• 제목/요약/키워드: 세포생존

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WAP-EPO 유전자 도입 형질전환돼지의 계대번식시 유전자 전이효율에 관한 연구

  • 이연근;박진기;민관식;성환후;임기순;양병철;김광식;김진회;장원경
    • 한국동물번식학회:학술대회논문집
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    • 한국동물번식학회 2001년도 춘계학술발표대회
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    • pp.14-14
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    • 2001
  • 본 연구는 생명공학 관련 기술개발에 의하여 신소재 물질을 생산하고 사람에게 안전하고 생리활성이 높은 고가의 의료용 단백질 생산기술을 체계화하며 형질전환 가축을 이용한 유용물질 생산에 따른 산업화와 부가가치의 극대화에 그 목적이 있다. 유즙으로 사람의 빈혈치료제인 EPO(Erythropoietin)를 분비할 수 있는 형질전환돼지를 생산하기 위하여 WAP(Whey Acidic Protein) Promoter(2.6kb) 하류에 사람의 조혈촉진유전자(EPO: 2.6kb)를 연결시켜 미세주입용 재조합 벡터(WAP-EPO : 약 7.8kb)를 구축하였다. 구축된 재조합 벡터를 1세포기 수정란에 약 2ng/ul 농도로 미세주입한 다음 외과적 방법으로 이식하였다. 이식 후 분만 모돈으로부터 생산된 자돈의 꼬리조직을 이용 게놈DNA를 추출하고 PCR 검정을 한 결과, 유즙으로 사람의 빈혈치료제를 생산할 수 있는 유전자가 도입된 형질전환돼지 $\boxDr$새롬이$\boxUl$ (♂)를 확인하였다. 또한 이렇게 꼬리조직으로부터 확인된 새롬이의 혈액과 정액을 채취, 게놈 DNA를 추출하여 외래 유전자 삽입여부를 PCR 방법으로 검정한 결과 꼬리조직과 마찬가지로 혈액 및 정액에서도 외래유전자가 삽입되었음을 확인할 수 있었다. 이렇게 생산된 형질전환돼지 $\boxDr$새롬이$\boxUl$를 이용 계대번식을 통한 F$_1$ 산자의 생산과 유전자 전이율을 확인하기 위하여 $\boxDr$새롬이$\boxUl$정액을 이용한 인공수정을 실시하였다. 인공수정은 1999년 7월 1일부터 2000년 9월 8일 까지 총 78두의 모돈을 이용하였으며, 그 중 21두의 모돈이 분만하여 인공수정에 의한 분만율은 26.92%로 나타났다.(Table Omitted) Table 1에서와 같이 새롬이 정액을 이용한 인공수정에 의해 형질전환된 F$_1$ 자돈의 형질전환율은 17.98%로 나타났으며, 32두의 형질전환자돈 중 8두(암:4두, 수:4두)는 분만과 동시에 폐사하였거나 사육중 폐사하여 현재 24두(암:12두, 수:12두)가 생존하여 F$_1$ 간 교배계획에 의해 사육되고 있다. 이 중 암컷 4두는 현재 F$_2$ 자돈 생산과 함께 유즙내로 사람 빈혈치료제의 분비 유무를 검정중에 있으며, FISH 법에 의한 외래 유전자 삽입 검정을 확인 중에 있다.

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LPS로 활성화된 Raw264.7 cell에서 판람근 및 Tryptanthrin의 염증매개물질억제효과 (Effects of Isatidis Radix and it's Active Component, Tryptanthrin on the Production of Inflammatory Mediators in Lipopolysaccharide-activated Raw264.7 Cells)

  • 박숙자;이종록;조미정;박상미;변성희;조일제;김상찬
    • 한방안이비인후피부과학회지
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    • 제24권1호
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    • pp.64-77
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    • 2011
  • Objectives : 판람근(板藍根)은 십자화과에 속하는 대청(大靑) 또는 숭남의 근(根)을 건조한 것이다. 본 연구는 판람근(板藍根)이 청열해독(淸熱解毒)함에 근거하여, LPS로 활성화된 Raw264.7 cell에서 판람근(板藍根)과 그 성분중의 하나인 tryptanthrin이 염증매개물질에 미치는 효과를 살펴보고자 하였다. Methods : 세포생존율은 MTT, nitric oxide (NO)는 Griess reagent를 사용하여 측정하였으며, 각 단백질의 발현량은 Western blot 방법을 사용하였으며, cytokine 및 cyclooxygenase-2 (COX-2)는 ELISA방법을 사용하여 측정하였다. Results : LPS는 NO 및 prostaglandin E2 (PGE2)를 유의하게 상승시켰으며, 판람근(板藍根)추출물 (IRE) 및 tryptanthrin 은 이들을 유의하게 억제하였다. 그러나 판람근(板藍根)의 또 다른 성분인 indigo는 유의한 결과를 나타내지 못하였다. IRE와 tryptanthrin은 inhibitory kappa B alpha의 인산화를 억제하여, nuclear factor-${\kappa}$B (NF-${\kappa}$B)의 핵으로의 전위(轉位)를 억제하여, iNOS 및 cytokine을 억제하였다. IRE와 tryptanthrin의 PGE2 억제는, COX-2의 발현억제에서가 아니라, COX-2의 활성을 억제함에서 기인하였다. Conclusion : 이러한 결과는 판람근(板藍根)이 NF-${\kappa}$B pathway를 경유하여 iNOS의 발현 및 COX-2의 활성을 억제함을 나타내며, 이러한 판람근(板藍根)의 항염증효능은 일부 tryptanthrin의 작용에서 기인함을 시사한다.

