Alkaline phosphatase from Culex pipiens pallens was examined to determine the optimal assay condition and to assay the activity during ovarian development. The activity of alkaline phosphatase in a male and a nongravid female continuously were declined after eclosion. But by the stimulus of a blood meal, the enzyme activity was increased dramatically. At 30 hr. after a blood meal, the maximal activity was reached and then declined. And after 48 hr. after a blood meal, the second activity increase was revealed. This second increase was maintained up to oviposition. The first activity increase was revealed in the midgut and the second increase was done in the ovary to assay the organ distribution of alkaline phosphatase. In electrophresis data, it was shown 5 isozyme bands, ALP-1 and ALP-2 in the ovary, ALP-3 in the thorax and the midgut, and ALP-4 and ALP-5 in the thorax, the fatbody and the midgut in crude extract at 30 hr. after a blood meal. One the same ovary pattern were shown at 72 hr. after a blood meal.
The egg development and early life history of Korean endangered natural monument fish, Iksookimia choii, were investigated in 2006. The eggs from the females were obtained by injecting 10 IU $g^{-1}$ of human chorionic gonadotropin and inseminated by wet method in the laboratory. The fertilized eggs were $1.1\sim1.3mm$ in diameter and had no oil globules. Hatching of the embryo began about 24 hrs after fertilization under water temperature of $25^{\circ}C$. The newly-hatched larvae were $2.5\sim2.7mm$ in total length (TL), and their mouth and anus were not yet opened. Six days after hatching, the postlarvae were $4.7\sim5.4mm$ TL, and tip of the caudal notochord was flexed $45^{\circ}$ upward. The juveniles stage was reached when all fin-rays were formed at 35 days after hatching, and their total length were $20\sim22mm$.
The Nakdong nose loach, Koreocobitis naktongensis is an endangered freshwater fish endemic to Korea. The spawning behaviour of the K. naktongensis was observed after treating Ovaprim in laboratory aquarium from 20~27 April 2010. The behavioral patterns were categorized into three stages of pre-spawning, spawning and post-spawning behaviors. Before spawning K. naktongensis usually repeated taking a rest and swimming. On average, initial spawning activity started 11 to 12 hours later after injection with Ovaprim. During the spawning period, the number of spawning acts ranged from 1 to 18. The spawning ratio of female to male was 1 : 1. The male embraced the back of the female's dorsal fin with his lamina circularis. It looked like a complete circle at that time. After spawning, parental care was not observed. Individuals not participating in spawning have been observed to feed on some of the fertilized eggs.
The present study was undertaken to investigate the effects of cooling rate and equilibration time on the survival, in vitro maturation and development to embryos of frozen-thawed bovine immature oocytes(Germinal Vesicle Stage). The cryoprotectants are used 10% ethylene glycol(EG) as permeating cryoprotectant and 0.05M soc.ose(S) or trehalose(T) as low molecular weight nonpermeating cryoprotectants and 5% ficoll(F) or polyvinylpyrrolidone(PVP) as high molecular weight nonpermeating cryoprotectants. Four freezing solution were uysed in this experiment(EFT: 10% EG + 5% F + 0.05M T, EFS: 10% EG + 5% F + 0.05M S, EPT: 10% EG + 5% P + 0.05M T, EPS: 10% EG + 5% P + 0.05M S). The best equilibration time and freezing solution was 15 min in EPT(83% survival rate of frozen-thawed bovine immature oocytes). When frozen-thawed bovine oocytes were cultured following IVM and IVF, there was no significant difference in cleavage and development rates among the EFT, EFS, EPT and EPS solutions. When 9 blastocysts derived from frozen bovine oocytes were transferred to 6 recipients, two recipients were pregnant. And one was aborted at 45 days of pregnancy and the other had a stillbirth.
