계절, 서식 환경의 구분없이 발병하는 병원성 미생물로 인하여 어류의 감염피해 및 경제적 손실이 막대하며 병원성 미생물을 저해하기 위해 투여한 항생제의 오남용으로 인하여 내성을 갖는 세균들의 출현 위험성이 상재하고 있다. 따라서 항생제 사용에 대한 효과 감소는 물론 과량 투여에 따른 양식업의 경쟁력 약화로 이루어질 가능성이 높기 때문에 보다 환경 친화적이며 어병의 효율적인 생물학적 제어를 시도하기 위해 어류의 gastrointestinal(GI) track으로부터 수산용 probiotic 유산균을 분리 동정하고 그 특성을 조사하여 앞으로 수산용 probiotic으로서 이용가능성을 알아보고자 하였다. (중략)
다양한 식물병원성 진균을 방제하기 위하여 온천수로부터 1종의 동물병원성 진균과 12종의 식물병원성 진균에 항진균 활성을 갖는 고온성 세균을 분리하였으며 Bacillus subtilis YS1으로 동정되었다. 분리 균주의 감마선($Co^{60}$)에 대한 감수성 조사 결과, $D_{10}$ value는 2.08 kGy로 20 kGy 의 방사선량에서도 생존 가능한 방사선 저항성 균주였다. 방사선 조사를 이용하여 5종의 돌연변이체를 유기하였으며, 이 중 B. subtilis YS1-1009 돌연변이체는 Botryoshaeria dothidea에 대한 항진균 활성의 증가 및 4종의 식물병원성 진균에 대하여 항진균 활성이 감소하는 종특이적 항진균 활성 변화를 나타내었다. 또한 상용농약인 tebuconazole에 대하여 저항성을 나타내었으며 17종의 다른 농약에 대해서도 전체적으로 야생형 균주에 비해 저항성이 증가하였다. B. subtilis YS1-1006 돌연변이체는 copper hydroxide에 저항성을 나타내었으며, B. subtilis YS67 돌연변이체는 항진균 활성이 소실된 tryptophan 및 proline 또는 uracil 및 arginine 영양요구성 돌연변이체였다. 이러한 결과로부터 극한 환경에서 분리한 본 분리균주는 환경친화적으로 진균에 의한 식물병을 방제할 수 있으며 방사선을 이용한 돌연변이체 유기는 기능성 균주의 개량이나 작용기작 연구를 위한 돌연변이체의 획득에 매우 효과적인 방법이라 사료된다.
장조림 원료 쇠고기 우둔살과 가열 처리한 쇠고기 우둔살에서 중온성균, 저온성균 등 11종의 미생물에 대한 분포도를 측정하였고, B. cereus, C. botulinum, C. perfringens, L. monocytogenes 등과 같은 9종류의 주요 병원성세균의 분리를 시도하였다. 원료육에서 미생물분포는 대부분 높은 분포를 보였으나 가열 처리육에서는 대부분 검출되지 않았다. 원료육에서 저온성균은 오염지표세균 중에서 가장 높은 분포를 나태낸 반면, 가열처리 후 급격하게 감소하였다. 식중독균인 B. cereus, C. perfringens 및 L. monocytogenes 등 3균주가 원료육에서 분리된 반면 C. botulinum, E. coli O157:H7, Salmonella spp., Shigella spp., S. aureus 및 Y. enterocolitica는 분리되지 않았다. 원료 쇠고기에서 분리된 B. cereus는 CERT-RPLA 방법에 의해 enterotoxin을 생성한 반면, C. perfringens는 PET-RPLA 방법에 의해 독소를 생성하지 않았다.
2003년 충북 괴산의 양앵두나무(Prunus avium L.) 재배 포장에서 궤양병 증상이 관찰되었다. 궤양병 증상은 이른 봄에 병든 나무의 주지나 어린 가지 부위가 적갈색으로 마르면서 껍질이 쪼개지고 세균유출액이 흘러 나왔다. 잎에는 갈색 수침상 병반이 나타나고 심하게 감염된 나무의 주지 또는 어린 가지에는 낙엽이 졌다. 궤양병 증상이 심한 주지를 잘라 보면 목질부의 조직들이 파괴되어 불규칙하게 적갈색으로 변색된 전형적인 궤양병 증상이 관찰되었다. 병환부로부터 병원세균을 분리하여 형태적 특성 및 생리${\cdot}$화학적 특성을 조사한 결과 Pseudomonas syringae pv. morsprunorum으로 동정되었다. 병원세균은 양앵두나무와 매실나무의 잎에 병원성을 나타내었지만 복숭아나무, 벚나무와 참다래나무의 잎에는 병원성을 나타내지 않았다. 따라서 P.syringae pv. morsprunorum에 의해 양앵두나무에 발생하는 이 병은 궤양병으로 명명할 것을 제안한다.
