• Journal of Embryo Transfer
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• v.21 no.1
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• pp.21-27
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• 2006

This study was conducted to determine the distribution of cat follicles among varying ages and produce oocytes from preantral follicles cultured in vitro. We used ovaries from 41 cats ranging in age from 0.3 to 5 years. Ovaries were obtained from cats undergoing routine ovariectomy at local veterinary clinics. As a prelude to in vitro culture of preantral follicles, the length and the width and the weight of ovaries among cats of varying ages were measured. Ovaries were fixed in 10% formalin, embedded in paraffin, cut into $3{\mu}m$-sections, mounted on slides and stained with hematoxylin and eosin. Follicles were evaluated at 200X and 400X magnification. Distribution of follicles among cats of varying ages were evaluated according to follicle classification: primordial, primary, transitional, preantral and antral follicles. Preantral follicles were isolated by the simple mechanical procedure. Each follicle was cultured in a well containing $100{\mu}l$ of medium 199 supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) or polyvinylalcohol (PVA) for 16 days. Follicle diameters were measured under inverted microscope every 4 days. The length, the width and the weight of ovaries were increased gradually according to ages but there was not significant difference among cats of varying ages. Majority of follicles were primordial follicles (84%) regardless of cat ages (p<0.05). Follicle diameter increased until 4 days of culture. However, period longer than 4 days of culture in vitro had a deleterious effect on follicle survival regardless of supplement (FBS or PVA). A few oocytes were collected from preantral follicles cultured in vitro. These basic reproductive techniques in domestic cats can be a useful tool to save endangered feline species.

• Journal of Embryo Transfer
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• v.16 no.3
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• pp.183-191
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• 2001

This study was designed to establish the superior method for IVF embryos from DNA marker-proved Hanwoo cattle. DNA markers related to marbling score were identified using DNA fingerprinting with Ml3 probe and restriction enzyme Hae III. Oocytes were aspirated from unstimulated. immature ovarian follicles using a combined method of rectal ovarian-palpation and transvaginal ultrasound-guidance(6.5MHz) under local abesthesia. The aspirated oocytes were washed twice with fresh D-PBS containing 5% FBS and were rewashed 4 to 5 times with TCM-199 containing 5% FBS. A morphological grade of I to IV was assigned to each oocyte. Data were analysed using the GLM procedure of SAS. Mean number of follicles identified on ultrasound was 5.5 $\pm$2.9 in right and 4.3 $\pm$2.8 in left ovaries, respectively. The highest follicles(16.6$\pm$2.6) were found in 5101 cow compared to others. Recovery rate of follicular oocytes in individual cow was highest in 5101 cow with 89.3% in > 2mm and 94.0% in $\leq$ 2mm follicles. Total recovery rate was significantly(P<0.01) higher in $\leq$ 2mm(85.7%, 130/154) than > 2mm follicles(74.2%, 201/271). Significantly more oocytcs of Grade IV were recovered from > 2mm follicles. Mean number follicles recovered was 4.8$\pm$3.7. 3.0$\pm$3.4 and 0.3$\pm$0.6 in $\leq$2mm, 2~6mm and $\geq$6mm follicles. respectively. Our results imply that the more fertilizablc oocytes can be recovered from invisible-immature follicles by the combination of simultaneous rectal ovarian-palpation and ultrasound-guided approach in Hanwoo cattle.

• Proceedings of the KSAR Conference
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• 2001.03a
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• pp.33-33
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• 2001