Kim, Yong-Jin;Ku, Seung-Yup;Kim, Yoon-Young;Oh, Sun-Kyung;Kim, Seok-Hyun;Choi, Young-Min;Moon, Shin-Yong
Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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v.36
no.4
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pp.265-274
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2009
Objective: MicroRNAs (miR) are known to repress target genes at post-transcriptional level and play important roles in development and maturation of cell. However, the expression profiles of miR during ovarian follicle maturation have not been fully elucidated. Here, we designed this study to investigate the expression profiles of miR in oocytes and granulose cells (G-cells) after in vitro culture according to gonadotropins and adding hCG. Methods: Ovaries from 12-day-old mice (C57BL6) were removed and preantral follicles were isolated and cultured in $20\;{\mu}L$-drop of culture media with supplementation of either rFSH, rLH, or rFSH+rLH. After their full maturation, follicles were incubated with rhCG and rEGF. RNA was isolated from oocytes and G-cells, and real-time PCR were performed with primers of miR known to be expressed in the mouse ovary (mmu-miR-16, -miR-27a, -miR-126, -miR-721). Results: FSH+LH group showed the highest ovulation and MII rates among gonadotropin groups. The profiles of miRs in oocytes and G-cells differed according to gonadotropin groups and adding hCG. The profiles of miRs showed divergent changes between oocytes and G-cells. Conclusion: miR expression profiles are altered by gonadotropins and supplementation of hCG during in vitro maturation of murine follicles. Target gene study must be necessary to validate these findings.
Spatial variation in the reproductive effort of Manila clam Ruditapes philippinarum is often closely associated with variation in the seawater temperature and food availability, which determines gonad maturity and the quantity of gamates produced during spawning. Previous studies also have reported that severe infection by the protozoan parasite Perkinsus olseni exerts a negative impact on clam reproduction, retarding gonad maturation or decreasing the reproductive effort. In the present study, we investigated impacts of P. olseni infection on the reproductive condition of Manila clam during a spawning season. Histology revealed that 54% of female clams in Wando off the south coast were in spawning, while only 10% of the female from Gomso and 0% of the female from Seonjaedo in Gyeonggi bay off the west coast were engaged in spawning at the end of May in 2004. Ray's fluid thioglycollate media (RFTM) assay was applied to assess P. olseni infection and indicated that the infection intensity in Wando ($3,608,000{\pm}258,000cells/g$ wet tissue) was significantly higher than the levels in Gomso ($1,305,000{\pm}106,000cells/g$ wet tissue) and Seonjaedo ($1,083,000{\pm}137,000cells/g$ wet tissue, p < 0.001). The size of the ripe female follicle determined from histology was significantly smaller in Wando ($0.032mm^2$) compared to the sizes in Gomso ($0.059mm^2$) and Seonjaedo ($0.052mm^2$, p < 0.05). Accordingly, the number of ripe eggs in the follicle was significantly fewer among clams in Wando (14) compared to the numbers determined in Gomso (23) and Seonjaedo (22). The absolute quantity of egg in ripe clams from Wando (31.01 mg) was also significantly smaller than Seonjaedo (61.79 mg) and Gomso (133.3 mg). Quantity of total protein, carbohydrate, and lipid in the tissue in the Wando samples was significantly smaller than the quantities determined in Gomso and Seonjaedo (p < 0.001). The observed poor reproductive condition and proximate tissue composition of the females in Wando were, in part, explained by the extremely high level of the parasites, sapping the ability to store energy in the host tissues, which is used in tissue growth and the egg production.
Kim, Dong-Heui;Chang, Byung-Soo;Teng, Yung-Chien;Kwon, Jung-Kyun;Lee, Myeong-Seon;Lee, Gui-Young;Lee, Kyu-Jae
Applied Microscopy
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v.40
no.2
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pp.65-71
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2010
Kribensis, Pelvicachromis pulcher is a teleost belonging to Cichlidae. The oogenesis was investigated by light microscope. The ovary was located between intestine and air bladder, a yellowish and ellipsoidal shape with the major axis 20mm and the minor axis 5 mm. Cytoplasm of oogonia in early stage was basophilic and many nucleoli were located at inside of nuclear membrane. In primary oocytes, yolk vesicles were distributed only in the marginal area and egg envelope was not formed on the outside of an egg. In secondary oocytes, the egg envelope was formed and yolk vesicles in the cytoplasm were increased than the earlier stage. The basophilic substance of cytoplasm was changed to acidic. Some yolk vesicles started forming small yolk mass except the surrounding nucleus. In case of matured egg, size of egg were increased. The yolk vesicles were changed to yolk mass in accordance with development. The yolk mass contained crystal-like structures. In conclusion, the oogenesis of Pelvicachromis pulcher was summarized by the increase in cell size, the formation and the accumulation of yolk, and the decrease of basophilic substance in the cytoplasm. The oogenesis of Coreoleuciscus splendidus is similar with other teleost. But there were differences in distribution of yolk vesicle and yolk mass containing cristal-like structures.