편백의 정유성분을 추출하여 수종의 병원성세균과 진균을 대상으로 항세균 및 항진균효과를 실험하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 편백정유는 그람 양성균인 S epidermidis, 그람 음성균인 V parahemolyticus와 P. aeruginosa에 대해서는 200 ppm부터 항세균효과를 나타냈고, P putida에 대해서는 400ppm 부터 항세균효과를 나타냈다. 항세균효과가 나타난 균주들은 편백정유의 농도가 증가할수록 효과가 높게 나타났으며 통계적으로 유의성이 관찰되었다(p<0.05) 또한 편백정유는 효모형 곰팡이인 C, albicans에 대하여 200 ppm부터 항진균효과를 나타냈으며, 사상형 곰팡이인 A, mali와 A, nidulans에 대해서는 400 ppm부터 F. oxyporum 에 대해서 100 ppm 부터 항진균효과를 보였고 편백정유의 농도가 증가할수록 균주의 성장억제대가 증가되었다. 따라서 편백을 항균제나 방부제로 사용할수 있는 가능성을 확인하였다.
Pseudomonas syringae pv. tabaci는 숙주인 담배에 감염하여 들불병(wild fire)을 일으키는 식물 병원성 세균이다. 이 세균의 pathogenicity island (PAI)는 Type III secretion system 및 병원성 유전자들을 암호화하고 있으며, 병원성 조절에 있어 핵심적인 역할을 한다. 최근 식물 병원성 세균인 Ralstonia solanacearum에서 식물 세포 접촉을 매개로 하여 hrp gene cluster를 양성조절하는 PrhA (plant regulator of hrp) receptor가 발견되었다. 본 연구에서는 P. syringae에서 식물세포에 의해 hrp 유전자가 유도되는지 확인하기 위해, prhA 유사체를 동정하고 PrhA 결실돌연변이주(BL11)를 구축하였다. BL11은 숙주 감염 실험에서 병원성이 현저히 감소하였고, 식물 세포현탁액에서 hrpA 유전자의 발현수준이 hrp 유도배지에서 보다 3배 더 높게 나타났다. 이러한 결과들을 근거로 PrhA가 식물세포접촉에 의한 조절에 중요한 역할을 한다는 것을 확인하였으며, hrpA-gfp reporter fusion을 사용하여 이를 다시 검증하였다.
우리 인간이 병원성 미생물에 감염되었을 경우에 주로 사용되는 항생제들은 현재 수백 가지가 넘지만 각각의 항생제에 대한 내성세균이 발견되는 빈도수가 가파르게 증가하고 있다. 또한 항생제에 대한 내성이 병원성 세균들 사이에서 빠르게 확산되고 있으나 새로운 항생제가 발견되는 속도는 눈에 띄게 감소하고 있다. 따라서 현 시점에서 우리 주변 환경에서 항생제 내성 세균이 얼마나 많이 존재하는 지에 대한 체계적인 연구가 필요하다고 할 수 있다. 본 연구에서는 현재 의료용으로 널리 사용되고 있는 항생제 중에서 ampicillin에 대한 내성 세균에 대한 조사를 진행하였다. 창원시를 가로지르는 창원천 및 창원대학교 기숙사 앞의 연못에서 미생물 시료를 채취하였다. 각 지점에서 채취된 시료를 분석한 결과 많은 내성 세균들이 나타났는데, 이러한 세균들을 집락의 형태에 따라 몇 그룹으로 나누고 각 그룹을 대표하는 22종 세균들의 genomic DNA를 추출하고, 이것을 template로 사용하는 16S rRNA 유전자 증폭반응을 수행 하였다. 얻어진 산물의 염기서열을 밝히고 genbank의 자료들과 비교해서 분리된 내성세균들을 동정하였다. 그 결과 10개 과, 12개 속, 17종의 세균들이 동정되었으며, 분리된 세균들의 ampicillin에 대한 내성을 조사해 본 결과, 17종 모두가 $50{\mu}g/ml$의 ampicillin 농도에서 증식을 하였고, 이 중에서도 7종의 세균들은 1.5 mg/ml의 농도에서도 증식 가능하다는 것을 알 수 있었다.
