA와 아미노산 화합물인 CH를 각각 농도별로 처리하여 MS 고체배지와 액체배지에서 50일간 배양후 수거하여 생중량과 건중량을 측정하여 농도별로 생장률을 측정한 결과, 인삼모상근의 생장에 미치는 auxin의 효과는 고체배양시에는 IBA를 1 mg/L의 농도로 암배양하는 것이 가장 효과적이었으며, NAA 1 mg/L의 농도로 광배양 하는 것도 효과적이었다. 반면에 IAA와 CH는 인삼모상근의 생장에 효과가 없었다. 액체배양시에는 IAA와 NAA를 처리했을 때 농도의 증가에 따른 생장의 증가는 보이지 않고 생장의 감소 없이 거의 일정하게 그 수준이 유지되었으며 IBA와 CH는 모두 인삼모상근의 생장을 오히려 억제하는 경향이었다.
상황버섯 자실체, 액체배양 균사체 및 배양액으로부터 고분자물질(polymer)을 추출하여 면역활성을 anti-complementary assay 방법으로 측정하였다. 자연산과 인공재배 자실체로부터 생산된 polymer의 면역활성은 각각 65.77%와 63.94%로 나타나 큰 차이를 보이지 않았다. 자실체, 균사체 및 배양액으로부터 추출한 polymer의 면역활성 측정결과, 균사체는 41.95%, 배양액은 21.87%로 자실체 보다 낮게 나타났다.
거미줄곰팡이인 R. oryzae N174를 이용한 액체종국 배양기술을 개발하기 위해, 밀기울 농도별(0, 5, 10, 15 및 20%)로 액체종국을 제조하여 이들의 품질 특성을 조사하였다. 배지에 밀기울 첨가량이 많을수록 균사체량이 많아졌을 뿐 아니라 산도, 아미노산도가 증가하는 특성을 보였다. 또한, 밀기울을 5% 첨가한 군에서 ${\alpha}$-amylase와 glucoamylase의 활성도가 높았으며 acidic protease의 경우에는 15% 밀기울 첨가 배지에서 활성도가 높았다. 배양시간 별(0, 24, 48, 72 및 96 hrs) 효소 활성은 48~72시간에 효소활성이 가장 높은 것으로 나타났다. R. oryzae N174 액체종국 최적조건은 5~15% 밀기울 배지에서 48~72시간 배양이 최적조건이었다. 이를 토대로 밀기울 액체종국을 제조하여 저장온도와 저장 기간을 달리하여 저장한 후, 밀누룩 제조시 종국으로서 적합한지를 구명하고자 하였다. 제조된 밀누룩의 효소 활성뿐만 아니라 pH, 산도 및 환원당 함량을 비교 분석한 결과, 저장온도와 상관없이 하루 정도 저장한 액체종국을 사용하여 만든 밀누룩에서 높은 수치를 보였다. 저장조건에 따른 형태학적 변화를 살펴본 결과, 저장된 액체종국에서 균사체의 생육과 포자의 생성유무에 따라 밀누룩의 효소 활성에 영향을 미칠 것이라는 예상과는 달리 각 효소의 활성과 균사체의 생장, 포자의 생성과는 큰 차이가 보이지 않았다.
약용버섯의 균사체(Ganoderma lucidum 7094, Fomitella fraxinea 81003, Phellinus igniarius 26005)를 곡류와 같은 고체재료에 배양하고 발효된 곡류의 유리당 조성 변화를 관찰함으로써 기능성식품 개발의 가능성을 검토하였다. 담자균사체의 대량배양 조건 실험을 실시한 결과, 냉침에 의해 최대수화에 도달한 곡물을 배양용기에 담고, 액체배양 후 균질화한 담자균사체를 곡물에 접종함으로써 접종초기 짧은 시간에 균사가 완전히 활착되도록 할 수 있었다. 또한 균사 배양중기에 멸균 증류수를 첨가함으로써 균사의 활력을 유지시킬수 있었다. 담자균사체는 종류에 따라 유리당 총량 및 구성비에 있어서 큰 차이를 나타내었다. 또한 담자균사체가 배양된 곡물의 유리당 함량을 측정한 결과, 유리당 총량 및 대부분의 유리당 함량이 곡물 자체에서 보다 증가하였으며, 담자균과 곡물배지의 종류에 따라 당의 이용성에 큰 차이를 나타내었다.
양송이(Agaricus campestris var. bisporus)의 액체배양을 위하여 TGY 배지(培地)에서의 배양조건을 보면 $27{\sim}30^{\circ}C$ 진탕배양에서 pH는 배양일수에 따라 증가하는 경향을 나타내었고, 배양(培養) 12일에는 균체량의 생산도 많았고 질소함량도 7%를 유지하였으며, 배지중 탄소원은 거의 소실되었다. 배양기의 질소원으로는 ${(NH_4)}_2HPO_4$에서 수율(收率)이 좋았고, yeast extract 를 첨가하였을 때 균사체량이 더 증가하였다. 탄소원으로서는 glucose 가 가장 좋았고 fructose, maltose, lactose, sucrose 는 거의 비슷하였으며 가용성 전분은 거의 자화(資化)하지 못하였다. 양송이 균사체(菌絲體)는 단백질 함량이 48%이고 유리(遊離)아미노산으로서는 arginine, histidine, isoleucine, leucine, lysine, phenylalanine, proline, tyrosine 의 8종이 검출되었으며 단백질에는 각종 필수(必須)아미노산 특히 lysine, threonine이 많이 포함되어 있으므로 고품질(高品質)의 단백질 식품으로서 가치가 있음을 보여주었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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