• Korean Journal of Environment and Ecology
• /
• v.22 no.5
• /
• pp.595-597
• /
• 2008

We photographed a nest of Bubo bubo kiautschensis in Icheon, Gyeonggi-do, which had laid 3 eggs and was incubating the eggs. Although 2 chicks were hatched from the 2 eggs, one of them disappeared and the other of them died in March 8, 2007. After that, the parent bird ate the dead chick and left the nest abandoning breeding the next day.

• Korean Journal of Animal Reproduction
• /
• v.21 no.2
• /
• pp.157-165
• /
• 1997

포유류 배반포배의 epiblast는 내세포괴에 포함되어 있으며, 이 epiblast cells이 배 및 태아의 생식세포와 일반 체세포로 분화된다 (Beddington, 1986; Lawson 등, 1991). 그런데 조기에 발달된 부화배반포기 배가 지연발생된 부화배반포기 배보다도 많은 epiblast cells을 가지고 있다고 한다(Talbot 등, 1995). 그래서 본 연구에서는 체외수정 유래의 배반포배의 발육속도에 따른 내세포괴/영양배엽세포의 비율 및 배아간세포 확립 효율을 비교하여 발달일령 간에 차이가 있는지를 규명하고자 하였다. 공시한 소의 난포란을 TCM-199에 0.5$\mu\textrm{g}$/ml FSH, 5$\mu\textrm{g}$/ml LH, 10% FBS, 100 units/ml penicilin, 및 100$\mu\textrm{g}$/ml streptomycin을 첨가하여 39$^{\circ}C$, 5% CO2 조건하에서 24시간 동안 체외성숙한 후, 5$\mu\textrm{g}$/ml heparin으로 수정능이 획득된 1$\times$106 sperm/ml의 정자로 체외수정을 유도하였다. 체외수정 후 18~20시간에 과립막세포를 vortexing으로 제거하여 얻은 모든 체외수정란을 3mg/ml BSA, 20${\mu}\ell$/ml NEM amino acids, 40${\mu}\ell$/ml BME amino acids, 10mM glycine 및 1mM alanine이 함유된 CR1aa 배양액에서 BRL 단층세포와 공배양을 실시하였다. 수정후 7, 8 및 9일재 (체외수정일 : 0일)에 확장배반포기까지 발달한 수정란을 이중염색 및 배아간세포의 확립 실험에 공시하였다. 체외수정후 24시간에 분할된 총 1,145개의 수정란이 7, 8 및 9일째에 후기 배반포기까지 각각 222(15.6%), 103(7.2%) 및 52(3.6%)로 발달하여 총 377개 (26.4%)가 발달하였다. 내세포괴/영양배엽세포의 비율은 7일 및 8일째 배반포배에서 각각 47.2$\pm$11.9/95.1$\pm$24.4개 (33/67%) 및 40.3$\pm$12.4/83.3$\pm$26.9개 (33/67%)로서 9일째 배반포배의 19.3$\pm$8.1/62.3$\pm$23.1개 (24/76%) 보다 유의적(P<0.05)으로 높았다. ES-like cells을 확립하기 위하여 후기배반포기 배를 mouse embryonic fibroblast 단층 공배양기에 옮긴 후 5일에 내세포괴의 부착 여부를 판정하고, 10일에 배아간세포의 확립 여부를 판정하였다. 그 결과 7, 8 및 9일째의 배반포기배의 각각 47.7% (82/172), 30.9%(22/71) 및 15.6%(5/32)에서 배아간세포가 확립되었다. 이상의 결과에서 배반포기까지의 발육이 빠른 수정란에서 영양배엽에 대한 내세포괴세포의 비율이 높았고 배아간세포의 확립율도 높다는 사실을 입증할 수 있었으며, 이와 같은 결과에서 체외수정란 유래 배반포배의 질을 결정할 수 있을 것으로 생각된다.

