• Journal of Acupuncture Research
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• v.25 no.2
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• pp.41-57
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• 2008

목적 : 이 연구는 Vipera lebetina turanica의 사독약침액(蛇毒藥鍼液)(Snake venom toxin, SVT)이 인간 신경아세포종의 암세포주인 SK-N-MC 세포에서 암세포성장의 억제 및 그 기전에 대하여 살펴보고자 하였다. 방법 : SVT를 처리한 후 SK-N-MC의 성장억제를 관찰하기 위해 CCK-8 assay와 LDH assay를 시행하였고, apoptosis 평가에는 세포형태의 관찰과 DAPI, TUNEL, Annexin V-PI double staining assay 및 cell detachment assay를 시행하였다. 세포자멸사 관련 세포기전을 보기 위하여 세포주기, 세포내 칼슘량, 세포내 활성산소량 및 미토콘드리아의 세포막전위 변화를 측정하였고, DNA fragmentation assay를 시행하였으며, 세포자멸사 조절 단백인 Bax, Bcl-2, caspase-3, -9의 발현 변화 관찰에는 western blot analysis를 시행하였다. 결과 : SK-N-MC 세포에 SVT를 처리한 후, 신경아세포종 세포의 성장, Apoptosis의 유발 및 기전에 영향을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. SVT를 처리한 SK-N-MC 세포 관찰에서 $20{\mu}g/m{\ell}$ SVT 처리가 암세포성장의 유의한 억제를 나타내었다. 세포독성 관찰에서 SVT처리는 처리하지 않은 것에 비하여 증가를 나타내었다. 2. 세포자멸사 평가에서 SVT를 처리한 SK-N-MC 세포는 세포자멸사의 특징적 형태를 나타내었다. TUNEL assay에서는 세포자멸사 활성세포가 미약하게 나타난 반면 cell detachment assay와 Annexin V-PI double staining에서는 각각 세포박리와 세포자멸사 활성세포의 유의한 증가를 나타내었다. 3. 세포자멸사 관련 세포기전연구에서 SVT를 처리한 SK-N-MC 세포의 세포주기, 세포내 칼슘량 및 DNA fragmentation에는 유의한 변화가 관찰되지 않은 반면 세포내 활성산소 양은 유의한 증가를 나타내었고, 그에 따른 미토콘드리아 세포막 전위의 유의한 변동이 관찰되었다. 4. SVT를 처리한 SK-N-MC는 세포자멸사 관련 단백 발현에서 caspase-9에 대해 유의한 증가를 나타내지 않았으나 Bax 및 caspase-3의 유의한 증가와 Bcl-2의 유의한 감소를 나타내었다. 결론 : 이상의 결과는 SVT가 세포내 활성산소를 증가시키므로 미토콘드리아의 세포막전위에 변화를 일으켜 인간 신경아세포종 세포주인 SK-N-MC의 세포박리와 유관한 세포자멸사를 유발하므로 증식억제 효과가 있음을 입증한 것이다.

• Journal of Acupuncture Research
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• v.25 no.3
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• pp.53-69
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• 2008