버들치 Rhynchocypris oxycephalus에서의 외과적 상처 치유 (Wound Healing of Surgical Incisions in Rhynchocypris oxycephalus)

  • 박인석;임재현;김정혜;김동수
    • 한국양식학회지
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    • 제11권2호
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    • pp.167-172
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    • 1998
  • 버들치 Rhynchocypris oxycephalus의 등지느러미와 가슴지느러미를 연결하는 중간 부위 체측상처를 수술하여, 과립형성 조직 수축 특성과 치유율 및 2차 치유에 관하여 조사하였다. 수술 푸 생존율은 수술 직후 및 수술 후 7일에 대조군의 100%에 비해 각각 95%와 99% 이었다. 수술 후 14일과 42일 사이에 사망은 없었다. 수술후 7~21에 과립형성 조직은 상피화되었으며 수술 후 29일에 과립형성 조직은 상처 주변부로 정상 위치수축을 하였다. 수술 후 35일~42일에 과립형성 조직에는 collagen 섬유가 존재하였고 표피는 잘 분화된 , alarm 물질세포를 내포하고 있었으며 상처 부위의 표피는 모든 어류에서 조직학적으로 정사이어서, 상처 치유는 수술 35일 이내에 완전히 이루어졌다.

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한국산 도꼬마리로부터 항암물질의 분리 및 특성 (Isolation and Characterization of Antitumor Agents from Xanthium strumarium L.)

  • 김현수;이인선;여수환;성림식;유대식
    • KSBB Journal
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    • 제18권4호
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    • pp.324-328
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    • 2003
  • 도꼬마리 추출물의 발암성의 유무를 검토하기 위하여 시험균 S. typhimurium TA98 및 TA100에 대한 변이원성 실험 결과, 추출물 XE-N과 XEA-N의 농도가 증가해도 TA 98 및 TA100 두 균주의 복귀변이 colony 수가 대조구에 비해 변화가 크지 않은 점을 미루어 보아 각 추출물은 변이원성이 없는 것으로 확인되었다. 도꼬마리 추출물 XEA-A, XEA-B 및 XE-A)의 $H_2O$$_2$로 유도된 세포 독성에 대한 억제효과는 각각 58%, 53%, 63%로서 생존율이 2배 이상 증가하였다. 면역 증강 활성은 TNF의 경우 XE-N 추출물에서 2.7배로 가장 높은 활성을 나타내었으며 XEA-N 추출물에서도 2.3배로 높은 활성을 나타내었다. IL-1$\beta$의 생성은 XE-B 추출물에서 높게 나타났으며, IL-2의 생성에는 뚜렷한 활성을 나타내지 않았다. 도꼬마리 추출물 및 정제물을 이용하여 동물에 강력한 발암물질인 MNNG를 투여한 후 항산화 효소계를 측정한 결과, 조직의 해독물질인 glutathione (GSH)의 함량이 도꼬마리 정제물 0.2% 투여군에서 약 44.6%, 도꼬마리 추출물 투여군에서 약 41.5% 증가되었다. 또한 도꼬마리 추출물 및 정제물질은 암억제 유전자인 p53의 발현을 매우 증가시켰다. 이상의 결과에서 도꼬마리 추출물은 전반적으로 항산화능, 면역증강효과, 암 예방효과 등의 기능성이 있는 것으로 입증되었으며, 각 기능에 따른 다양한 물질을 분리하여 신소재로의 개발 가능성이 큰 약제임이 확인되었다.