• Korean Journal of Animal Reproduction
• /
• v.20 no.4
• /
• pp.433-441
• /
• 1997

체외성숙과 수정된 돼지 난자의 체외발달능이 체외배발생 배양액인 NCSU 배양액에 0.4% BSA, 10% 혈청 혹은 아미노산(2% BME 아미노산 용액과 1% MEM 아미노산 용액)을 첨가함으로써 조사되었다. 본 실험에 공시된 난자는 체외수정 후 30시간 (2-세포기) 혹은 48시간 (2~4-세포기)에 회수하였다. 실험 I에서 0.4% BSA가 첨가된 NCSU 배양액에서 2-세포기 난자들의 배양경과시간에 따른 발달능을 조사한 결과, 배양 후 72시간 (체외수정 후 102 시간)에 상실배와 배반포기가 나타났으며, 배양 후 120시간째(체외수정 후 150시간)에도 팽창된 배반포까지만 발달하였다. 실험 II는 체외수정 후 48시간의 분할된(2~8-세포기) 난자들의 핵과 외관적 분할구와의 수적 차이를 조사한 결과, 2~4-세포기보다는 5-세포기 이상에서 핵과 분할구의 조화에 차이가 많았다. 실험III에서는 BSA, 혈청 혹은 아미노산이 첨가 혹은 무첨가된 배양액내에서 2~4-세포기 난자들의 배반포 후 부화능력을 조사한 결과, 모든 군에 있는 난자들은 팽창된 배반포까지 발달할 수 있었던 반면, 난자의 부화는 아미노산 혹은 혈청이 포함된 배양액에서만 일어났다. 더욱이 상실배와 배반포시기에 혈청의 첨가는 부화 배반포기 배의 발달을 현저히 증가시켰다. 이상의 결과로 미루어 볼 때, 배양액내에 대한 아미노산과 혈청의 첨가는 돼지 배반포의 부화를 유도할 수 있다고 본다.

• Korean Journal of Animal Reproduction
• /
• v.24 no.3
• /
• pp.263-268
• /
• 2000

The development of single blastomeres isolated from 2-, 4- and 8-cell mouse embryos and the ability of such blastomeres to survive slow freezing were studied. Of 223, 60 and 188 single blastomeres isolated from 2-, 4- and 8-cell mouse embryos, respectively, 111 blastomeres (49.8%) from 2-cell embryos, 12 blastomeres (20.0%) from 4-cell embryos and blastomeres (16.5) from 8-cell embryos developed into blastocysts after culture for 96 hrs. The recovery rate was 54.2% (65/120), 46.4% (13/28) and 24.3% (17/70) of blastomeres derived from 2-, 4- and 8-cell embryos following freezing and thawing and the survival of frozen-thawed blastomeres was 27.1% (16/59), 36.4% (4/11) and 17.6% (3/17), and respectively. The apparently six normal fetuses were obtained from frozen-thawed blastomere from 2-cell embryos after transferring into the recipients. These results indicate that mouse btastomeres isolated from preimplatation stage embryos can survive storage in liquid nitrogen following slow freezing.

• Korean Journal of Animal Reproduction
• /
• v.21 no.3
• /
• pp.303-310
• /
• 1997

