배나무잎 검은점병에 이병된 신고와 지표식물 PS-95의 잎을 전자현미경으로 세포내 미세구조를 검경한 결과 굴곡성 사상형 유사바이러스 입자가 집단으로 존재하고 있는 것을 확인하였다. 엽육유세포질에 있는 유사바이러스 입자들의 직경은 12 nm였으나 입자들의 길이는 측정하지 못하였다. 섬유사를 함유하고 있는 소포는 일반적으로 ssRNA genome을 갖는 식물바이러스에 의해 이병된 세포에서 생성된다. 본 연구에서 이 소포들은 tonoplast에 형성되었다. 배나무잎 검정점병의 이병잎을 초본 지표식물에 즙액접종하였으나 어떠한 병징도 나타나지 않았다. 또한 접목접종 전염에 의하여 전염되어 전형적인 검은점이 발병하였다. 발병된 잎에는 유사바이러스 입자가 존재하고 있었다. 이상의 결과 병징, 섬유사를 함유한 소포의 존재, 그리고 접목전염을 기초로하여 볼 때 배나무 검은점병을 일으키는 유사바이러스 입자는 closteroviruses의 하나로 생각된다.
This study was carried out to characterize virus-like particles (VLPs) in Pleurotus ostreatus. The white and the dark gray mutants frequently observed in mushroom farms of Pleurotus ostreatus (Wonhyeong-neutari). A 5.8kb segments of dsRNA was detected only in the white mutants but not in the dark gray mutants. The VLPs were purified from the fruit bodies by Polyethylene Glycol (PEG) and ultracentrifugation. Electron microscopy analysis showed that VLPs were isometric about 14, 20~45nm in diameter. Further study is needed to reveal the morphological and yield variations of mushroom strains including VLPs observed in the mushroom farms. Also it is needed to maintain fundamental research for taxonomy, diagnosis, and physiology of VLPs in the mushroom strains.
In ultrathin section of the tissue of odontoglossum ringspot virus (ORSV)-infected Cymbidium goeringii Reichenbach, ORSV particles appeared as bundles of irregular aggregates of various length which were called stacked plates or rounded plates. Virus particles were found in the cytoplasm in electron clear zones and they also found between cell wall and plasma membrane. They mainly clustered in parallel aggregates and sometimes oriented randomly. The X-bodies and paramural bodies were observed near the cell membrane and these contained vacuole-like cavities. The cell wall of infected tissue expanded largely. Some chloroplast in ORSV infected cell was irregular. No virus particle was present in mitochondria, nuclei, vacuoles, vesicles or other organelles. The plasmodesmata slightly enlarged, and virus-associated granules were present around it.
Rhabdovirus-like virus were isolated from the fry (15~30 days post hatching, dph) and rearing water of the snakehead fish Channa arga exhibiting mass mortality in spring of 2003 and 2004 in Korea. The isolates were propagated in EPC and SSN-1 cells but not replicated in FHM cells. The bullet-shaped viral particles (45×100 nm) appeared to be compact and a similar morphology to those of the rhabdoviruses in the infected EPC cells. The optimum temperature for virus replication was 20 to 25℃ but they could not replicate at 15℃. The isolates ShFRV-3 and ShFRV-5 from snakehead fish showed high pathogenicity against the fry (15 dph) and fingering (40 dph) of snakehead fish but did not in the larger size (90 dph).
Three types of virus disease symptoms were observed in azuki bean plants: yellow mosaic; mosaic; severe mosaic with dwarf. The symptoms developed in the indicator plant inoculated with a virus- infected leaf of azuki bean showed similar host range with those of AMV, CMV and AzMV. In antiserum response, yellow mosaic symptom formed sediments with AMV antiserum, mosaic type with CMV antiserum, respectively, From the electron microscope observation, eclliptic particle (18~58$\times$18nm), isometric particle (30nm), and filamentous(730$\times$12nm) combined with inclusion body were observed in yellow mosaic, mosaic, and severe mosaic with leaf curling symptoms, respectively, The results demonstrate that yellow mosaic, mosaic, and severe mosaic with dwarf are caused by AMV, CMV and AzMV.
