• Proceedings of the KSAR Conference
• /
• 2003.06a
• /
• pp.25-25
• /
• 2003

본 연구는 돼지 동결-융해 정자의 배양에 의한 체외수정능력과 glycosidase activity의 관계를 검토하였으며, 또한 돼지난자의 투명대내에서 발견된 당잔기에 대한 정자의 glycosidase 특이성을 확인하기 위하여 $\alpha$-L-fucosidase, $\alpha$-D-mannosidase, $\beta$-D-galactosidase 및 N-acetyl-$\beta$-D-glucosaminidase ($\beta$-GlcNAc'ase)의 activity를 분석하였다. 그 결과 glycosidase activity는 동결정자의 융해 후 배양하지 않았을 때보다 2시간 배양했을 때 더 높게 나타났다. $\beta$-GlcNAc'ase의 activity는 정자 배양 유무에 관계없이 다른 glycosidase 처리시보다 최소한 2배 이상 높게 나타났다. 또한 첨체반응이 유기된 정자의 비율은 glycosidase ($\alpha$-D-mannosidase; P<0.05)에 의해 영향을 받았으며 정자를 배양하지 않은 경우보다는 배양된 정자에서 높게 나타났다. 그러나 배양시간에 따른 정자의 생존성에 대해 glycosidase의 종류에 따른 유의차는 인정되지 않았다. 한편 투명대내 정자의 접착과 침입에 대한 또 다른 실험에서, 서로 다른 glycosidase가 첨가된 배양액내에서 수정된 정자가 배양시간이 길어짐에 따라 정자의 침입율은 낮아졌다($\beta$-GlcNAc'ase; P<0.05). 투명대내의 정자접착 정도는 glycosidase의 첨가시에 무첨가시보다 접착정도가 더 높았으며, 가장 높은 접착율은 $\beta$-GlcNAc'ase첨가시 나타났다. 또한 모든 glycosidase 처리시 2시간 배양한 정자보다는 배양하지 않은 정자에서 투명대에 대한 접착정도가 높게 나타났으며, $\alpha$-D-mannosidase의 처리시 유의적인 차이를 보였다(P<0.05). 본 연구의 결과, $\beta$-GlcNAc'ase가 주로 돼지정자의 원형질막내에 존재하는 것으로 추측되며, 배양된 정자에 의한 투명대 접착정도와 침입율이 낮았음에도 불구하고 glycosidase activity가 증가하는 것으로 나타났다

• Korean Journal of Animal Reproduction
• /
• v.22 no.2
• /
• pp.195-202
• /
• 1998

We demonstrated, for the first time, pronuclear formation and apposition in porcine ooc-ytes following intracytoplasmic injection of porcine, human, bovine and mouse spermatozoon. Microtubule organization and chromatin configuration were investigated in these oocytes during pronuclear apposition. Following intracytoplasmic injection of porcine spermatozoon, the microtubular aster was organized from the neck of spermatozoon, and filled the whole cytoplasm. This male derived microtubules appear to move both pronuclei to the center of oocytes. In contrast, following injection of spermatozoa from different species such as human, bovine and mouse, microtubules were organized from the cortex of the oocytes and concentrated to the pronuclei, which seems to move both male and female pronuclei to the center of oocyte. This organization is similar to what has been shown in the parthenogenetically activated por-cine oocytes. These results suggested that the porcine, human, bovine and mouse sperm chromatin can be formed pronucleus and apposited in the center of oocytes in the absence of male derived microtubule when they were injected into porcine oocytes.

• Proceedings of the KSAR Conference
• /
• 2002.06a
• /
• pp.13-13
• /
• 2002

수정촉진 peptide(Fertilization Promoting Peptide; FPP) 는 체내에서 정자-난자의 결합시 투명 대내에서 glycoprotein 과 progesterone에 의해 정자침입이 활성화 될 때까지 첨체반응을 억제함으로써 정자의 수정상태 유지를 위하여 필요한 물질로 알려져 있다. 한편, 정자내에 존재하는 lectin과 같은 단백질 및 효소 등은 투명대내에 존재하는 oligosaccharide 잔기를 합성시킨다. 본 연구는 돼지 정자-난자의 체외수정시 투명대내 FITC-labelled 처리된 lection의 결합과 FP의 영향을 검토하고자 수행되었다. (중략)

• Journal of Veterinary Clinics
• /
• v.32 no.1
• /
• pp.45-48
• /
• 2015

The purpose of this study was to select high-quality boar semen after the glass wool filtration of extended boar semen. After collecting boar semen, its concentration, morphology, viability, and motility were examined according the glass wool's height and time. After glass wool filtration, the sperm concentration decreased, but the proportion of normal sperms and the sperm viability increased. Nevertheless, the sperm motility showed no changes. The above results showed that the glass wool filtration of boar semen is a method of obtaining sperms with relatively low abnormal rates and high viabilities.

