• Proceedings of the Korean Society of Developmental Biology Conference
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• 2003.10a
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• pp.137-137
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• 2003

난자의 체외성숙 및 체외배양에는 일반적으로 동물의 혈청을 기본배양액에 5-10% 정도 첨가한 배양액을 사용하고 있다. 그러나, 혈청으로부터 바이러스, 세균, 마이코 플라즈마 등에 오염될 가능성이 있기 때문에, 본 실험에서는 완전 무혈청 배양액에서 난자의 성숙, 배발생, 세포수, 동결성을 검토하였다. 도축된 한우의 난소로부터 채취한 난자는 선별하여 TCM199+10% FBS와 IVMD 101 배양액에서 22~24시간 동안 체외성숙시킨 후, IVF 100(일본, 펩티트연구소)으로 2회 세정한 후, 각각의 배양액 50${\mu}\ell$ 소적에 5개씩 5~6 시간 수정시켰다. 체외수정한 수정란은 TCM 199+10% FBS, IVMD 101, IVD 101 배양액에서 7~8일간 배양하여 배발생율을 조사하였다. 발생된 배반포의 일부는 세포수를 조사하였고 나머지 배반포는 1.8M EG로 동결하였다. (중략)

• Proceedings of the KSAR Conference
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• 2004.06a
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• pp.281-281
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• 2004

최근 체외수정, 핵이식, 체세포 복제동물의 생산 등으로 수정란의 동결 보존기술의 개발이 매우 중요한 시기에 왔다. 본 실험에서는 한우의 체리수정란을 완전 무혈청 배양액으로 배양하여 수정란의 배발생율과 동결융해 한 후 생존성 및 수정란이식 한 후 수태율을 조사하였다. (중략)

• Proceedings of the Korean Society of Embryo Transfer Conference
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• 2003.10a
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• pp.137-137
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• 2003

• Proceedings of the Korean Society of Developmental Biology Conference
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• 2003.10a
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• pp.138-138
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• 2003

근래, 혈청배지로 생산한 체외배양 수정란은 이식후, 낮은 수태율, 과체중의 산자 생산, 높은 유산율과 사망율 등 문제가 지적되고 있다. 그러나 무혈청 배지로 생산한 체외배양 수정란은 이러한 현상을 개선할 수 있다는 보고가 있어, 본 연구는 세포성장인자가 첨가된 완전 무혈청 배양액에서 생산된 수정란으로 2001년5월 부터 2002년 12월까지의 신선란 및 동결란으로 이식한 결과이다. 이식은 신선란 및 동결란에서 A급 수정란은 1개, B급 수정란은 2개를 장착 하여, 이식을 하였다. 이식사술은 인공수정경력이 10년, 이식경력 5년 이상의 수정사 5명이 이식한 결과로 신선란과 동결란의 수태율을 확인하였다. 신선란의 이식에서는 387두중 148(38.2%)두가 임신이 확인되었고, 동결란의 이식에서도 758두 중 265(34.9%)두가 임신이 확인되어, 신선란과 동결란과의 유의적 차이는 없었다. 위의 결과에서 무혈청배지에서 발생된 신선란 및 동결란의 이식결과 유의적 차이는 없었으나, 동결수정란의 내동성이 탁월한 것이 증명되었으므로, 앞으로 체외수정란의 대량생산으로 수정란이식의 상업화가 가능할 것으로 사료된다.