목적 : 이 연구는 Vipera lebetina turanica의 사독약침액(蛇毒藥鍼液)(Snake venom toxin, SVT)이 인간 신경아세포종의 암세포주인 SK-N-SH 세포에서 암세포성장의 억제 및 그 기전에 대하여 살펴보고자 하였다. 방법 : SVT를 처리한 후 SK-N-SH의 성장억제를 관찰하기 위해 CCK-8 assay와 LDH assay를 시행하였고, apoptosis 평가에는 세포형태의 관찰과 DAPI, TUNEL, Annexin V-PI double staining assay 및 cell detachment assay를 시행하였다. 세포자멸사 관련 세포기전을 보기 위하여 세포주기, 세포내 칼슘량, 세포내 활성산소량 및 미토콘드리아의 세포막전위 변화를 측정하였고, DNA fragmentation assay를 시행하였으며, 세포자멸사 조절 단백인 Bax, Bcl-2, caspase-3, -9의 발현 변화 관찰에는 western blot analysis를 시행하였다. 결과 : SK-N-SH 세포에 SVT를 처리한 후, 신경아세포종 세포의 성장, Apoptosis의 유발 및 기전의 영향을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. SVT를 처리한 SK-N-SH 세포 관찰에서 세포독성은 농도의존적으로 증가하는 경향이 있는 반면 암세포성장의 유의한 억제는 $20{\mu}g/m{\ell}$ SVT에 의해서만 나타났다. 2. 세포자멸사 평가에서 SVT를 처리한 SK-N-SH 세포는 세포자멸사의 특징적 형태를 나타내었다. TUNEL assay에서는 세포자멸사 활성세포가 미약하게 나타난 반면 cell detachment assay와 Annexin V-PI double staining에서는 각각 세포박리와 세포자멸사 활성세포의 유의한 증가를 나타내었다. 3. 세포자멸사 관련 세포기전연구에서 SVT를 처리한 SK-N-SH 세포의 세포주기, 세포 내 칼슘양 및 DNA fragmentation에는 유의한 변화가 관찰되지 않은 반면 세포내 활성산소 양은 유의한 증가를 나타내었고, 그에 따른 미토콘드리아 세포막 전위의 유의한 변동이 관찰되었다. 4. SVT를 처리한 SK-N-SH는 세포자멸사 관련 단백 발현에서 Bax에 대해 유의한 증가를 나타내지 않았으나 caspase-3 및 caspase-9의 유의한 증가와 Bcl-2의 유의한 감소를 나타내었다. 결론 : 이상의 결과는 SVT가 세포 내 활성산소를 증가시킴으로써 미토콘드리아의 세포막전위에 변화를 일으켜 인간 신경아세포종 세포주인 SK-N-SH의 세포박리와 유관한 세포자멸사를 유발함으로써 증식억제 효과가 있음을 입증한 것이다.

• The Korean Journal of Zoology
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• v.34 no.4
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• pp.460-468
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• 1991

계배 limb bud간충직 연골원성 세포로부터 연골원세포로의 분화과정에서 Ca2+의 역할을 추구해 보기 위하여 Hamburger-Hamilton stage 23/24의 계배 limb bud간충직세포들을 미세배양법으로 배양하면서, Ca2+, calcium ionophore인 A23187, calcium channel blocker인 D600을 각각 농도 및 처리기간을 변화시켜 처리하면서 연골화의 정도를 검정하여, 연골세포 분화에 미치는 Ca2+의 작용양상을 분석하였다. 그 결과 Ca2+은 3 mM의 농도로 배양초기에 처리하였을 때 가장 효과적으로 연골화를 촉진하였으며, A23187(0.05 $\mu$ M) 처리는 세포내로 Ca2+유입을 증가시켜 연골화를 촉진시킨 반면, D6OO(30 $\mu$ M이하) 처리는 세포내로 Ca2+ 유입을 차단시킴으로서 연골화를 억제하는 것으로 나타났다. 이러한 결과에 따른 세포내로의 칼슘 유입 변화는 45Ca로 확인하였다. 그러므로 Ca2+에 의한 간충직세포의 연골세포로의 분화촉진 작용은 Ca2+이 연골화의 응집시기에 세포간의 접촉을 유도할 뿐만 아니라 배양 초기에 Ca2+이 세포 내로 들어감으로써 수반되는 일련의 기작에 의한 것임을 알았다.