• Proceedings of the Korean Society of Developmental Biology Conference
• /
• 2003.10a
• /
• pp.79-79
• /
• 2003

세포에 대한 산화스트레스는 세포의 대사와 기능저하의 원인이 되고 있으며 이를 줄이기 위한 항산화 물질의 첨가가 연구되고 있다. 본 연구는 비특이면역증가제이며 다목적 고기능성 알칼리용액 조성물인 Barodon의 항산화 효과를 돼지정자를 이용하여 조사하여, 돼지 액상정액의 보존성 향상을 위한 Barodon의 이용성을 알기 위하여 시도하였다. 실험구로서 무첨가구와 활성산소 인위발생구(xanthine+xanthine oxidase, X-XO), X-XO구에 superoxide dismutase, cataiase, Barodon(2종류)의 단독처리구 및 X-XO구에 이들 항산산제의 복합처리구로 나누어 항산화제 처리효과에 따른 정자운동특성을 CASA로 분석하였다. 또한 돼지 액상정액에서 Barodon의 항산화 효과를 무첨가구, catalase구 및 Barodon구로 나누어 정액의 보존기간별 정액성상 변화(정자활력, 생존성, 첨체이상)를 조사하였다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
• /
• v.25 no.3
• /
• pp.331-340
• /
• 1998

We determined the incidence of activation, male pronuclear formation and apposition of pronuclei in porcine oocytes following intracy-toplasmic injection of various porcine sperm components and foreign species spermatozoa, such as mouse, human or cattle. The porcine oocytes were activated by injection of a spermatozoon or an isolated sperm head. Neither isolated sperm tail nor perinuclear material removed sperm head activated oocytes. Because injection of mouse, bovine or human spermatozoon activated porcine oocytes, the sperm born activation factors is not strict species specific. Male pronuclear formation and pronuclear apposition were observed in the porcine oocytes following injection of porcine, bovine, mouse or human spermatozoa. The electrical stimulation following sperm cell injection did not enhance the incidence of male pronuclear formation nor pronuclear apposition comparent with sperm cell injection alone (p>0.1). Mitosis and two cell division in some oocytes were observed at 20 to 24 h after injection of porcine spermatozoon. However, none of oocytes following injection of mouse, bovine or human spermatozoa developed to the mitotic metaphase or normally divided to the two cell stage. These results suggested that the oocyte activating factor(s) presented in the perinuclear material and it is not species specific for the porcine oocyte.

• Proceedings of the KSAR Conference
• /
• 2002.06a
• /
• pp.27-27
• /
• 2002

본 연구는 돼지 인공수정 시 1 회 주입하는 정자농도가 번식성적에 미치는 영향을 구명하기 위하여 활력이 70%이상인 정자수 기준으로 80㎖ 병당 30.0×10/sup 8/80㎖, 25.0, 20.0, 17.5, 15.0, 12.5, 10.0 및 7.5로 농도를 각각 조절하여 12시간 간격으로 2회 인공수정하고 분만율 및 산자수를 조사하였다. 본 실험에 사용된 액상정액은 축산기술연구소 돼지 인공수정 센타의 종모돈중 통일품종 정액을 BTS(Beltsville thawing solution) 보존액으로 혼합하여 5개 농장의 암돼지에 인공수정 하였으며, 정자농도는 광전비색계(Spectronic-20, USA)를 이용하여 측정하였다. 분만율은 72.3%-89.3%로 농도별로 통계적인 유의차는 인정되지 않았다. (중략)