본 연구는 한우 난포발달에 있어서 난포액 및 inhibin의 생리적 역할을 검토하기 위해 수행하였다. Anti-inhibin serum(AIS) 생산을 위해 사용된 항원은 porcine inhibin-$\alpha$-subunit 19~32의 peptide를 사용하여 adjuvant 용액을 1:3의 비율로 혼합하여 앙고라종 토끼 5두(체중 2.5kg)에게 주 2회 간격으로 8회 실시후 ELISA Leader로 항혈청의 역가를 확인하였다. 난포액(bFF; bovine follicular fluid)은 도축장에서 도축되는 한우 난소로부터 직경 1.0cm 이하의 난포로부터 회수하여 스테로이드를 제거하기 위해 10% chacoal solution(50 mg/$m\ell$, Norrit-A, Fisher Sci., USA)을 처리하여 45분간 배양후 원심분리후 상층액을 회수하여 실험에 공시하였다. 과립막세포의 체외배양을 위해 D-MEM용액(10% FCS와 antibiotics를 첨가)을 배양액으로 하여 1 $\times$ $10^{6}$ cells/$m\ell$로 조절하였다. 호르몬은 RIA 및 ELISA법으로 분석하였다. 그 결과 항원-항체반응은 항원처리후 24일째부터 항체가를 확인할 수 있었으며 52일째에서 높은 항원-항체반응을 보였다. 한편, 난포크기별 난포액의 progesterone 및 Estradiol-l7$\beta$을 농도를 분석한 결과, Progesterone 난포크기가 직경 1.0 cm부터 유의적으로 증가하기 시작하여 직경 2.0cm의 난포액에서는 높은 progesterone이 존재하고 있는 것으로 나타났다. 이에 반해, 난포크기별 난포액중 estradiol 17$\beta$농도는 직경 1.0cm구에서 가장 높게 나타났다. 난포직경이 1cm일 경우에 난포액내 etradiol-17$\beta$가 가장 많이 존재하고 있음이 나타났다. 과립막세포의 체외배양에서 배양 24시간에서는 과립막세포의 progesterone분비는 약 40ng/1$\times$$10^{6}$ cell/well/$m\ell$ 전후로 나타났으며 bFF 5%, AI 5% 및 bFF＋AI 첨가구에 따라 유의적인 차이는 없었다 반면에 48시간배양구에서는 24시간에 비해 유의적으로 높게 분비되었으며, bFF 5%처리구와 bFF5%＋AI5%처리구에서는 progesterone을 대조구보다 유의적으로 억제되었으나 AI 5%단독처리구에서는 대조구와 큰 차이가 없었다. 한편, 각 세포질을 SDS-PAGE로 분리하여 nitro cellulose membrane에 transfer하여 Western blotting법에 의해 검토한 결과, 직경 1.0 cm의 성숙난포의 granulosa cell에 특이하게 Inhibin이 존재하고 있음이 확인되었다. 이상의 결과로, 한우에 있어서 성숙난포에 존재하는 Inhibin은 난포발달 및 난포세포의 스테로이드호르몬합성에 중요하게 관여하고 있는 것으로 사료된다.

• Journal of Embryo Transfer
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• v.7 no.1
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• pp.1-12
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• 1992

본 연구는 소의 난포란의 체외성숙과 체외수정에 영향을 미치는 요인을 구명하기 위하여 미숙 난포란을 채취하여 형태적 분류를 통해 우수한 란을 공시한 후 난포의 크기, 정액의 형태, 수정능득법, 혈청, 호르몬, 난포액, 난구세포등을 첨가한 TCM-199 배양액에서 배양하면서 체외성숙 및 수정율을 조사하였는 바 그 결과는 다음과 같다. 1. 소 난포란을 채취하여 배양을 통해 형태적 분류를 했을때 A형란은 61.4%, B형란은 12.1%, C형란은 19.2%, D형란은 4.2%였으며 발생중지 또는 퇴화란은 3.0%였다. 또한 A, B, C형란을 배양액에 배양했을때 난포란의 체외성숙율은 각각 89.1%, 78.0%, 52.6%였으며, 수정율은 각각 78.1%, 66.1%, 33.3%였다. 2. 소 난포의 크기를 1-2mm, 3-5mm 및 5mm이상으로 분류하여 채취한 난포란의 수는 각각 67개, 98개, 63개 였으며, 이를 TCM-199 배양액에서 배양했을때의 체외성숙 및 수정율은 각각 56.7%와 44.8%, 82.5%, 72.4%와 46.0%와 28.6%였다. 3. 소 난포란의 체외수정에 있어서 정소상체 미부정자, 희택정액 및 동결정액을 이용하여 매정하였을때 체외수정율과 분할율은 각각 63.3%, 73.3%, 70.0%와 32.7%, 37.8%, 38.3%였다. 4. 소 난포란의 체외수정에 있어서 m-KRB 처리법, HIS처리법, Ca-IA처리법, BFF처리법 및 heparin처리법으로 각각 수정능획득을 유기하였을때 체외성숙 및 분할율은 각각 53.1%, 28.1%, 33.9%와 17.7%, 50.8%와 26.2%, 48.1%와 22.8% 및 58.8%와 32.8%로서 heparin 처리법이 가장 높았다. 5. 소 난포란의 체외성숙과 수정에 있어서 각 농도의 우태아혈청과 FSH, HCG, $\beta$-estradiol을 첨가한 TCM-199배양액에서 배양했을때의 체외성숙 및 수정율은 각각 76.0-82.3%와 26.2-70.0%로서 무첨가에 비해 첨가가 높았다. 6. 발정우혈청 및 우태아혈청 5-20%를 첨가한 배양액에서 배양했을때의 체외성숙율은 각각 71.7-76.9%, 74.0-80.6%였으며 체외수정율은 51.9-58%와 26.2-30.0%로서, 체외수정율의 경우 발정우혈청의 첨가가 우태아혈청의 첨가에 비해 높았다. 7. 난포액20-30%를 첨가한 배양액에서 배양했을때의 난포란의 체외성숙율은 각각 68.0%와 64.6%, 수정율은 각각59.6%와 60.4%로서 난포액10%, 50%를 첨가한 배양액에서 배양시의 체외성숙율과 수정율에 비해 높았다. 8. 1$\times$10 6 /ml의 난구세포를 첨가한 배양액에서 배양했을때의 난포란의 체외성숙율과 수정율은 각각 76.5%와 61.7%로서 FCS 10%와 1$\times$10 4 -10 5/ml 와 1 $\times$10 8/ml난구세포를 첨가한 배양액에서 배양시의 체외성숙율과 수정율에 비해 높았다.