양식장에서 폐사하였거나 실활 상태의 소라를 채집하여 호염성 세균을 분리하고 이들 세균중 건강한 소라에 병원성을 나타내는 두 종의 세균에 대하여 형태, 생리적 시험을 행한 결과 Vibrio alginolyticus와 Vibrio anguillarum biovar I으로 동정되었다. 이들 두 종의 세균은 공히 25-3$0^{\circ}C$ 부근에서 가장 잘 생육하였고, 염분농도는 해수보다 약간 낮은 3%내외가 최적 발육농도였다. 이들 두 종의 세균에 심하게 감염된 소라는 아가미의 괴사가 일어나는 것으로 밝혀졌다. 두 종 세균의 급작스런 증식과 소라자체의 환경변화에 따른 활력의 상실 등 복합적인 제반 요인이 동시에 작용될 때 발병이 유발되는 것으로 추정된다.
기능성 식품소재 개발을 위하여 탱자즙의 항균활성을 확인하였다. 탱자즙은 Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Coryne-bacterium zerosis, Listeria monocytobenes, Micrococcus luteus, Rhodococcus equi 등의 그림양성세균 6종, Klebsiella pneumo-niae, Pseudomonas aeruginosa, Vibrio alginolytics, Vibrio chloerae, Vibrio parahameolyticus, Vibrio vulnificus, Yersinia enterocolitica 등의 그람음성세균 7종에 대하여 비교적 높은 항균활성을 나타냈다. Bacillus subtilis, Coryne-bacterium zerosis, Listeria monocytobenes, Micrococcus luteus, Rhodococcus equi,Staphylococcus epidermidis, Citrobacter freundil및 Pseudomonas aeruginosa 등의 세균들에 대한 탱자즙의 최소억제농도는 2.5%였으며, Vibrio cholerae, Vibrio parahemoly-ticus, Vibrio vulnificus 및 Yersinia entero-colitica 등의 세균들에 대한 탱자즙의 최소 억제 농도는 1.25%이었다. 또한 최고 121$^{\circ}C$에서 15분간 각각 열처리한 탱자즙의 항균성은 열처리하지 않은 탱자즙의 항균성과 동일한 결과를 나타내어 열에 대하여 매우 안정하였다.
맥류세균성 줄무늬병균의 선택배양기(KM-1)를 개발하여 이병식물체 및 토양으로부터 Xanthomonas campestris pv. translucens를 선택적으로 분리할 수 있는 효율성을 검토하였다. KM-1배양기의 구성성분은 증류수 1 L당 lactose 10 g, D(+)trehalose 4.0 g, thiobarbituric acid 0.2 g, K\ulcornerHPO\ulcorner 및 KH\ulcornerPO\ulcorner 각각 0.8 g, yeast extract 30 mg, NH\ulcornerCl 1 g, cycloheximide 100 mg, tobramycin 8.0 mg, ampicillin 1.0 mg 및 Bacto agar 15 g이며 1 N NaOH로 pH 6.6으로 조절하였다. X. c. t.의 균주별 KM-1의 배양효율은 비선택성 농후배지인 Wilbrinks agar에 비하여 1.30정도였으며, 기타 토양전염성식물병원세균 Agrobacterium tumefaciens, Agrobacterium rhizogenes, Erwinia carotovora var. atroseptica, Erwinia carotovora var. carotovora, Corynebacterium insidiosum, 및 기타 토양생존 부생세균 Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas fluorescens, and Pseudomonas putida 등의 생장을 완벽하게 억제하였다. KM-1의 저장기간(shelf-life)도 5$^{\circ}C$에서 2개월 동안 선택성을 유지하였다. 따라서 본 병원균의 전염원의 생존 등 발생생태연구에 활용될 수 있는 가치가 충분히 인정되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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