• Proceedings of the KSAR Conference
• /
• 2001.03a
• /
• pp.17-17
• /
• 2001

착상전 수정란 단계에서 형질전환 수정란의 선발은 형질전환동물의 효율을 증대시킬 수 있는 방법이다. 성공적인 형질전환동물의 생산을 위해서는 생산된 수정란의 mosaicism 빈도를 감소시켜 전체 할구에서의 유전자 발현을 유도하는 것이 최적일 것이다. 따라서 본 연구에서는 돼지의 웅성 생식세포를 이용한 형질전환동물의 생산에 있어서 다양한 정자세포 이용시 형질전환 수정란의 생산성 및 mosaicism 빈도를 조사하였다. 아울러 돼지 웅성생식세포내 GFP 유전자도입시 세포들의 생존율 및 원형정자세포분리 후 배양에 따른 형태적 변화를 관찰하였다. 돼지의 웅성 생식세포내 GFP 유전자 도입은 전기자극법 (1.3 ㎸/cm, 200 $\mu\textrm{s}$) 에 의하여 수행되었으며, 이 때 생존율은 60-70%이였다. 유전자가 도입된 전체 세포중 원형정자세포군의 분리는 유식세포분리기에 의하여 수행하였으며, 전체집단에 대한 분리군의 비율은 평균 16.2%이였다. 형질전환 수정란의 생산은 정자 (ICSI), 원형정자세포 (ROSI), 배양후 확장된 원형정자세포(ELSI)를 이용하였으며 각각의 난할율은 ICSI (82.9%), ROSI (59.1%), ELSI (62.1%)로 유의한 차이를 나타내었다. 그리고 8세포기까지의 배발달율은 각각 61.1, 40.9 및 48.6%이였으며, 상실배 및 포배기형성율은 각각 24.6, 18.1 및 32.4%이였다. 형광현미경하에서 GFP 단백질이 발현된 8세포기 수정란을 대상으로 각각의 할구를 primer extension pream-plification (PEP) PCR 방법으로 분석한 결과, ICSI 및 ROSI 실시후 대부분 (15/20, 9/10) 의 수정란은 3~4개의 할구에서만 GFP 유전자의 존재여부를 확인할 수 있었으며, 전체 할구에서 GFP 유전자가 모두 확인된 수정란은 없었다. 반면에 배양된 확장 원형정자세포를 이용하여 생산한 수정란의 경우, 4/10 (40%)에서 전체 할구내에 GFP 유전자의 존재를 확인할 수 있었다. 이러한 결과는 비록 배발달율 및 GFP 유전자 발현율에 있어서는 ELSI방법이 ICSI 등의 방법보다 현저히 낮았지만, mosaicsism 빈도가 낮아 바람직한 형질전환 수정란 생산에서는 오히려 유용한 방법이라고 사료된다. 또한 외래 유전자의 도입효율 면에서 후기 원형정자나 성숙정자보다 초기 원형정자세포에 외래유전자를 도입한 다음, 성숙시킨 확장원형 정자세포를 이용하는 방법이 보다 우수하다는 것을 시사하였다. 따라서 본 연구결과는 포유동물의 웅성 생식세포를 이용하여 nonmosaicisn을 나타내는 형질전환수정란을 생산하고 선발할 수 있는 일련의 기술적 과정을 정립하였다고 사료된다.

• Journal of Embryo Transfer
• /
• v.11 no.2
• /
• pp.159-166
• /
• 1996

본 연구는 돼지 액상정액을 인공수정용 100ml 플라스틱 병에 보존하면서 BF5희석액과 Butschwiler 희석액 간에 보존 온도별 차이를 조사하고, BF5 희석액에서의 글리세롤 농도의 효과를 조사하여 돼지 액상정액을 좀더 장기간 사용할 수 있는 방법을 찾고자 실시하였다. 돼지 액상정액을 5$^{\circ}C$ 냉장고에 보존하면서 조사한 바에 의하면, 37$^{\circ}C$에서 0.5 및 2시간 배양후의 정자운동성은 전체 보존기간동안 BF5 희석액이 Butschwiler 희석액보다 유의하게 (P<0.05) 높게 나타났고, 정상첨체비율은 두 희석액간에 차이가 없었다. 돼지 액상정액을 15$^{\circ}C$에 보존하면서 조사한 바에 의하면, 3일부터 7일 보존시 까지 정자운동성과 정상첨체비율에 있어서 Butschwiler 희석액이 BF5 희석액보다 유의하데 높게 나타났다. BF5 희석액을 이용한 돼지 액상정액의 글리세롤 농도의 효과에 있어서는 최종 글리세롤 농도가 0, 2, 3, 및 5% 보다 1%일 때 가장 높은 정자운동성과 정상첨체비율을 나타내었다. 분만율, 복당 생존자돈수 그리고 출생시 평균 생시체중은 BF5 희석애과 Butschwiler 희석액간에 차이가 없었다. 이상의 연구 결과를 종합해 볼 때 BF5 희석액을 5$^{\circ}C$에서 Butschwiler 희석액은 15$^{\circ}C$에서 6-7일 동안 돼지 액상정액을 보존할 수 있었다.

• Korean Journal of Animal Reproduction
• /
• v.20 no.1
• /
• pp.1-8
• /
• 1996

The objective of this study was to determine effects of oviductal fluid on the sperm penetration and subsequent in vitro development of porcine oocytes. The addition of oviductal fluid to the fertilization medium decreased sperm pen etration and the mean number of spermatozoa in penetrated eggs. The number of spermatozoa firmly bound to zona pellucida was also decreased in the presence of oviductal fluid. Chlortetracy cline (CTC) fluorescence patterns were used to determine incidence of capacitation and acrosome reaction. The proportion of capacitated a and acrosome free spermatozoa increased when spermatozoa were exposed for 1.5 and 3 h to oviductal fluid. These results suggest that the factor(s) in secretion from the oviduct reduces polyspermic fertilization and the number of spermatozoa that will penetrate porcine oocytes. The reduction of polyspermic penetration by oviductal secretions may be due to a reduced number of spermatozoa in the fertilization me-dium into an intact acrosome.