• Journal of Embryo Transfer
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• v.19 no.2
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• pp.133-145
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• 2004

Serum-contain is commoly used for the production of in vitro-derived bovine embryos. However, were biological activity of serum varies from lot to lot, time consuming to choose better serum with good quality and risks of virus, bacteria and mycoplasma infection. This study established serum-free culture systems of in vitro embryo development to efficiently obtain a large number of blastocysts from ovaries of Hanwoo and oocytes maturation, cell number, tlerance of cryopreservation. Secondly, serum-contain medium is suspected of contributing to the large calf size, dystocia, cersarean sections, calf mortality and confirmed these blastocysts are high quality in terms of cyotolerance, high rates of pregancy and normal birth. For these reasons, Culture media (IVMD101 and IVD101) designed specifically for the preimplantation bovine embryo are rather simplistic, being based on salt solutions with additional energy substrates and growth factors. An improved serum-free medium (IVMD101) was developed for bovine oocytes maturation in vitro. Proportions of embryos developing to the blastocyst stage cultured in both IVD101(32.4%) and IVD101(34.5%) serum-free media were higher than in TCM199+10% FBS(12.4%) serumcontaining medium. Futhermore, the cell numbers per blastosyst obtained in the serum-free media were superior to those of blastocysts developed in serum-supplemented medium. Also, cell numbers of blastocysts obtained in the serum-free media were similar with blastocysts derived in vivo. Survival rate blastocysts after 24 hr incubation after thawing, the blastocysts cultured in both IVD101(94.5%) and IVD101(95.8%) serum-free media were higher than in TCM199+10% FBS (52.5%) serum-containing medium. After 72 hr incubation after thawing, hatching rates of blastocysts developed in IVD101(78.4%) and IVMD101(83.7%) were sighnificantly higher than that developed in the serum-supplemented medium(32.0%). The pregnancy rates almost not different between fresh blastocysts(38.2%) and frozen blastocysts(34.9%). The results suggested that the improved serum-free media(IVMD101 and IVD101) offer several advantages over culture in serum-cotaining medium, including increased rates of blastocyst formation and high cel numbers. Additionally, the survival and hatching rates of embryos product in serum-free media after post-thaw culture were superior to those of embryos produced in the serum-containg medium and useful for the production of high quality bovine embryos for cryo-preservation. These improved serum-free media are beneficial not only for the study of the mechanisms of early embryogenesis but also for mass production of good quality embryos for embryo transfer, cloning and transgenesis.

• Proceedings of the Korean Society of Developmental Biology Conference
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• 2005.10a
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• pp.139-140
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• 2005

• Proceedings of the Korean Society of Embryo Transfer Conference
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• 2005.10a
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• pp.139-140
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• 2005

• Proceedings of the Korean Society of Embryo Transfer Conference
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• 2003.10a
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• pp.138-138
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• 2003

• KSBB Journal
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• v.7 no.2
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• pp.132-138
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• 1992

Sprial adaptation technique of conditioned media has been applied to cultivate human cell line which can not survive in a serum free mdium without adding any growth factors in basal medium Doubling time and scu-PA production from serum free adapted cells were 5 days and 890 (IU/mL), respectively in a T-flask, whose values were not much lower than the productivity of 1100(IU/mL) from 5% serum containing medium. It was required to use conditioned media for attaching cells on microcarriers when cells were inoculated into a spinner vessel. Then, cells could continuously grow in serum free medium with having specific growth rate of 0.106 (1/day) and specific scu-PA production rate of $1.58{\times}10_{-5}$(IU/cell/day) in batch cultivation.

• Proceedings of the KSAR Conference
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• 2004.06a
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• pp.288-288
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• 2004

한우가격의 상승으로 젖소에 한우 체외수정란의 이식이 활발히 이루어지고 있으나, 체외수정란의 수태율이 생산자 및 시술자에 따라 많은 차이를 보이고 있다. 또한 체외수정란은 생산방법에 따라 또는 수정란의 상태와 동결보존 형태에 의해 수태율에 직접적인 영향을 미치는 것으로 보고되고 있다. 따라서 본 연구는 시판되고 있는 무혈청배양액(IVMD, IVD, 일본기능성펩타이드연구소)을 이용하여 한우 체외수정란을 생산하고, 혈청이 첨가되지 않은 동결액으로 동결 보존하였을 때 생존성을 검사하기 위하여 실시하였다. (중략)