Vitellogenin (Vg) is the precursor of vitellin (Vn), the major yolk protein of teleost fishes. In this study, Vg and Vn proteins of the Korean bullhead Pseudobagrus fulvidraco were isolated using gel-filtration chromatography (Sephadex-G 200 column) and anion-exchange chromatography (Mono Q HR 5/5 column), respectively. Purified Vn with an estimated molecular mass of 360 kDa by gel filtration chromatography was obtained from ovarian egg, and it was composited to one major subunit with an estimated molecular mass of 107 kDa by SDS-PAGE. In the result of western blotting, one major band was detected using antiserum against Vn (anti-Vn). These results suggested that Vn was composed of three subunits having the same molecular weight in Pseudobagrus fulvidraco. Vg was induced by estradiol-$17{\beta}$ ($E_2$) and purified from $E_2$ treated male serum. The molecular weight of whole Vg was estimated to be 450 kDa by gel filtration chromatography, and it is composed of three subunits with estimated molecular masses of 110 kDa, 125 kDa and 147 kDa as determined by SDS-PAGE. In the Ouchterlony's immunodiffusion test using anti-Vn and antiserum against female and male serum, purified Vg was detected in matured female and Ez treated male serum but not in untreated male. These results can be used in detecting estrogenic contamination of the aquatic environment.
Induction of triploid cherry salmon, Oncorhynchus ma.sou was performed by the heat shock procedure. The triploids were induced by 15 and 20 min heat shock treatments after 10 min fertilization at $28^{\circ}C$. Incidences of the triploidy were $91.4\%\;and\;89.8\%$, respectively. Nucleus and erythrocyte from the induced triploids larger than those of the diploids in major axis, minor axis, major axis/minor axis, surface area and volume. The chromosome number of diploid was 2n= 66 (17 pairs of metacentrics or submetacentrics, 16 pairs of acrocentrics or telocentrics), and that of triploid was 3n=99. Satellites were observed in the short arm of the largest telocentrics, and these may be useful marker to determine the polyploidization. Diploid have outgrown to triploid, and female have also outgrown to male in the triploid group during the 22 months of observation period after hatching. During the spawning season, 22 to 26 months after hatching, diploid were observed the growth retardation because of their sexual maturation, however the triploid showed continuous growth.
Jicon scallop (Chlamys farreri), as one of new culture species, has been taken a growing interest in Korea recently. Artificial seeds are needed since seeds in natural waters are absolutely short. To develop the better methods for the artificial spawning and the rearing larvae on a large scale, experiments were carried out from July 1993 to May 1994. Mother shells were collected from the area near Tong-yeong and Geoje-do, the southern part of the Korean Penninsula. It was estimated that a period of 2-years was needed to be mother shells after the fertilization. Generally, spawning occourred intermittently from March to August and the maximum occurred in July. A best way for the artificial spawning was a chemical incentive, a 'serotonin injection' in parallel with the exposure and the temperature stimulation. Densities of the fertilized eggs for the normal development was from 30 to 40 per mililiter. It took 27-days from the fertilization to the settling larva averaging $155{\mu}m$ in size with water temperature 11.5\~13.0^{\circ}C$. Isochrysis galvana and Chaetoceros calcitrans with a density of $1,500\times10^4$ cells per ililiter were supplied for rearing the larvae. A proper density of larvae was 10 individuals per mililiter, and the survival rate of larvae from the flowing water system was much better than that of larvae from the still water.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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