Flacherie, as one of the most prevalent silkworm diseases, causes severe economic damage to sericultural industry and its pathogens have been proved to be flacherie virus (FV) and densonucleosis virus (DNV). Multiplications of the viruses in the larvae of the silkworm, Bombyx mori, were studied by the sucrose density gradient centrifugation and electron microscopy. The quantitative and qualitative changes of nucleic acids and proteins were investigated from the midgut and hemolymph in the silkworm larvae infected separately with FV and DNV. The histopathological changes of epithelial cells of infected midgut also were examined by an electron microscope. 1. Purified fractions of FV or DNV in a sucrose density gradient centrifugation yielded one homogenous and sharp peak without a shoulder, suggesting no heterogenous materials in the preparation. Electron microscopy also revealed that FV and DNV were spherical particles, 27nm and 21nm in diameter, respectively. 2. Silkworm larvae showed a decrease in body weight on the 6th day and in midgut weight on the 3rd day after inoculation with FV or DNV. 3. DNA content was higher in the midgut when infected with FV or DNV, but the hemolymph of the infected larvae showed no difference during first 6 days after inoculation, after which DNA concentration declined rapidly. 4. RNA synthesis of silkworm larvae infected separately with FV and DNV was stimulated in the midgut, but RNA content was reduced in the hemolymph at the early stage of virus multiplication. At the late stage of virus multiplication, however, it was extremely reduced in both midgut and hemolymph. 5. The concentration of protein in the midgut and hemolymph of silkworm larvae infected separately with FV and DNV showed no difference from that of the healthy larvae at the early stage of virus multiplication, but it was significantly reduced at the late stage of virus multiplication. 6. There was no difference in the electrophoretic patterns of RNAs extracted from the midgut of healthy or virus-infected larvae. 7. The electrophoresis of proteins extracted from the midgut infected with FV or DNV, when carried out on the 1st and 5th day after virus inoculation, showed no difference from that of the healthy larvae. But, there was an additional band with medium motility in the proteins on the 8th day after virus inoculation, while a band with low mobility shown in the proteins of healthy larvae disappeared in the infected larvae. However, a band with high mobility in the healthy larvae was separated into two fractions in the infected larvae. 8. The electrophoretic pattern of hemolymph proteins of the silkworm larvae infected separately with FV and DNV was similar to that of the healthy larvae, but the concentration of hemolymph proteins in the infected larvae was lower than that of the healthy larvae at the late stage. 9. Two types of inclusion bodies were shown by the double staining of pyronin-methyl green in the columnar cell of the midgut on the 8th day after FV inoculation. 10. Electron microscopy of the infected midgut revealed that the 'cytoplasmic wall' of the goblet cell thickened on the 5th day after FV inoculation and several types of the cytopathogenic structures, such as virus$.$specific vesicles, virus particles, linear structures, tubular structures, and high electron-dense matrices were observed in the cytoplasm of the goblet cell. The virus particles were also observed in the microvilli and the structures similar to spherical virus particles were observed around the virus-specific vesicles, suggesting the virus assembly in the cytoplasm. 11. Fluorescence micrograph of the infected midgut stained with acridine orange showed that the nucleus, the site of DNV multiplication in the columnar cell, enlarged on the 5th day after virus inoculation. 12. Electron microscopic examination of DNV infected midgut revealed that the nucleolus of the columnar cell was broken into granules and those granules dispersed into apical region of the nucleus on the 5th day after virus inoculation. On the 8th day after inoculation, it was also observed that the nucleus of the columnar cell was full with the high electron-dense virogenic stroma which were similar to virus particles. These facts suggest that the virogenic stroma were the sites of virus assembly in the process of DNV multiplication.
In March 1997, a new rhabdovirus was isolated from moribund cultured Japanese flounder Paralichthys olivaceus in sea water tank and cage culture systems in Kyung-Nam and Chun-Nam province, Korea. At temperature $15^{\circ}C$ the virus replicated and induced cytopathic effects (CPE), which progressed to eventual cytolysis, in susceptible cell lines, including RTG-2 and EPC. The CHES-214 cell line was refractory. Virus particles were bullet-shaped and measured $70nm{\times}100$ to 150 nm in size. The isolate was sensitive to pH 3, to diethyl ether, and to heat ($50^{\circ}C$ 5 min, $60^{\circ}C$ 1 min). Viral replication was not inhibited by $10^{-4}$ M 5-iododeoxyuridine. Virus infectivity was reduced by anti-HRV (8401-H) rabbit serum, but can not reduced by antisera against infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV), chum salmon reovirus (CSV), retrovirus of salmonid (RVS) and infectious pancreatic necrosis virus (IPNV). HRV virus antigen was detected by fluorescent antibody test (FAT) in the cytoplasm of infected EPC cell. Purified isolates virions were composed of: polymerase (L), glycoprotein (G), nucleoprotein (N) and 2 matrix proteins (M1 and M2). Based upon their relative mobilities, the estimated molecular weights of the proteins were: L, 160 kDa; G, 55 kDa; N, 45 kDa; M1, 26 kDa; and M2, 22 kDa.