• Journal of Radiation Protection and Research
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• v.37 no.4
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• pp.208-212
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• 2012

In previous studies, ovarian follicle in rat has been used a higher radiation dose than that for cancer radiotherapy in clinical practice. The aim of this study was to evaluate the effect of radiation dose used for cancer radiotherapy on ovarian follicle atresia in rat. Mice of 4-week-old female were whole body irradiated with 2 cGy or 2 Gy (Mevatron 67, Siemens, Germany) and sacrificed by cervical dislocation. Ovaries were collected at 24 hours after irradiation to observe the degree of follicular atresia. Ovaries were fixed in neutral formaldehyde solution for 24 hours and embedded with paraffin. Cutted in $5{\mu}m$ thickness with microtome and stained with hematoxylin and eosin (H&E) and TUNEL immunohistochemical stain, and examined histologically under a light microscope. All data were presented as mean ${\pm}SD$, calculating the ratio of normal or atretic follicles to total ovarian follicles. Statistical analysis was performed by the Mann Whitney test using the SPSS ver 19.0. Ratio of atretic to total follicles of 2 Gy group was significantly higher than control or 2 cGy groups (p<0.05). Ratio of normal to total follicles of 2 Gy group was significantly lower than control group in preantral follicle (64.0 vs. 87.7, p=0.027). Ratio of normal to total follicles of 2 cGy group was significantly increased more than control or 2 Gy groups in antral follicle, and there were no significant difference between control and 2 Gy groups (p=0.522). Radiation dose of 2 Gy for cancer radiotherapy have a significant effect on ovarian follicle atresia in rat.

• Proceedings of the Korean Nuclear Society Conference
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• 1998.05b
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• pp.730-734
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• 1998

난포성숙호르몬(FSH)은 난소내 난포의 성장인자로 작용한다. 본 실험은 방사선 조사된 미성숙 생쥐의 난포 폐쇄가 ESH에 의해 억제되는지를 확인하는 한편 방사선어제 개발을 위한 실험모델로서의 가능성을 평가하기 위해 수행되었다. PCNA 에 의한 염색의 정도는 FSH군의 경우, 1이에 최저, 12시간과 8일에 가장 많이 염색되었으며, 방사선을 조사한 후 ESH를 주사한 경우, PCNA에 의한 염색용은 6시간 경과시어 제일 낮게 나타나고 이후 증가하는 경향성을 보였다. 즉, FSH는 방사선에 피폭된 난소내 난포외 apoptosis를 지연시키는 효과를 갖고 있음을 알 수 있었다. 본 연구의 결과, 특정물질의 방사선방어효능 평가를 위한 실험모델로서 난소내 난포를 활용할 수 있으며 특히 FSH가 나타내는 난포폐쇄 억제효과도 방사선방어제 개발을 위한 실험연구에 중요한 역할을 할 것으로 기대된다.

• Proceedings of the KSAR Conference
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• 2004.06a
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• pp.246-246
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• 2004

암모니아는 murine과 sheep의 난자의 체외 배양 시 배 발달과 착상, 태아 발달에 영향을 미친다고 보고되어져 있다. 본 연구는 한우 난포의 크기에 따른 암모니아 농도 측정과 체외 성숙 시간에 따라 발생되는 암모니아의 농도가 배 발달율에 미치는 영향을 검토하였다. 도축장 유래 한우 난소의 직경(3 ㎜∼30 ㎜)난포에서 난포액을 채취하였으며, 그리고 각각의 체외 성숙 시간에 따라 배양액을 회수하였다. 암모니아 농도 측정은 ammonia Kit를 이용 spectrophotometer로 630 ㎚에 측정하였다. (중략)