연근 추출물에서 주름개선 소재의 개발 (Development of Anti-Wrinkle Agent from Nelumbo nucifera Root Extract)

  • 김희진;김타곤;강환열;백현;전혜영;김보영;김동욱
    • Korean Chemical Engineering Research
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    • 제48권4호
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    • pp.413-416
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    • 2010
  • 본 연구에서는 연근의 추출물에서 기능성화장품 소재를 개발하고자 하였다. 용매는 70~100%의 에탄올을 이용하였으며, 연근의 유효성분으로 nuciferine을 확인하였다. 연근 추출물의 화장품소재로서의 응용가능성을 보기 위해 안전성시험(MTT assay), 주름개선 효과시험(Elastase 활성저해 시험) 및 항산화효과시험(DPPH free radical scavenging assay)을 실시하였다. 100% 에탄올로 연근을 추출할 경우 $100{\mu}g/ml$의 농도에서 세포생존율이 80% 이상이어서 연근 추출물은 화장품소재로서 비교적 안전함을 알 수 있었다. 또한 연근 추출물은 $100{\mu}g/ml$의 농도에서 elastase 활성억제가 40~50%를 보여주어서 비교적 우수한 주름개선 효과를 나타내었다. 50% 항산화 저해능을 보이는 농도($FSC_{50}$)는 $5.0{\sim}38{\mu}g/ml$로 연근 추출물의 항산화효과가 매우 우수하였다. 따라서 연근 에탄올추출물은 주름개선 기능성화장품 소재로서 그 가능성이 높음을 알 수 있었다.

조직배양기술을 통한 털복주머니란과 복주머니란 기내증식 (Micropropagation of Cypripedium guttatum and Cypripedium macranthos)

  • 배기화;최용의
    • 한국자원식물학회:학술대회논문집
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    • 한국자원식물학회 2010년도 정기총회 및 춘계학술발표회
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    • pp.13-13
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    • 2010
  • 복주머니난(Cypripedium)속 식물은 우리나라에 광릉요강꽃을 비롯하여 털복주머니난, 흰털복주머니란, 복주머니란, 노랑복주머니란등 5종이 분포하는 것으로 알려져 있다. 광릉요강꽃과 털복주머니란 두 종은 환경부에서 지정한 멸종위기 식물 1급과 2급에 지정되어 보호를 받고 있고 나머지 3종은 제도적으로도 보호를 받지 못하는 실정이다. 본 연구에서는 충분히 성숙한 털복주머니난과 복주머니난의 종자에 NaOCl처리를 하여 발아율을 향상시킬수 있었는데 이러한 전처리가 발아에 미치는 원인에 대한 연구를 실시하였다. 털복주머니란의 무균적인 종자발아는 1.0% NaOCl 처리구에서 70% 이상의 종자발아율을 보였으며, POM배지가 MS배지보다 신초분화가 양호했다. GA3와 활성탄(Activated charcoal)의 혼합첨가는 신초증식에 효과적이었다. 신초분화 후 저온처리는 신초의 증식 율을 증가시켰다. 한편 NaOCl 농도(0, 1, 3, 5, 10%)와 NaOCl 처리시간(0, 5, 15, 30, 45, 60분)에 따라서 복주머니란의 종자발아를 확인한 결과, NaOCl 1%를 30분간 처리하였을 때 가장 높은 발아율을 나타냈다. NaOCl을 처리하여 종자의 종피상태를 SEM과 TEM으로 관찰한 결과 NaOCl의 처리는 종피 세포벽의 부분적 해리 및 작은 구멍을 만들게 하였는데 이러한 종피의 물리화학적 변화가 물과 양분의 이동을 원활히 하여 종자의 발아를 촉진하는 것으로 사료된다. 복주머니난의 신초분화에 미치는 casein과 활성탄의 효과를 알아본 결과 casein 200 mg/L와 활성탄 200 mg/L를 혼합 첨가한 실험구에서 가장 높은 신초분화율을 보였다. 토양순화 후 생존률은 극히 저조했으며 30 개체중에 5 개체만이 다음해 어린동아를 싹틔우는 것을 확인 하였다. 본 결과들을 종합하여 보면 멸종위기식물, 특히 털복주머니란과 복주머니란의 조직배양을 통해서 서식지외 보존방안(기내증식)에 관해 가능성을 제시하였다고 생각되어 진다.

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갯버들 추출물의 항산화 및 미백활성 연구 (Studies on Antioxidant and Whitening Activities of Salix gracilistyla Extracts)

  • 정용운;박영진
    • 대한화장품학회지
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    • 제44권3호
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    • pp.317-325
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    • 2018
  • 본 연구는 갯버들 추출물의 항산화 활성 및 미백활성을 평가하기 위해 수행하였다. 갯버들 줄기의 용매별 추출물의 총 폴리페놀 함량은 142.60-151.95 mg GAE/g, 총 플라보노이드 함량은 83.43-2.60 mg CE/g으로 확인되었다. 갯버들 줄기의 용매별 추출물의 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) 라디칼 소거활성을 평가한 결과 30% 메탄올 추출물이 가장 높은 항산화 활성($IC_{50}$; $19.68{\mu}g/mL$)을 나타내었다. Tyrosinase 억제활성은 4종류의 용매 추출물 모두 유사하게 평가되었으며, 30% 에탄올 추출물 $200{\mu}g/mL$ 농도가 가장 높은 억제활성(35.18%)을 나타내었다. 갯버들 추출물 중 메탄올 추출물은 B16F10 세포주의 생존율에 영향을 미치지 않은 농도에서 유의적으로 멜라닌 생합성을 저해하는 것으로 확인되었다. 결과적으로 갯버들 추출물은 항산화 및 미백활성을 가지는 효과적인 화장품 성분으로 사용 가능할 것으로 사료된다.