소 난포란의 체외성숙시 성숙배지에 FSH 및 LH의 첨가가 체외성숙난자의 calcium 반응과 체외수정란의 발달에 미치는 영향을 조사하였다. 난포란의 체외성숙은 TCM199을 기초로 한 4가지의 배양조건 하에서 : 1) 0.5$\mu\textrm{g}$/ml FSH＋5$\mu\textrm{g}$/ml LH, 2) 0.5$\mu\textrm{g}$/ml FSH, 3) 5$\mu\textrm{g}$/ml LH 및 4) 무 호르몬 첨가구로서 5% CO2에 24시간 동안 체외성숙을 유도하였다. 체외성숙 24기간째에 난포란의 과립막세포는 1ml PB1＋에서 4분 동안 vortexing을 하여 완전히 제거하였다. 세포 내 calcium 반응을 측정하기 위하여 2mM Fura-2 AM ester 및 0.02% Pluronic F-127가 첨가된 PB1-용액에 39$^{\circ}C$ in cubator에서 40분 동안 배양하였다. 30${\mu}\ell$ M2 medium drop을 30mm plastic dish에 만들어 20$\times$ 형광대물렌즈가 장착된 Nikon Diaphot 현미경의 장착된 Nikon Diaphot 현미경의 warm stage에 설치하였다. 세포 내 calcium 방출을 자극하기 위하여 난자에 25mM inositol 1, 4, 5-trasphophate(IP3)로 1.21kV/cm의 전기자극 또는 20mM ryanodine으로 미세주입을 실시하였다. 이러한 처리를 하지 않은 난자는 체외수정 후 CR1aa와 BRL monolayers의 공배양조건 하에서 체외발달을 유도하였다. 분할율(Day 2)과 배반포기발달율(Day 9)을 조사하였다. FSH와 LH의 처리구에서 IP3 또는 ryanodine으로 자극된 난자(1.79$\pm$0.05, 1.66$\pm$0.06)는 FSH, LH 및 무 호르몬처리구에 비하여 유의적으로 높은 calcium 반응을 보였다(1.00$\pm$0.03, 1.28$\pm$0.04, and 0.53$\pm$0.02 in IP3 elctroporation; 0.68$\pm$0.05, 1.03$\pm$0.05, and 0.47$\pm$0.04 in ryanodine microinjection). FSH와 LH, FSH, LH처리구에서 분할율(87.9, 71.5 및 75.6%)은 무 호르몬처리구(60.7%)(P<0.05)에 비하여 유의적으로 높았으며, FSH와 LH처리구(29.3%)에서의 배반포기 발달율은 FSH, LH 처리구뿐만 아니라 무 호르몬처리구보다 유의적으로 높았다(16.5, 19.0 and 9.8%)(P<0.05). Bovine FSH 및 Ovine FSH의 처리구에서의 calcium 반응은 유의적인 차이가 없었다(1.72$\pm$0.05, 1.61$\pm$0.06). 또한 분할율(82.2 and 84.0%) 및 배반포기(27.8 and 27.1%) 발달율도 bovine 및 ovine FSH처리구간에는 유의적인 차이가 없었다. 이상의 결과에서 전기자극에 의한 세포 내 calcium 반응은 체외성숙배지에 첨가하는 호르몬의 처리에 따라서 유의적인 변화를 보였다. 비록 분할율은 처리구간에 유의적인 차이가 없었지만 배반포기 발달율은 FSH와 LH 공동처리구에서 FSH, LH 단독처리구 및 무 호르몬처리구에 비하여 유의적으로 높은 발달율을 보였다. 체외성숙기간에 FSH와 LH의 공동첨가는 체외성숙 및 체외발달의 생리적인 교정을 위하여 요구되는 것으로 사려된다.

• Proceedings of the KSAR Conference
• /
• 2002.06a
• /
• pp.46-46
• /
• 2002

본 연구는 돼지의 미성숙 난포란을 체외에서 성숙, 수정시킨 후, 생산된 체외수정란을 NCSU 23 체외배양액에 항산화제 (NAC, ebselen 및 glutathione) 와 glutathione 합성억제제인 BSO의 첨가가 돼지 체외 수정란의 체외 발육에 미치는 영향을 검토하였다. Glutathione 합성 억제제인 BSO가 돼지 수정란의 체외 발육에 미치는 영향을 검토한 결과, 0, 1.0 및 5.0mM의 BSO 을 첨가하여 상실배기 이상 발육된 체외 발육 성적은 각각 35.9, 15.7 및 8.4%로서 BSO 첨가구가 대조구에 비해 통계적으로 유의하게 낮은 체외배율성적을 나타냈으며 (P＜0.05), NAC 1.0mM, ebselen 10μM 및 glutathione 100μM 과 BSO 1.0 mM 을 각각 첨가하여 체외 배양을 실시한 경우, 상실배 이상 발육된 체외 발육율은 40.5, 44.2, 36.0 및 10.9%로서 항산화제 첨가구가 BSO 첨가구보다 통계적으로 유의하게 높은 체외 발육 성적을 나타냈다 (P＜0.05). 모든 처리구에서 체외 수정 후 생산된 배반포기 수정란의 세포수에는 차이가 인정되지 않았다. (중략)