Kim Mi-Soon;Jung Min-Young;Kim Yun-Sung;Jang Cheol;Hwang In-Cheon;Ryu Ki-Hyun;Choi Jang-Kyung
Research in Plant Disease
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v.12
no.2
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pp.91-98
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2006
A filtrate powder, designated as KNF2022, produced from culture broth of Acinetobacter sp. KTB3 was tested for their inhibitory effects on Pepper mild mottle virus (PMMoV) infection to Nicotiana glutinosa or N. tabacum cv. Xanthi nc. When 1/100 dilution with distilled water was treated to the plants and PMMoV was inoculated, the inhibition was estimated to be 94.3 and 95.6%, respectively. The same concentrations of KNF2022 inhibited infections of Pepper mottle virus (PepMoV) and Cucumber mosaic virus (CMV) on Chenopodium amaranticolor by 97.1 and 92.5%, respectively. Duration of inhibitory activity of the filtrate powder from Acinetobacter sp. culture broth against PMMoV infection on N. glutinosa was maintained for 2 days at 80% inhibition level, however, the inhibitory effect was diminished from 4 days after treatment to 50% levels. To evaluate inhibitory effects on systemic host plants of the antiviral agent, symptom developments of PMMoV, PepMoV and CMV on KNF2022-treated pepper plants were investigated. Delayed symptom developments until 10 days after inoculation (DAI) were observed for all the three viruses when the viruses were inoculated individually, and these delayed symptom development effects were maintained until 30 DAI in case of PepMoV. Moreover, PepMoV was not detected by RT-PCR and ELISA until 30 DAI. These delayed symptom development effects were diminished in all combinations of three virus co-inoculations due to synergism of three viruses on symptom developments. Inhibitory effect of KNF2022 was verified under electron microscopic examinations using purified virus preparations. Particles of PMMoV and PepMoV were observed on specimens from 5 min after KNF2022 treatment, and the particle sizes were reached in the range of 200-250 nm and 400-600 nm, respectively. Furthermore, the viral particles were destructed and particle sizes were reached in the range of 100-150 nm and 300-500 nm, respectively, on 60 min after treatments. Reduction of local lesion numbers on N. tabacum cv. Xanthi nc and C. amaranticolor were accompanied with reduction of virus particle sizes. In the case of CMV destructed particle numbers were also increased according to incubation period after KNF2022 treatment and local lesions on C. amaranticolor were reduced.
Since 1998, mass mortality of the Japanese flounder has widely occurred in the south and west coastal area of Korea. A new serotype birnavirus was isolated during the investigation of the cause of the disease. By the electromicroscopic examination, the isolated virus particles appeared hexagonal and unenveloped with an average diameter 52 to 56 nm. Birnavirus specific fragment was amplified by RT-PCR. High yield of virus (10.3 to 10.8 log $TCID_{50}/ml$) was produced in CHSE-214. RTG-2 and RTE-2 cells. Typical birnavirus CPE was observed in these cells. On the contrary, the virus CPE was not shown in the FHM and EPC cells. By a cross-neutralization test with IPNV Ab, IPNV Sp, IPNV VR-299 and MBV Y6, the isolated virus was closely related to marine birnavirus (MBV).
Gelatin particle agglutination test (GPAT) was optimized for detection of Tobamovirus and contamination of the virus in commercial pepper seeds was evaluated. The optimum concentration of ${\gamma}$-globulin G, specific to tobacco mosaic virus pepper strain, was 100 ug/ml. The sensitivity of GPAT for the detection of Tobamovirus in pepper seeds was as high as enzyme-linked immunosorbent and dot immunoblotting assays. Optimum dilution ranges of the seed extract for GPAT was 5-25 folds. Using the optimized GPAT with above conditions, the rate of Tobamovirus contamination in seeds was turned out to be average of 79.1%.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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