자가지방주입에서 지방세포의 생존을 위한 적절한 원심분리 조건 (Proper Condition of Centrifugation for the Fat Cell Viability in the Autologous Fat Injection)

  • 장경민;김종엽;양정덕;정호윤;박재우;조병채
    • Archives of Plastic Surgery
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    • 제33권4호
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    • pp.423-426
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    • 2006
  • Purpose: In the autologous fat injection, the centrifugation is useful for the refinement of harvested fat. As it can be an injury to the fat cell, we studied the fat cell viability with the change of centrifugation velocity and centrifugation time in order to get the limits of centrifugation velocity and centrifugation time. Methods: We used the Colman System in 8 patients. We handled the control group with no centrifugation, group I with the centrifugation with 1500rpm for 1 minute, group II with 1500 rpm for 3 minutes, group III with 1500rpm for 5 minutes, group IV with 3000rpm for 1 minute, group V with 3000rpm for 3 minutes, group VI with 3000rpm for 5 minutes, group VII with 5000rpm for 1 minute, group VIII with 5000rpm for 3 minutes, group IX with 5000rpm for 5 minutes. We used the collagenase to separate the fat tissue. We had evaluated the fat cell viability by checking survival cell counts. Results: There was no significance in group I, II, IV, V, but there was significant difference in group III, VI, VII, VIII, IX. Conclusion: The centrifugation with 3000rpm for 3 minutes is recommendable.

전기장 전처리 및 금속 정밀여과 공정을 이용한 하수처리 (Sewage Treatment Using Electric Field Pretreatment and Metal Membrane Microfiltration Process)

  • 정종태;김종오
    • 한국지반환경공학회 논문집
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    • 제8권5호
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    • pp.15-21
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    • 2007
  • 본 연구에서는 금속 정밀여과 시스템에 전기장 처리 공정을 적용할 경우 막오염 저감, 미생물 불활성 그리고 응집효과에 미치는 영향을 실험적으로 검토하였다. 전기장 처리공정을 적용할 경우의 누적투과량은 전기장 처리공정을 적용하지 않은 경우보다 높은 값을 보였다. 특히 수리학적체류시간을 증가시킬 경우 누적투과량 증가뿐만 아니라 총저항 값을 감소시키는 것으로 나타났다. 또한 전기장 강도를 증가시킬 경우 $100{\mu}m$ 이하의 입자크기를 가지는 입도분포량이 증가했고 미생물 생존 개체수는 감소했다. 이는 입자들의 쪼개짐 현상과 미생물 불활성에 의한 세포 파괴현상 때문이다. 전기장 강도 10kV/cm에서 95%의 탁도 제거율을 비교한 결과 전기장 처리 공정을 적용한 경우가 적용하지 않은 공정보다 약 75%의 응집제 절감효과가 있는 것으로 나타났다.

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한국인에서 구강 편평세포암종의 5년 생존율 (OVERALL FIVE-YEAR SURVIVAL RATE IN SQUAMOUS CELL CARCINOMA OF ORAL CAVITY)

  • 오민석;강상훈;김형준;조정림;류재인;남웅;차인호
    • Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons
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    • 제35권2호
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    • pp.83-88
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    • 2009
  • The purpose of this epidemiologic study was to provide clinically useful information on the fundamentals for both the diagnosis and treatment planning of oral squamous cell carcinoma, which comprises $80{\sim}90%$ of all oral cancers. One hundred and forty two patients diagnosed with oral squamous cell carcinoma were selected from a total of 220 patients with oral malignancies. The patients' medical and follow-up records were reviewed and their survival was traced. The highest occurrence rate was observed in those aged between 60 and 69 years. The tongue was the most common primary site(31.7%) for oral squamous cell carcinoma. The survival rate was calculated using the Kaplan-Meier method. The overall five-year survival rate of oral squamous cell carcinoma patients was 66.90%. The 5-year survival rate according to stage was 85.82% for stage I, and 49.98% for stage IV. The five-year survival rate according to the originating site was 91.67% for the retromolar trigone, 75.30% for the tongue, and 62.41% for the maxillary gingiva. In terms of cell differentiation, the majority(58.5%) was the well-differentiated type, which had a 5-year survival rate of 70.62%.