• Korean Journal of Animal Reproduction
• /
• v.17 no.1
• /
• pp.7-12
• /
• 1993

소의 체외수정란과 난구세포와의 공동배양시 발생배지에 FCS, CS 또는 BSA를 여러 농도로 첨가해 상실배 또는 배반포기배까지의 발생율을 비교 검토했다. 그 결과, 단백질원을 전혀 첨가하지 않은 경우 발생율이 11%로 첨가의 경우에 비해 낮았다. 한편, 1∼10% FCS(27∼38%), 1∼10%CS(29∼35%) 및 1∼10mg/ml BSA(57∼59%)를 첨가한 경우, 첨가단백질 농도 사이에서 발생율에 유의차는 인정되지 않았으나, 20%의 FCS와 CS, 20mg/ml의 BSA농동에서 보다 높은 발생율을 보였다(P<0.05). 첨가 단백질 종류로만 발생율을 비교한 경우, FCS(17∼35%) 및 CS(9∼35%) 첨가에 비해 BSA(35∼59%) 첨가시 높은 발생율이 인정되었따. 한편, BSA가 첨가된 배지에서 난구세포의 증식은 관찰되지 않았는데, 이와 같은 결과로부터 초기배의 발육과 난구세포의 성장 사이에는 상관관계가 없는 것으로 추측되었다.

• Korean Journal of Animal Reproduction
• /
• v.22 no.4
• /
• pp.307-317
• /
• 1998

This study was to investigate the vitrification method for cryopreservation technique of bovine in vitro fertilization(IVF) embryos. The morphological appearance and viability following vitrification of IVF bovine blastocysts and expanded blastocysts were examined. Embryos obtained 6, 7, 8 or 9 days after IVF were vitrified in both 40% ethylene glycoI(EG) plus 0.3M trehalose and 20% polyvinylpyrrolidone(PVP) in DPBS(ETP, Exp. 1) and ETP solution added 0.375M dextrose (ETPD, Exp. 2). The viability of Days 6, 7, 8 and 9 vitrified /thawed embryos at 24∼48 h culture after thawing was 11.9%, 19.8%, 23.4% and 15.3% in ETP(Exp. 1), and 34.6%, 54.5%, 37.9% and 13.0% in ETPD(Exp. 2), respectively. The viability of vitrified embryos produced from the culture days after IVF did not differ in Exp. 1, but significantly differ in Exp. 2(P＜0.05). The viability of blastocysts and expanded blastocysts significantly differed(P＜0.05) in 15.2% and 23.3%(Exp. 1), and 25.0% and 45.8%(Exp. 2). The result of Exp. 1 was similar to that of Exp. 2 on the viability of embryo according to developmental stages, but ETP solution plus sugar(dextrose) was increased the viability of vitrified embryos. In Experiment 3, The viability of vitrified embryos was not different between 12% and 20% PVP concentrations in ETP solution according to culture days or developmental stages. To investigate the effect of addition of sugar, two type of carbohydrates and a mixture of cryoprotectants for vitrification on the survival of bovine IVF embryos, bovine Days 7 to 9 blastocysts and expanded blastocysts were cryopreserved in either 20% glycerol plus 20% EG, 0.375M sucrose and 0.375M dextrose (GESD, Exp. 4) or 20% glycerol plus 20% EG, 0.3M trehalose and 20% PVP(GETP, Exp. 5) in DPBS. Survival rates of Day 7, 8 and 9 embryos at 24∼48h culture after thawing were 71.4%, 94.6% and 40.5% in GESD, and 59.5%, 81.5% and 62.5% in GETP, respectively. Hatching rates of Day 7, 8 and 9 embryos after thawing were 28.6%, 35.1% and 16.2% in GESD, and 27.0%, 33.3% and 18.8% in GETP, respectively. These results indicates that a mixture of cryoprotectants(glycerol and EG) and addition of sugar can improve the survival rates of the bovine IVF embryos(Day 7 or 8) vitrified, and the expanded blastocyst embryos are more suitable for vitrification than early blastocysts stage.