• Food Science of Animal Resources
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• v.30 no.3
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• pp.443-448
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• 2010

Casein phosphopeptide (CPP) enhances calcium absorption in humans. Lactic acid bacteria (LAB) are capable of synthesis of cell-surface proteinase, which can hydrolyze milk protein and release several types of peptides in the medium. This study was conducted to characterize proteinase of LAB and to evaluate the CPP production from bovine milk. The content of CPP of milk produced by cell-free extract of LAB was determined based on the quantity of decomposed peptide from casein using the O-phthaldialdehyde (OPA) method. The proteolytic activity of LAB was assayed using fluorescein isothiocyanate (FITC)-labeled casein. Casein appeared to be a better substrate than whey proteins for extracellular proteinases of LAB. During fermentation, milk proteins were hydrolyzed by extracellular proteinase of LAB, resulting in an increase in the amount of free $NH_3$ groups. Overall, the results presented here indicate that CPP produced by LAB may be a promising material for novel applications in the dairy industry.

• Journal of Plant Biotechnology
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• v.36 no.1
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• pp.59-63
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• 2009

Calcium ion ($Ca^{2+}$) is thought to play the important role as a second messenger for signal transduction that results in various physiological responses to cope with developmental programs and environmental changes in plant. In plant cells, the central vacuole functions as a major calcium store, which is important for both signal transduction and preventing cytotoxicity. Although there is evidence for the biochemical characterizations of a calmodulin-regulated $Ca^{2+}$-ATPase (ACA11) localized to vacuole membrane, the biological function to ACA11 in plant has not been verified. In this study, we show that the cell death as the hypersensitive response (HR) in mature leaves is induced in transgenic plant of a vacuole ACA-type $Ca^{2+}$-ATPase, ACA11. Evidence that cell death phenotype is the result of ACA11 gene silencing is provided by Western blot assay using membrane fraction proteins extracted from transgenic plant. The 3, 3'-diaminobenzidine (DAB) staining study provides that the cell death is caused by the increase of reactive oxygen species (ROS) in mature leaves of transgenic plants.

• Journal of Life Science
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• v.19 no.7
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• pp.892-898
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• 2009

MIF is a progesterone analogue and is known as a potent progesterone antagonist. Although MIF has been known to inhibit prostate cancer cell growth, its molecular mechanisms are not yet clear. In the present study, when the cells were treated for 2-4 days with 5-40 $\mu$M of MIF, the growth and viability of LNCaP cells were significantly decreased in a dose- and time-dependent manner. When the cells, cultivated in a normal 2 mM calcium concentration medium, were treated with 15 $\mu$M MIF for 1 day, the intracellular calcium level increased by 26% compared to the control. Similar results were also found in cells located in the calcium-free reaction buffer, indicating that MIF induced the increase of intracellular Ca$^{2+}$ levels, regardless of the presence of calcium in the surrounding medium. In the cells treated with various concentrations of MIF, the intracellular calcium levels increased in a dose dependent manner. Cells treated with MIF revealed typical early apoptotic signs, i.e., chromosome condensation and nuclei fragmentation. In cells treated with 40 11M MIF, Bcl-2 decreased to 19% of the control. The expression of Bax increased to almost 2 fold of the control. These results demonstrated very clearly that MIF treatment blocks the expression of Bcl-2 but stimulates the expression of Bax. According to the results of the present investigation, the apoptotic mechanism of MIF is triggered by intracellular modulation.

• 한국전자현미경학회:학술대회논문집
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• 2005.11a
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• pp.46-47
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• 2005

• Applied Microscopy
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• v.19 no.1
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• pp.1-18
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• 1989

It has been debated whether postischemic reperfusion is necessarily beneficial to salvage the myocardium after ischemic insult or not. Therefore, this study was undertaken to compare the ultrastructural changes as well as the distribution of $Ca^{2+}$ in the ventricular myocardial cells after transient ischemia and after postischemic reperfusion, and to suspect to what extent the postischemic reperfusion is beneficial. After 10 minutes of ischemia, the heart developed wide I bands, glycogen depletion, intramyofibrillar edema, mitochondrial swelling, clumping and migration of chromatin, ghosts of lipid droplets, disintegration of cell junctions, sarcolemmal disruption, and loss of $Ca^{2+}$ binding capacity of the sarcolemma and the mitochondria. In spite of reperfusion, in a large number of cells, the ultrastructure was more severely damaged, however, $Ca^{2+}$ binding capacity of the sarcolemma and the mitochondria restored. These results suggest that postischemic reperfusion may help the myocardial cells to restore their function to control $Ca^{2+}$ to a certain extent, but that it could aggravate the ischemic insult.