• Development and Reproduction
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• v.4 no.2
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• pp.137-145
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• 2000

The regulatory mechanisms of the initiation and the formation of ovarian follicles during fetal stage of mammals are largely unknown. In addition to the gonadotropins secreted from pituitary, various growth factors, and steroid hormones are believed to be involved in the differentiation and initiation of growth of primordial follicles consisting of primordial germ cells migrated from yolk sac and streamed cells from mesonephric somatic cells. In human, primordial follicles that have already initiated differentiation at fetal stage undergo either folliculogenesis to ovulate or atresia after growth. Some of primordial follicles remain without growth for 50 years or longer. The objective of this paper is to review the mechanism of the formation, growth arrest, and initiation of primordial follicles in human fetal and neonatal ovaries.

• Proceedings of the Korean Society of Developmental Biology Conference
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• 2003.10a
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• pp.95-95
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• 2003

Inositol은 세포의증식 및 정보전달과정에 관여하는 phosphatidylinositol (PI)의 구성성분으로서 중요한 세포내 기능을 수행한다. P1는 세포내에서 특이적 인산화효소에 의하여 Pl4-phosphate(PIP), Pl4,5-phosphate($PIP_2$)로 변환되며 PIP$_2$는 phospholipase C(PLC)에 의하여 세포내 second messengers인 1,2-diacylglycerol (DAG)와 inositol 1,4,5-triphosphate ($IP_3$)로 변환된다. 이렇게 생산된 DAG와 IP3는 각각 protein kinase C의 활성과 $Ca^{2++}$의 동원에 관여하여 다양한 세포내 신호전달에 관여하는 것으로 보고되고 있다. 또한 mouse에서 $IP_3$의 작용에 의한 $Ca^{2++}$의 상승은 난모세포의 성숙분열이 촉진되고 돼지 난포세포에 있어서도 PI대사가 일어나고 있는 것으로 보고되고 있다. 본 연구에서는 돼지 미성숙 난모세포의 성숙과 단위발생에 미치는 inositol의 영향을 확인하기 위하여 실시하였다. inositol의 농도가 난포란의 성숙에 미치는 영향을 검토하기 위하여 난포란을 각각 $150 \mu mole$, $250 \mu mole$, $350 \mu mole$, inositol을 포함하는 Whitten's 배양액에서 44시간 성숙시킨 결과 $93.57 \pm 4.21, 93.91 \pm 2.71, 92.96 \pm 3.58%$가 성숙되어 대조구의 $87.10 \pm 4.21$보다 유의적(P<0.05)으로 차이를 나타내었다. 난포란의 등급에 따른 inositol의 영향을 확인하기 위하여 형태적으로 난구세포가 치밀한 난포란과 난구세포가 치밀하지 않은 난포란을 $250 \mu mole$ inositol을 포함하는 Whitten's 배양액에서 성숙을 유도한 결과 난구세포가 치밀한 난포란과 난구세포가 치밀하지 않은 난포란에서 inositol을 첨가하였을 때 성숙율은 각각 $95.35 \pm 2.22와 63.55 \pm 8.12$로 inositol을 첨가하지 않은 대조구보다($89.21 \pm 3.69와 48.56 \pm 8.99$) 유의적인 차이를 보였다. 난구세포가 inositol에 의한 성숙에 미치는 영향을 확인하기 위하여 난구세포를 제거한 난포란을 inositol을 포함하는 배지에서 성숙을 유도한 결과 inositol을 첨가하지 않은 처리구보다 양호한 성숙율을 보였다.

• Korean Journal of Clinical Laboratory Science
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• v.49 no.1
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• pp.40-47
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• 2017

Granulosa cells, which surround the oocyte within the ovarian follicle, play an essential role in creating conditions required for the development of oocytes and follicles. The solute carrier family (SLC) is comprised of influx transporters of steroidal hormones, various drugs, and several other substrates. The differential expression of selected DEGs was confirmed using in situ hybridization analysis. SLC23A3 and SLC39A10 were highly expressed in the ovary. The SLC39A10 gene was expressed in the primordial follicle stage, but SLC23A3 was expressed in the growing follicle stage. Contrastingly, the expression of SLC23A3 was increased in granulosa cells at the growing follicle stage. The differential expressions of SLC23A3 and SLC39A10 between the primordial and primary follicles were additionally confirmed by using follicle isolations. The gene expression profile from the present study may provide insight for future studies on the mechanism(s) involved in primordial-primary follicular transition and suggestions to promote follicular development in ovarian dysfunction.