• Proceedings of the KSAR Conference
• /
• 2001.03a
• /
• pp.87-87
• /
• 2001

도살장에서 구입한 소의 난소로부터 회수한 미성숙 난포란을 체외에서 성숙, 수정시킨 후, 2~8세포기 수정란을 CR$_1$aa 체외배양액에 일정량의 aesculetin, taurine을 첨가하여 체외배양을 실시한 두 처리구간의 항산화 효과를 비교 검토하고, aesculetin과 taurine에 growth factor(EGF, PDGF)를 첨가배양하여 체외수정란의 체외발육에 항산화제와 growth factor의 상호작용 효과를 검토하였다. 대조구, aesculetin(1$\mu\textrm{g}$/$m\ell$) 및 taurine(2.5mM)을 첨가하여 체외수정란을 체외배양시킨 결과 상실배이상 발육된 체외발육율은 각각 46.5%, 64.3% 및 60.5%로서 대조구보다 aesculetin과 taurine 첨가구가 유의하에 높은 성적을 얻어, aesculetin과 taurine이 체외수정란의 체외발육에 높은 효과를 나타냈다. 대조구, aesculetin (1$\mu\textrm{g}$/$m\ell$) ＋ PDGF (1ng/$m\ell$) 첨가구, aesculetin (l$\mu\textrm{g}$/$m\ell$) ＋ EGF (10ng/$m\ell$)첨가구, taurine (2.5mM) ＋PDGF (1ng/$m\ell$) 첨가구 및 taurine (2.5mM)＋EGF (10ng/$m\ell$) 첨가구에서 배반포기 발육율은 각각 46.0%, 70.0%, 58.0%, 56.0 및 66.0%로써 처리구가 무첨가구에 비해 유의하게 높은 성적을 얻어(P<0.05), 항산화제와 growth factor의 첨가 배양이 체외수정란의 체외발육에 상승효과가 있음이 입증되었다. 배양액에 천연추출 aesculetin과 상품화된 aesculetin을 첨가하여 체외배양을 실시한 결과 배반포기 발육율은 대조구, 천연추출 aesculetin 및 상품화된 aesculetin 첨가구에서 각각 38.6%, 54.6% 및 53.5%로써 첨가구가 무첨가구보다 높은 성적을 얻어, aesculetin의 항산화 효과가 입증되었다(P<0.05). 그러나 모든 처리구에서 배반포까지 발육된 체외수정란의 세포수에는 커다란 차이가 인정되지 않았다.

• Korean Journal of Animal Reproduction
• /
• v.18 no.3
• /
• pp.199-206
• /
• 1994

We present here a new PCR-based cloning technique that allows the different PCR products during mouse embryogenesis. Recently, mRNA differential display described by Liang & Pardee (Science 257, 1992) and re-confirmed by Zimermann & Schultz (PNAS 91,1994). This method will detect the appropriate changes in the temporal patterns of expression or in the transition from maternal control to zygotic control as well as the functional difference of embryo with polyspermy or monospermy, the difference of expression between successfully hatched blastocyst and blastocyst failed to hatching, response to agents, and cell cycle regulation. By this methods, we have cloned an eDNA, which showed mouse 2 cell specific expression. Genomic DNA digested with EcoRI showed approximately 15 kb and then showed higher expression in fetal liver rather than adult liver. Furthermore, this gene is likely to have 2 mRNA by alternative splicing.