• The Korean Journal of Pharmacology
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• v.23 no.1
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• pp.33-44
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• 1987

NADPH oxidase dependent superoxide generation and phagocytosis in neutrophils stimulated with opsonized zymosan or heat aggregated IgG were coincided with the process of calcium uptake. The responses in activated neutrophils were enhanced with increasing concentrations of extracellular calcium and these effects were significantly inhibited by calcium chelators, EGTA and EDTA. The superoxide generation in activated neutrophils was reduced by dantrolene and chlorpromazine. Calcium antagonists, bepredil, diltiazem, verapamil, nifedipine and nimodipine effectively inhibited the calcium uptake, superoxide generation and phagocytosis in activated neutrophils, and NADPH oxidase activity was also inhibited. The results suggest that calcium antagonists may inhibit the superoxide generation and phagocytosis in activted neurtophils by the inhibition of calcium influx and by the action on intracellular redistribution of calcium and NADPH oxidase system.

• Proceedings of the Korean Society of Applied Pharmacology
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• 1994.04a
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• pp.274-274
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• 1994

본 연구에서는 토끼신장 근위세뇨관 일차배양세포에서 브라디키닌의 생리작용이 phospholipase D (PLD)에 의해 매개되는지를 살펴 보기위해 PLD 효소반응의 특이한 성질인 transphosphatidylation 반응의 생성물인 phosphatidylethanol (PEth) 의 세포내 양을 측정함으로 PLD 효소의 관련성을 규명할 수 있었다. 시간경과에 따른 phosphatidic acid (PA) 및 diacylglycerol (DAG) 의 생성을 살펴본 결과 PA가 DAG보다 먼저 생성되어 최고치 (30초)에 도달하였고 DAG는 1분이후부터 5분까지 서서히 생성되는 양상을 나타내었다. 또한 0.5에서 5％까지의 에탄올 존재하에 PA 및 PE소 생성량을 비교해본 결과 에탄올량이 증가함에 따라 PA는 감소하는 반민 PEth 의 생성은 계속 증가하였다. 한편 브라디키닌 농도 변화 실험에서는 브라디키닌농도가 증가함에 따라 PA 및 PEth 둘다 생성이 증가되었다. 이러한 결과로부터 토끼신장 근위세뇨관 세포막에 존재하는 브라디키닌수용체는 브라디키닌에 의해 activation 시 PLD를 직접적으로 활성화시켜 그들의 작용을 세포내로 전달한다는 사실을 알 수 있었다. 또한 PLD 효소활성의 activator로 수용체효능 제외에 칼슘이온, protein kinase C (PKC) 등이 몇몇 다른 실험에 의해 밝혀져 있고, G protein 역시 PLD 효소 활성을 조절하는 역할이 있음이 알려졌다. calcium ionophore 및 칼슘채널길항제인 verapamil을 이용한 실험에서 우리는 브라디키닌의 PLD 활성화는 칼슘이온에 의존적인 경로 및 비의존적인 경로가 같이 존재함을 알수 있었다. 또한 브라디키닌의 PLD 활성화기전이 PKC 의존적인지를 살펴보기위해 PKC activator(PMA) 및 inhibitor (staurosporine)를 이용한 실험에서 브라디키닌은 신장세포에서 PKC를 통하여 PLD를 활성화시킴으로 신호전달을 하는 것으로 추측되었다. 마지막으로 가수분해안되는 G protein 유도체인 GTPrS 및 G protein 활성물질 NaF, 백일해독소등을 이용한 실험에서 G protein 의 PLD 조절활성을 확인할 수 있었다.